膀胱黏膜毒蕈碱型胆碱能受体密度与前列腺术后膀胱痉挛的相关性研究

廖彬，黄世旺，蔡旌槐，陈伟义，陈益民

（广东省潮州市人民医院 泌尿外科，广东 潮州 521000）

膀胱黏膜毒蕈碱型胆碱能受体密度与前列腺术后膀胱痉挛的相关性研究

廖彬，黄世旺，蔡旌槐，陈伟义，陈益民

（广东省潮州市人民医院 泌尿外科，广东 潮州 521000）

目的探讨膀胱黏膜毒蕈碱型胆碱能受体（M受体）M 2、M 3亚型的密度与前列腺电切术后膀胱痉挛的相关性。方法选取2012年5月-2015年5月医院收治的良性前列腺增生（B P H）患者作为研究对象，将其分为合并膀胱过度活动症（OA B）观察组和不合并OA B对照组，再将观察组分为发生膀胱痉挛组及不发生膀胱痉挛组，比较各组M 2、M 3受体的密度及其相关性。结果观察组术后膀胱痉挛的发生率高于对照组；观察组M 2、M 3受体密度均低于对照组；观察组中发生膀胱痉挛患者的M 3受体密度低于不发生膀胱痉挛患者的M 3受体密度。结论膀胱黏膜M 3受体密度与前列腺术后发生膀胱痉挛存在相关性，提示M 3受体可能参与膀胱痉挛的发病机制。

毒蕈碱型胆碱能受体；膀胱黏膜；膀胱痉挛；良性前列腺增生；膀胱过度活动症

良性前列腺增生（beni g n prostatic hyperplasia，B P H）是引起中老年男性排尿障碍最为常见的一种良性疾病。经尿道前列腺电切术（trans u rethral resection o f the prostate，T U R P）是治疗B P H的金标准［1］。然而T U R P术后患者容易发生膀胱痉挛，膀胱痉挛会加重术后出血及患者痛苦，如何预防及控制术后膀胱痉挛是困扰泌尿外科医生的难点。膀胱痉挛症状属于膀胱过度活动症（o v eracti v e bladder，O A B）范畴，有研究显示，约50%的B P H患者同时伴有O A B症状［2-3］，而B P H合并O A B患者行T U R P术后膀胱痉挛发生率高达20%～25%［4-5］。

目前毒蕈碱型胆碱能受体（以下简称M受体）阻滞剂是治疗O A B的一线用药，能够改善B P H患者的O A B症状，然而M受体阻滞剂如何缓解O A B症状的作用机制至今仍未明确［6］。近年来有研究发现，B P H合并O A B患者膀胱黏膜的M受体中M2、M3亚型受体密度比无O A B症状的B P H患者明显降低，且与其发生O A B症状的严重程度存在相关性［7］。那么，膀胱黏膜M2、M3亚型受体的密度是否与T U P R术后发生膀胱痉挛存在相关性，M受体阻滞剂能否改善术后出现的膀胱痉挛症状，目前的相关报道较少。

1　资料与方法

1.1临床资料

回顾性分析本院2012年5月-2015年5月收治的B P H患者共80例。将其分为B P H合并O A B组（观察组）40例和B P H组（对照组）40例，使用O A B评分表，将尿急症状项目大于或等于2分定义为B P H合并O A B组，尿急症状项目0分者定义为B P H组。将观察组中术后突然出现阵发性耻骨上区及尿道疼痛，膀胱冲洗管一过性受阻，伴或不伴有膀胱内液体返流至冲洗管或从尿道管周围流出（排除膀胱血块堵塞）的患者定义为膀胱痉挛组［8］，不发生上述症状的患者定义为不发生膀胱痉挛组。

1.2纳入及排除标准

1.2.1纳入标准①符合《2014版中国泌尿外科疾病诊断治疗指南》中B P H的诊断标准；②前列腺特异性抗原＜4μg/L；③膀胱残余尿量＞100ml；④存在行前列腺电切术手术指征患者；⑤年龄60～80岁；⑥签署知情同意书，同意加入本研究项目。

1.2.2排除标准①术后病理诊断考虑前列腺癌患者；②糖尿病患者；③严重尿路感染。尿常规白细胞≥强阳性（+++）或脓球≥弱阳性（+）的患者；④存在神经源性膀胱功能障碍的患者；⑤近期曾使用M受体阻滞剂治疗的患者；⑥患有精神疾病或存在语言障碍的患者。

