EDTA-K2抗凝剂诱发血小板被吞噬导致计数减少的原因探讨分析

李少辉，于莹莹，张玉春

（漯河医专二附院检验科，河南 漯河462300）

EDTA-K2抗凝剂诱发血小板被吞噬导致计数减少的原因探讨分析

李少辉，于莹莹，张玉春

（漯河医专二附院检验科，河南 漯河462300）

目的 目的EDTA-K2引起血小板假性减少的原因。方法 利用Sysmex-1800i全自动血细胞分析仪对使用EDTAK2抗凝剂的血标本进行分析，血小板减少，立即进行推片、瑞氏染色发现血小板出现卫星现象及被中性粒细胞吞噬。同时针对同一病人使用枸橼酸钠抗凝管采血，血标本进行PLT检测，并进行比较。结果 EDTA-K2抗凝血测得PLT值有5例明显低于正常范围，枸橼酸钠抗凝血测得PLT值均在正常范围内。结论 EDTA-K2能促使某些人的PLT产生卫星现象及被中性粒细胞吞噬而导致PLT假性减少。

EDTA-K2；枸橼酸钠；血小板假性减少；血小板卫星现象及被中性粒细胞吞噬

乙二胺四乙酸（EDTA）能与血液中Ca2+结合成螯合物，而使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。EDTA-K2具有对血液标本中的细胞形态和计数影响非常小等优点，国际血液学标准化委员会（ICSH）1993年建议将EDTA-K2作为血常规检验的抗凝剂。随着全自动血细胞分析仪的推广使用，EDTA-K2在临床已广泛使用，但有一小部分EDTA-K2抗凝血血小板减少，血涂片可见血小板围绕中性粒细胞呈现卫星现象及被中性粒细胞所吞噬，使血小板计数明显低于实际数值，本科于2014 年1月-2015年12月，在血常规检测中发现5例典型病例，现分析如下。

1　材料与方法

1.1标本来源住院病人使用EDTA-K2抗凝剂的血标本血小板减少，图形分布异常5例。

1.2仪器与试剂Sysmex-1800i全自动血细胞分析仪及Sysmex公司配套试剂，湖南安信医疗高分子材料有限公司生产的真空采血管；上海科华公司生产的快速瑞氏染液。

1.3方法

1.3.1仪器法

1.3.2全血模式测定针对5位病人，分别用EDTA-K2抗凝管和枸橼酸钠抗凝管对同一病人在同一时间抽取静脉血1～2ml并混匀，同时采病人手指血做血涂片。混匀静置，分别对静置30min内，1h，2h的EDTA-K2抗凝血和枸橼酸钠抗凝血进行测定，按仪器标准操作规程在Sysmex-1800i全自动血细胞分析仪全血模式测定，分别记录PLT值。

