细菌培养法联合检测流行性脑膜炎奈瑟氏菌的临床研究

赵灿河南省周口市第六人民医院，河南周口　466000



细菌培养法联合检测流行性脑膜炎奈瑟氏菌的临床研究

赵灿
河南省周口市第六人民医院，河南周口466000

［摘要］目的探究细菌培养法联合检测流行性脑膜炎奈瑟氏菌的临床效果。 方法本文研究对象均选自2014年10 月-2015年10月自愿参加研究的432例健康人群的流行性脑膜炎奈瑟氏菌样品，对所有受检者采用普通PCR法检测技术和传统的细菌培养法，分析检测结果。结果采用单纯细菌培养法的受检者有267例，共检出7株脑膜炎奈瑟氏菌，2株B群，1株X群，2株C群，有2份不可分群的流脑菌株出现在血清上。采用细菌培养法和普通PCR法有165例，其中检出12株脑膜炎奈瑟氏菌，检出5株B群，3株X群，2株C群，1株W135群，不可分群现象不存在。结论在流行性脑膜炎奈瑟氏菌的检测中应用普通PCR法检测技术和传统的细菌培养法效果显著，能有效提高脑膜炎奈瑟氏菌的检出率和实验室检测能力，值得应用和推广。

［关键词］细菌培养法；流行性脑膜炎；奈瑟氏菌

流行性脑膜炎是一种急性呼吸道传染病，发病与流行时间一般在冬春季，这种病症是由于脑膜炎奈瑟球菌在呼吸道传播引起的，是一种化脓性脑膜炎［1-2］。脑膜炎发病十分迅速，死亡率也非常高，会留下较严重的后遗症。为了更好地防治这种疾病，首先必须将这种脑膜炎奈瑟氏菌给检测出来，了解居民这种流行性脑膜炎奈瑟氏菌的带菌情况，为实际的临床治疗提供参考

1　资料与方法

1.1一般资料

432例研究对象均为2014年10月-2015年10月期间到我院进行健康体检的人员，并将其分为两组，其中采用细菌培养法检测的有267例，采用细菌培养法联合普通PCR法检测的165例，细菌培养法检测中，男122例，女145例，年龄27～69岁，平均年龄（41.92± 19.15）岁；普通PCR法联合细菌培养法检测中男性90例，女性75例，年龄25～71岁，平均年龄（40.82±18.77）岁，所选研究对象均对本研究知情，并自愿参与本实验，排除具有严重心、肝、肾等器官肿瘤疾病以及炎症感染的人群。两组研究对象的基本资料比较无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。本研究已提交医院伦理学会审批并获准。

由Therm公司生产二氧化碳培养箱，由美国ABI公司生产ABI7500荧光定量PCR仪。由赛默飞世尔生物化学制品有限公司提供巧克力双抗琼脂平板，中国药品生物制品检定所提供脑膜炎奈瑟氏菌诊断血清，美国Gibical公司生产2×PCR Pre-mix、分子级无菌纯水，青岛海博技术有限公司提供化鉴定所用试剂，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成特异引物，具体可参照国家疾控中心扩增，如引物为orf-2f，引物序列：5'cgcaataggtatatatattcttcc-3'，扩增片段长度为400bp，鉴定特性为NmA群。

1.2方法

1.2.1细菌培养法 采用无菌棉拭子拭擦对悬雍垂后鼻咽部黏膜处，立即接种预温的双抗巧克力琼脂血平板，成功接种后送到保温箱保温后再送入检验室，之后送入检验室。检验人员要在检验室中挑取直径1～2 mm的半透明、湿润、灰白色的菌落，将其放置于带有5%二氧化碳的培养箱中进行培养18～24 h，挑取涂片染色，根据镜检结果发现要进一步分离鉴定革兰阴性双球菌患者及氧化酶试验阳性患者所携带的细菌。

