柿叶不同有效部位对链脲佐菌素致2型糖尿病大鼠糖代谢的影响

曹 旭，童圣灵，赵 雷

柿叶不同有效部位对链脲佐菌素致2型糖尿病大鼠糖代谢的影响

曹 旭，童圣灵，赵 雷

目的 研究柿叶不同溶剂萃取部位对2型糖尿病大鼠糖代谢的影响，以寻找柿叶降血糖作用的有效部位。方法 雄性SD大鼠随机选择8只作为正常对照组，其余72只高脂高糖饲料喂养1个月后，腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）30 mg/kg，建立2型糖尿病模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、盐酸二甲双胍组（0.11 g/kg）、石油醚萃取物组、二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物组和萃余物组，连续灌胃给药28 d（对照组、模型组灌胃等体积蒸馏水），1次/d。于给药前及给药7、14、21、28 d测定各组体重及空腹血糖值（fasting blood glucose，FBG），末次给药后眼眶取血测定糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin，HbA1c）、血清胰岛素（fasting serum insulin，FINS），计算胰岛敏感指数（insulin sensitivity index，ISI）和稳态模型评估法（homeostasis model assessment，HOMA）计算胰岛素抵抗（Homa insulin resistance，HOMA-IR）指数。结果 （1）与模型组比较，柿叶二氯甲烷萃取物及萃余物均能够降低 FBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR指数，并升高ISI，差异均有统计学意义（P＜0.05）；（2）二氯甲烷萃取物组在给药7、14 d后FBG及末次给药后HbA1c、FINS较盐酸二甲双胍组无统计学差异，但Homa-IR指数、ISI与其比较有统计学差异（P＜0.05）。结论 柿叶二氯甲烷萃取物可能是柿叶降血糖的主要药效部位。

柿叶；萃取物；2型糖尿病大鼠；糖代谢

柿叶为柿树科（Ebenaceae）柿树属Diospyros L.植物柿D. kaki Thunb.的新鲜或干燥叶［1］，具有清热解毒、润肺强心、镇咳止血、抗癌防癌等作用［2］。柿叶作为药用始载于明朝《滇南本草》，曰“经霜叶敷臁疮”；《本草再新》记载用于“治咳嗽吐血，止渴生津”；以后诸家本草及医（药）书也多有收载。现代药理研究也表明柿叶具有良好的降血糖效果［3-6］。本研究从糖代谢角度对柿叶不同溶剂萃取部位对糖尿病大鼠糖代谢的影响进行探讨，旨在探寻柿叶在糖尿病模型中具有降糖作用的主要有效部位，为降糖新制剂的开发奠定一定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药材与试剂 柿叶采集于江苏省扬中市，经江苏吉贝尔药业股份有限公司郦红岩高级工程师鉴定为植物柿D. kaki Thunb.的新鲜或干燥叶，低温干燥后备用。

盐酸二甲双胍片（中美上海施贵宝制药有限公司，批号AAE9241）；链脲佐菌素（美国Sigma公司，批号SLBB7526V）；糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin，HbAlc）全自动免疫比浊试剂盒、胰岛素放射免疫分析试剂盒购于南京建成生物工程研究所；血糖试纸条（美迪信，批号SPF15Z3B1）。其余试剂均为分析纯，均在有效期内使用。

1.1.2 动物 雄性SD大鼠80只，清洁级，体重（240±20）g，购自江苏大学动物实验中心［合格证号：SCXK（苏）2009-0002］。饲养室温度25～26 ℃，湿度65%～70%，自由摄食和饮水，并给予12 h光照和黑暗循环，适应性饲养7 d后用于实验。

1.1.3 仪器 LK-1000A高速中药粉碎机（新昌县城关红利数控制备厂）、旋转蒸发仪（南京金正科学仪器有限公司）、高速冷冻离心机（美国Sigma公司）、美迪信血糖仪（天津亿朋医疗器械有限公司）、全自动免疫比浊检测仪（美国贝克曼公司）。

1.2 方法

1.2.1 不同溶剂萃取部位的制备 将柿叶用高速中药粉碎机粉碎，过药典三号筛，得干燥柿叶粉末。将其用70%乙醇，按8倍药材质量的溶剂量，浸泡1.5 h后，80℃水浴回流提取2次，2 h/次，合并滤液，减压浓缩为浸膏。取浸膏适量，加蒸馏水调节生药浓度为1 g/ml，依次用3倍体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，各3次，分别合并萃取液，于45 ℃下减压浓缩，冷冻干燥得柿叶石油醚部位、柿叶二氯甲烷部位、柿叶乙酸乙酯部位。将上述萃取后的剩余水溶液经AB-8大孔吸附树脂，用水洗至柱下液澄清，再用95%乙醇洗至柱下液澄清，收集洗脱液减压浓缩，冷冻干燥得柿叶剩余部位，即柿叶萃余物。