1.3.3血涂片取静置30min内，1h，2h的EDTAK2抗凝血、枸橼酸钠抗凝血制作血涂片，与手指末梢血涂片一起进行瑞氏染色，在油镜下观察血小板形态。

2　结果

见表1、表2。

表1　5位住院病人不同时间内血小板的结果（×109/L）

3　讨论

从表1可以看出5例住院病人使用EDTA-K2抗凝，血小板计数偏低，仪器提示血小板异常分布，且随着时间的延长，血小板计数呈现下降的趋势。使用枸橼酸钠抗凝剂管复查，血小板计数基本都在正常范围之内，（由于枸橼酸钠与全血的比例大致在1：9，故血小板计数会较真实值稍偏低）直方图大致正常，且随时间的延长没有明显的变化趋势。考虑为“EDTA-K2依赖性血小板假性减少症（EDTA-PTCP）”和“血小板卫星现象”［1］血涂片瑞氏染色，如图1所示，5位患者EDTA-K2抗凝的血涂片可见血小板围绕中性粒细胞呈现 “卫星现象”，淋巴细胞及单核细胞胞体周围未见血小板围绕，部分血小板聚集，部分血小板散在分布。放置1h、2h 的EDTA-K2抗凝血涂片中，发现围绕中性粒细胞的血小板增多，血小板开始被中性粒细胞吞噬，随着时间的延长，被吞噬血小板的个数增加。相关文献报道抗凝时间越长、室内温度越低，血小板聚集呈卫星现象越严重，PTCP的发生越频繁［2］。5位患者的枸橼酸钠抗凝血及手指末梢血的涂片中，血小板散在分布，形态正常，数目较多，与血小板计数大致相符。EDTA-K2血涂片染色、枸橼酸钠血涂片染色与末梢血涂片染色比较见表2。血小板卫星现象及被白细胞吞噬是一种实验现象，它在实验条件下才会出现，而不是一种生理或病理现象。EDTA-K2抗凝剂引起血小板卫星现象及被白细胞吞噬，导致血小板计数假性降低，这种现象虽然少见，但遇到这种情况如果不予以纠正，及时和临床沟通，极易导致误诊。实验室在这种情况下可以采用枸橼酸钠或肝素抗凝管进行采血［3］，同时与临床医生及病人做好沟通，获得患者配合，结合外周血涂片进行分析，发放准确的检验结果。临床上为提高PLT的准确性，对血小板分布异常标本应使用核酸荧光染色法报告结果［4］。国外文献报道卡那霉素可以分散粘附在中性粒细胞的血小板［5］另据最新研究，阿米卡星可作为处理EDTA依赖的假性血小板减少的一线方法在临床普及［6，7］。

表2　5位住院病人不同时间内血涂片染色结果

图1　血涂片（瑞氏染色，油镜×1000）

原因分析：⑴EDTA-K2可使血液发生免疫介导，产生冷抗血小板抗体，这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体还能直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，同时这种与血小板结合后的自身抗Fc端又可于中性粒细胞膜上Fc受体结合，出现卫星现象而导致血小板计数偏低［1］。⑵通过激活补体系统如C3裂解产物C3b附着血小板表面，与中性粒细胞C3b受体结合血小板被吞噬。而导致血小板计数偏低［8］。⑶白细胞与血小板间也可通过黏附蛋白分子相互作用。研究表明，静止的血小板不能与中性粒细胞反应，但经凝血酶活化的血小板则以钙依赖的方式和中性粒细胞反应。Silverstein等报道凝血酶敏感蛋白（TSP）可以介导活化血小板与单核细胞的相互作用，因为白细胞与活化血小板表面均具有TSP的受体，即GPIV（CD36）。最近的研究表明GMP-140也可以介导活化血小板与中性粒细胞的相互作用，抗CMP-140单抗或GMP-140蛋白颗粒能抑制这种反应，GMP-140通过参与活化血小板与白细胞结合而导致血小板计数偏低［9］。⑷郭珊等认为电阻抗法不能完全将血小板与类似大小的物质，如红细胞或白细胞碎片等区分开，致使血小板计数误差大，采用EDTA-K2抗凝时，如采血后搁置，血小板会形成凝块，聚集的血小板体积增大，会被当做一个大血小板计数或者被误计数为小红细胞，使得血小板计数明显减少［10］。由于EDTA-K2可引起血小板发生卫星现象及被吞噬，导致血小板计数假性偏低，也可见于正常人，但多数情况下伴某些疾病，如癌症、血管炎、自身免疫性疾病（狼疮）、套细胞淋巴瘤、肺心病、肝病及一些原因不明的疾病［11］。国外文献报道一例泌尿系统感染的女性，发现血小板卫星现象，直到患者治愈三周后血小板卫星现象消失［12］。EDTA依赖的假性血小板减少也可以通过孕妇传播给新生儿，引起新生儿短暂的假性血小板减少［13］。EDTA-PTCP和血小板卫星现象虽然发生率不高，但应加以重视，对于血小板减少而无出血症状的患者，一定要用不同方法进行复查，以防误诊。

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R446.11+1，R558+.2

A

1674-1129（2016）04-0506-03

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（2016-03-31；

2016-06-22）