1.2.2普通PCR法和细菌培养法相结合采用无菌棉拭子拭擦对悬雍垂后鼻咽部黏膜处，立即接种预温的双抗巧克力琼脂血平板，成功接种后送到保温箱保温后再送入检验室，检验人员要在检验室中挑取直径1～2 mm的半透明、湿润、灰白色的菌落，将其放置于带有5%二氧化碳的培养箱中进行培养18～24 h，挑取涂片染色，通过镜检可得知，根据镜检结果发现要进一步分离鉴定革兰阴性双球菌患者及氧化酶试验阳性患者所携带的细菌，采用水煮法提取不发酵乳糖、蔗糖的菌落。取100～200 μL纯水和一定量的新鲜培养物相互混浊，沸水煮20 min后1000 rpm离心5 min提取上清液吸，最后做成DNA模板。

1.3统计学分析

采用SPSS19.0进行统计学分析，两种检测方式的检出结果采用（%）表示，行Χ2检验，P＜0.05表示两组数据比较具有统计学意义。

2　结果

采用单纯细菌培养法的受检者有267例，共检出7株脑膜炎奈瑟氏菌，2株B群，1株X群，2株C群，有2份不可分群的流脑菌株出现在血清上。采用细菌培养法和普通PCR法有165例，其中检出12株脑膜炎奈瑟氏菌，检出5株B群，3株X群，2株C群，1株W135群，不可分群现象不存在。两组比较差异显著（P＜0.05）。见表。

3　讨论

流行性脑膜炎是由脑膜炎双球菌引起的化脓性脑膜炎，即致病菌由鼻咽部逐渐侵入血循环，形成败血症后局限于脊髓膜和脑膜，患者多出现呕吐、皮肤瘀点、发热、头痛等脑膜刺激征等临床症状［3-4］。该病发病迅速，病死率达到20%且有严重后遗症［5］。临床表现多分为轻型和普通型，其中轻型多见于流脑流行时，有轻微病变，患者多出现轻微头痛、低热、咽痛等上呼吸道症状临床表现，存有脑膜刺激征及皮肤出现少数细小出血点，脑脊液无多无明显变化，通过咽拭子培养发现病原菌［6-8］。细菌培养法下的流行性脑膜炎奈瑟氏菌检出率是比较低的，这种方法对诊断血清质量、实验室环境以及实验室工作人员有着密切的关系，受限制性条件较多［9］。而本次实验重点探讨的PCR法与细菌培养法联合检测法，该法能够更加直观地检测出这种病菌，具有较高的检出率。本文研究结果显示，采用单纯细菌培养法的受检者有267例，共检出7株脑膜炎奈瑟氏菌，2 株B群，1株X群，2株C群，有2份不可分群的流脑菌株出现在血清上。采用细菌培养法和普通PCR法有165例，其中检出12株脑膜炎奈瑟氏菌，检出5株B群，3株X群，2株C群，1株W135群，不可分群现象不存在。由此说明，细菌培养法与诊断血清质量、人员因素及实验室环境条件有着紧密联系，因此才会出现较低的检出率，而细菌培养法联合普通PCR法检测流行性脑膜炎奈瑟氏菌，检测结果有着更强的直观性，上述两种检测方法联合应用可提高流行性脑膜炎奈瑟氏菌的检出率。研究结果中有1份不可分群的株菌分群为W135，主要是通过特异性基因扩增，也正是这群呈现出扩增阳性的群特异性基因才出现了上述结果。然而这种特异性基因中有滑移错配、缺失等现象，表现为不可分群血清，其荚膜也不能得到正常表达。谢国勇［10］等学者的相关研究成果表明，在直接涂片法、细菌培养法、PCR检测法3种检测法中，PCR检测法的灵敏度最高、特异性最强，是临床检测奈瑟氏菌的理想方法，与本研究研究结果相一致。

表1　　细菌培养法和联合培养法检测结果

综上所述，在流行性脑膜炎奈瑟氏菌的检测中应用普通PCR法检测技术和传统的细菌培养法效果显著，能有效提高脑膜炎奈瑟氏菌的检出率和实验室检测能力，值得应用和推广。

［参考文献］

［1］郭莹.普通PCR法与细菌培养法相结合检测流行性脑膜炎奈瑟氏菌［J］.临床合理用药杂志，2014，11（20）：123-124.