1.2.2 2型糖尿病大鼠模型建立 80只大鼠适应性喂养7 d后，随机选择8只大鼠作为正常对照组，其余用于糖尿病造模。正常对照组大鼠用普通饲料喂养，造模组用高糖高脂饲料（含10%猪油、20%蔗糖、1%胆酸盐、2.5%胆固醇、66.5%普通饲料）喂养，饲养30 d后，禁食12 h，按30 mg/kg剂量一次性腹腔注射链脲

1.3 统计学处理 应用 SPSS 19.0 统计软件对实验数据进行统计分析，计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 一般情况 正常对照组大鼠的摄食量和饮水量正常，反应灵敏，皮毛有亮泽，精神状态良好，体重增长；与正常对照组相比，模型组大鼠反应迟钝、萎靡懒动、皮毛枯黄，摄食量和饮水量较对照组明显增加，且排尿增多，体重较低。给药28 d后，各给药组大鼠情况较模型组各方面情况均有所好转，饮水摄食趋于正常，活动量增加，精神状态好转，体重有所增长（图1）。

2.2 各组大鼠FBG的比较 各组FBG在给药前（F=107.321，P＜0.001）及给药7、14、21、28 d后差异均有统计学意义（F=101.566，P＜0.001；F=151.244，P＜0.001；F=191.270，P＜0.001；F=191.828，P＜0.001）。佐菌素（streptozotocin，STZ）溶液。继续高脂高糖饲料饲养7 d后，禁食过夜，尾静脉取血测空腹血糖（fasting blood glucose，FBG），以FBG≥11.1 mmol/L为2型糖尿病模型的标准［7，8］。

1.2.3 分组和给药 造模成功的糖尿病大鼠随机分为模型组、盐酸二甲双胍（0.11 g/kg）组以及石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物和萃余物（均折合生药2.0 g/kg）组，每组8只。盐酸二甲双胍的剂量依据用药说明书中人体用量转化为大鼠用量确定，各萃取物的量按照《中华本草》中柿叶的人体用量转化为大鼠用量确定。对照组和模型组均灌胃等体积蒸馏水。所有动物均连续给药28 d，1次/d。

1.2.4 一般情况观察 观察各组大鼠一般生理情况，包括摄食量、饮水量、毛色及活动状态等，并分别于给药前及给药7、14、21、28 d后测定各组大鼠的体重。

1.2.5 FBG的测定 分别于给药前及给药7、14、21、28 d后禁食6 h，尾静脉取血后采用美迪信血糖仪检测各组大鼠FBG。

1.2.6 HbAlc和FINS的测定 末次给药后，禁食12 h，眼眶后静脉丛取血，取乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA）抗凝全血按照全自动免疫比浊试剂盒的操作说明测定 HbAlc；取全血经离心机3200 r/min离心10 min得血清，采用放射免疫法测定血清FINS，计算胰岛敏感指数（insulin sensitivity index，ISI）和稳态模型评估法（homeostasis model assessment，HOMA）计算胰岛素抵抗（Homa insulin resistance，HOMA-IR）指数。HOMA-IR=FBG×FINS/22.5；ISI=ln［1/（FBG×FINS）］。进一步两两比较结果显示，与模型组相比，盐酸二甲双胍组、二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物组及萃余物组FBG在给药7、14、21、28 d后均显著降低（P＜0.05）。与盐酸二甲双胍组相比，二氯甲烷萃取物组FBG在给药7、14 d后差异无统计学意义（P=0.379；P=0.211），而在给药21、28 d后差异有统计学意义（P=0.008；P=0.001）；其他萃取物组与盐酸二甲双胍组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

图1 各处理组大鼠给药前及给药7、14、21、28 d后体重变化

2.3 各组HbA1c和FINS的比较 各组HbA1c（F=15.308， P＜0.001）、FINS（F=11.801，P＜0.001）、Homa-IR（F=180.905，P＜0.001）、ISI（F=27.515，P＜0.001）之间的比较，差异具有统计学意义。进一步两两比较显示：与模型组相比，盐酸二甲双胍组、二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物组及萃余物组HbA1c及Homa-IR均显著降低（P＜0.05）；盐酸二甲双胍组、二氯甲烷萃取物组和萃余物组FINS均显著降低而ISI均显著升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与盐酸二甲双胍组相比，二氯甲烷萃取物组HbA1c、FINS均无统计学差异，而Homa-IR、ISI与其比较差异具有统计学意义（P=0.021；P=0.035）；其他萃取物组各指标与其比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