1.3方法

1.3.1标本的获取通过膀胱镜活检取得膀胱顶部的黏膜组织标本。

1.3.2膀胱黏膜的大小及保存方法每位患者均取3块组织，每块组织约3mm×4 mm×4 mm（5～20 m g）。将取得的标本放入组织冻存管，并迅速投入液氮中冷却。手术结束后将标本置入-80℃的冰箱冷冻保存。

1.3.3实验分析前的标本处理将所有组织标本做成病理切片，行苏木精-伊红染色确认为膀胱黏膜组织。

1.3.4使用的试剂及仪器Tri z ol试剂（美国I n v itro g en公司），Thermo S cript R T-PC R S ystem（美国I n v itro g en公司），B rilliantⅡ S YB R g reen Q PC R k it（美国S trata g ene公司），实时荧光定量聚合酶反应（q R T-PC R）仪（美国S trata g ene公司），微量核酸蛋白定量仪（美国Nanodrop公司），微量加样器（德国Eppendor f公司），低温高速离心机（德国Eppendor f公司），凝胶成像分析系统（法国V L公司），恒温循环水浴箱（美国Thermo公司）等。

1.3.5q R T-P C R提取标本总R N A，保证R N A纯度及行R N A的完整性鉴定（见附图），参照Thermoscript R T-PC R S ystem说明书，通过逆转录反应获得cDN A片段，设计好荧光定量PC R引物，在检测M2 和M3受体的R N A的同时，利用引物对每个标本进行检测，从而校正不同标本之间因R N A总量或逆转录反应效率差异等因素所致的数据差异。使用荧光定量仪做数据分析，绘制荧光定量PC R标准曲线，根据标准曲线标化M2、M3受体基因的拷贝数，最后将得到的标化的M2和M3基因拷贝数作为M2和M3受体密度进行统计分析。

1.4指标观察

附图　RN A鉴定

测定所有患者膀胱黏膜M2、M3受体的密度及术后发生膀胱痉挛的发生率，分析膀胱黏膜M2、M3受体的密度与术后发生膀胱痉挛的相关性。

1.5统计学方法

采用S P SS 18.0统计软件进行数据分析，M2及M3的R N A值用中位数和四分位间距表示［M（P25～P75）］，定性资料用χ2检验进行分析，定量资料用两独立样本的秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1术后膀胱痉挛发生率的比较

本研究80例手术均顺利完成。观察组与对照组术后膀胱痉挛的发生率经χ2检验，差异有统计学意义。提示B P H合并O A B患者术后更容易发生膀胱痉挛。见表1。

2.2M2、M3受体密度的比较

两组M2、M3受体标化的基因拷贝数应用两独立样本的秩和检验，差异有统计学意义，提示B P H合并O A B患者M2、M3受体密度比B P H患者降低。见表2。

2.3M 2、M 3受体密度与术后发生膀胱痉挛的相关性

表1　两组术后膀胱痉挛的发生率比较 （n=40）

表2　两组M 2、M 3受体密度的比较　［n=40，M（P25～P75）］

表3　观察组中术后膀胱痉挛组与不发生膀胱痉挛组M 2、M 3受体密度比较　M（P25～P75）

为分析观察组患者的M2、M3受体密度是否与术后发生膀胱痉挛存在相关性，笔者将观察组再分为术后膀胱痉挛组及术后不发生膀胱痉挛组，两组的M2、M3受体密度比较见表3，B P H合并O A B患者无论术后是否发生膀胱痉挛，M2受体密度并不存在差异性，而M3受体密度却存在差异性，提示M3受体可能参与术后发生膀胱痉挛的发病机制。

3　讨论

M受体分为M1～M5 5个亚型［9］。已有研究证实人类的膀胱逼尿肌中存在所有的M受体亚型，其中M2、M3受体的R N A占绝大多数［10］。既往的研究认为，M受体阻滞剂通过阻断膀胱逼尿肌M受体（主要是M2和M3亚型），抑制逼尿肌过度收缩［11］，从而改善B P H患者的O A B症状，但是无法解释已抑制患者的逼尿肌收缩，却很少有B P H患者因服用M受体阻滞剂而出现排尿困难加重甚至出现尿潴留。近年来的研究发现膀胱黏膜同样存在M受体的5个亚型，其中主要的受体亚型仍然是M2、M3受体。那么M受体阻滞剂是否通过抑制膀胱黏膜的M受体，从而缓解O A B症状的呢？这是近年来研究的热点。