［2］郭琍，黄志峰，任结梅等.广东省近两年流行性脑膜炎奈瑟氏菌菌群分布及药敏性结果分析［J］.今日药学，2011，21 （12）：764-765.

［3］吕锡亮.2011年和2012年某医院细菌耐药监测情况分析［J］.医药论坛杂志，2013（3）：132-133.

［4］金湘东.洛阳市2004—2009年流行性腮腺炎流行特征及学校内疫情分析［J］.医药论坛杂志，2011，12（9）：89-90.

［5］Lydiane Agier，Hélène Broutin，Eric Bertherat et al.Timely detection of bacterial meningitis epidemics at district level：a study in three countries of the African Meningitis Belt.［J］. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene，2013，107（1）：30-36.

［6］Andes，David，Casadevall，Arturo.Insights into fungal pathogenesis from the iatrogenic epidemic of Exserohilum rostratum fungal meningitis［J］.Fungal Genetics and Biology，2013，61（22）：143-145.

［7］贺爱民，陈文萍.4例C群脑膜炎奈瑟氏菌感染的分离培养及药敏分析［J］.实用医技杂志，2008，15（27）：3814-3815.

［8］李漫时，王敏，颜丙玉，等.2005年山东省部分健康人群脑膜炎奈瑟氏菌带菌状况调查［J］.预防医学论坛，2009，14 （1）：47-48.

［9］王珊珊，杨越，王婷婷，等.A群流行性脑膜炎球菌多糖含量检测免疫速率比浊方法的建立及验证［J］.中国生物制品学杂志，2015，28（9）：970-972.

［10］谢国勇，余进胜.淋病奈瑟氏菌3种检测方法的结果对照思路［J］.当代医学，2014，11（17）：27-28.

［中图分类号］R446

［文献标识码］A

［文章编号］2096-1782（2016）01-0010-03

［作者简介］赵灿（1970.10-），男，河南周口人，本科，副主任医师，研究方向：地方病。意见。本文特选取2014年10月-2015年10月期间到我院进行体检的432例健康人群作为研究对象采用细菌培养法和普通PCR法检测技术，获得良好的检出率，现报道如下。

收稿日期：（2015-12-15）

Bacterial culture method combined detection of neisseria meningitidis epidemic of clinical research

ZHAO Can
HeNan province Zhoukou people's hospital of six，466000

［Abstract］Objective To explore the bacterial culture method combined detection of epidemic Neisseria meningitidis clinical effect.Methods The study object of this article were selected from October 2014 and 2015 in October voluntarily participate in the study of 432 cases of healthy population of epidemic Neisseria meningitidis samples，on all subjects by normal PCR detection technology and the traditional bacterial culture method，analysis of the test results. Results Using pure bacterial culture method in subjects with 267 cases，detected a total of 7 strains of Neisseria meningitidis，2 strains of group B，1 strain x group，2 strains of group C，2 copies of clustering of epidemic cerebrospinal meningitis strains appeared in the serum.By bacterial culture method and conventional PCR of 165 patients，which were detected in 12 strains of Neisseria meningitidis，detection of 5 strains of group B，3 strains of group x，2 strains of group C，1 strains of serogroup W135，clustering phenomenon does not exist.Conclusion In the detection of epidemic Neisseria meningitidis application general PCR detection technology and the traditional bacterial culture method has significant effect，can effectively improve the detection rate and laboratory testing capabilities of Neisseria meningitidis，worthy of application and promotion.

［Key words］Bacterial culture method；Meningitis；Neisseria