3 讨 论

糖尿病是一种常见的有遗传倾向的内分泌系统疾病，是由多种原因引起糖、脂肪、蛋白质代谢紊乱，可导致全身组织器官，如眼、肾、心血管及神经系统的损害及其功能障碍，严重者可引发酮症酸中毒和高渗昏迷。目前，市场上的化学降糖药作用强，起效快，但不良反应较多，可累及全身器官或各大系统，最常见的为胃肠道反应，严重的主要发生在心血管、免疫和内分泌系统中，包括室性早搏、低血糖性昏迷、过敏性休克、全身剥脱性皮炎甚至死亡［9，10］。而中药作用较为温和，且一般无不良反应或者不良反应较轻，这正为临床上使用安全有效的降血糖药物提供了广阔的前景。

表1 柿叶不同萃取物对糖尿病大鼠FBG的影响

表2 柿叶不同萃取物对糖尿病大鼠HbA1c、FINS、Homa-IR和ISI的影响

2型糖尿病多以胰岛素抵抗为主，因胰岛素抵抗、胰岛素敏感性降低，血中胰岛素增高以补偿其胰岛素抵抗，但相对患者而言，胰岛素分泌仍相对不足。作为糖尿病常用的检测指标，FBG反映胰岛β细胞功能，HbA1c反映一段时间内平均的血糖水平，FINS、ISI、HOMA-IR指标反映胰岛素的抵抗及敏感程度，从上述研究思路出发，本研究选用上述指标评估分析柿叶的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取物及萃余物对2型糖尿病大鼠模型的血糖代谢水平、胰岛素抵抗及敏感性的影响。

本实验通过高脂高糖饲料喂养加小剂量腹腔注射STZ致2型糖尿病大鼠模型，进而研究柿叶不同萃取部位对糖尿病大鼠糖代谢及胰岛素抵抗的作用，并将各萃取部位的药效与阳性对照药盐酸二甲双胍进行比较。结果显示，与模型组相比，二氯甲烷萃取物组和萃余物组大鼠经过28 d给药治疗后FBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR均显著降低，ISI明显升高，差异均有统计学意义。与阳性对照药相比，二氯甲烷萃取物组在给药7、14 d后FBG及末次给药后HbA1c、FINS较盐酸二甲双胍组无统计学差异，但Homa-IR、ISI与其比较有显著差异。本研究结果提示柿叶的二氯甲烷萃取物可能是柿叶降血糖的主要药效部位，其作用可能与盐酸二甲双胍的降糖作用相当，但其药效部位中的成分分析鉴定有待今后进一步的深入研究。

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（2016-08-08收稿 2016-08-30修回）

（责任编辑 付 辉）

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Effect of different effective parts of persimmon leaves on glucose metabolism in rats with type 2 diabetes mellitus induced by streptozotocin

CAO Xu， TONG Shengling， and ZHAO Lei. Jiangsu Jibrier Pharmaceutical Joint Stock Limited Liability Company， Zhenjiang 212009， China

Objective To explore the effect of different extracts of persimmon leaves on glucose metabolism in rats with type 2 diabetes mellitus， so as to find the effective part of persimmon leaves with antidiabetics effects. Methods 8 male SD rats were randomly selected as the normal control group， the rest were intragastrical（ig） administered with high fatty and sugar diet for 1 month， and type 2 diabetic rat model was established by intraperitoneal injection streptozotocin （STZ） 30 mg/kg. Rats with type 2 diabetes mellitus were randomly divided into model group， metformin hydrochloride （0.11 g/kg） group， and persimmon leaves extracts groups of petroleum ether，dichloromethane， ethyl acetate， and raffinate. All animals were ig administered once daily for 28 days （the control group and model group were ig administered equal volume of distilled water）. Weight and fasting blood glucose （FBG） were determined before treatment and after treated 7， 14， 21 and 28 days. After the last administration， the blood samples were collected to measure the glycosylated hemoglobin（HbA1c） and fastings erum insulin （FINS）， and insulin sensitivity index （ISI） and Homa insulin resistance （HOMA-IR） index were calculated. Results （1） Compared with model group， both dichloromethane extract group and raffinate extract group could significantly reduce the indexes of FBG， HbA1c， FINS， HOMA-IR and increase ISI index （P＜0.05）； （2） Compared with metformin hydrochloride group，differences of FBG in dichloromethane extract group after treated 7， 14 days， and HbA1c and FINS in that group after the last administration had no statistical significance， but differences of HOMA-IR and ISI between two groups were statistically significant （P＜0.05）. Conclusions Dichloromethane extracts may be the main effective part of persimmon leaves with antidiabetics effects.

persimmon leaves；extracts；type 2 diabetes mellitus rats；glucose metabolism

R285.5

10.13919/j.issn.2095-6274.2016.10.008

曹 旭，硕士，工程师，E-mail：15952858172@126.com

212009 镇江，江苏吉贝尔药业股份有限公司