关于膀胱黏膜M受体的报道较多。有相关研究发现膀胱黏膜上的M受体密度与膀胱逼尿肌的M受体密度相似［12］，刺激膀胱黏膜的M受体可导致尿路上皮源性的抑制因子释放，从而调节逼尿肌的收缩［13-14］，膀胱黏膜的M受体在O A B的发生机制中起着重要作用［15-16］。M受体阻滞剂不仅作用于膀胱逼尿肌的M受体，而且对膀胱黏膜M受体的抑制也起着重要作用［17］。大量的动物实验研究发现，M受体阻滞剂的主要作用可能是通过抑制膀胱传入通路上传入神经的活性，从而减弱膀胱黏膜对乙酰胆碱的敏感性［18-20］。以上的研究结果均提示膀胱黏膜上的M受体与O A B的发生密切相关。

那么，做为属于O A B范畴的膀胱痉挛症状是否与M2、M3受体密度存在相关性呢？在本研究的观察组中笔者发现膀胱痉挛患者的M3受体密度明显降低，结合既往的研究发现膀胱黏膜对激动M受体引起的的逼尿肌收缩反应存在抑制作用［14-15］，笔者认为，膀胱黏膜可能存在一种保护作用，在B P H合并O A B的病理状态下，膀胱黏膜发挥其保护作用，通过减少M受体的密度，降低膀胱黏膜对乙酰胆碱的敏感性，缓解O A B症状，然而B P H合并O A B的患者因膀胱黏膜中M受体的过度减少，特别是M3受体亚型的减少可能导致术后更容易发生膀胱痉挛，M3受体在前列腺电切术后发生膀胱痉挛的发病机制中可能起着重要的作用。

综上所述，M受体阻滞剂如何缓解O A B症状的作用机制是相当复杂的。本研究中B P H合并O A B行经尿道前列腺电切术术后发生膀胱痉挛的患者膀胱黏膜的M3受体密度明显下降，至少说明M3受体密度对术后发生膀胱痉挛的影响。虽然目前仍然缺乏膀胱黏膜M受体在疾病状态下是如何发挥作用的研究，但作为与前列腺电切术后发生膀胱痉挛相关的M3受体却可以作为研发新药的靶点，高选择性的M3受体阻滞剂对预防和控制经尿道前列腺电切术术后发生膀胱痉挛可能起着更加有效的作用。

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（申海菊 编辑）

Correlation study between density of muscarinic receptors in bladder mucosa and bladder spasm after prostate surgery

Bin Liao，Shi-wang Huang，Jing-huai Cai，Wei-yi Chen，Yi-min Chen
（Department of Urology，the People's Hospital of Chaozhou City，Chaozhou，Guangdong 521000，China）

Objective To analyze the correlation of the bladder spasm after prostate surgery and the density of M2 and M3 muscarinic receptors in bladder mucosa.M ethods Patients with benign prostatic hyperplasia（BPH）in our hospital from May 2012 to May 2015 were enrolled as research objects and divided into observation group［BPH with overactive bladder（OAB）］and control group（BPH without OAB）.And then the observation group was further divided into bladder spasm subgroup and non-spasm subgroup.The density of M2 and M3 receptors were determined and their correlations with bladder spasm were analyzed.Results The rate of bladder spasm of the observation group was higher than that of the control group.The density of M2 and M3 muscarinic receptors of the observation group was lower than that of the control group.The density of M3 muscarinic receptor in the bladder spasm subgroup was lower than that in the non-spasm subgroup. Conclusions There is a correlation between bladder spasm after prostate surgery and density of M3 muscarinic receptor in bladder mucosa，suggesting M3 receptor may be involved in the pathogenesis of bladder spasm and it can be used as a target to design drugs for prevention and control of bladder spasm.

muscarinic receptor；bladder mucosa；bladder spasm；benign prostatic hyperplasia；overactive bladder

R 697.32

B

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.020

1005-8982（2016）15-0106-04

2015-12-28