益肾法对原发性高血压患者血管内皮细胞NO-NOS系统的影响*

首都医科大学附属北京天坛医院中医科

贾春蓉　王文娟△(北京 100051)



益肾法对原发性高血压患者血管内皮细胞NO-NOS系统的影响*

首都医科大学附属北京天坛医院中医科

贾春蓉王文娟△(北京 100051)

提要目的：探讨益肾中药对原发性高血压患者血管内皮细胞一氧化氮—氧化氮合成酶(NO-NOS)系统的影响。方法：观察30例原发性高血压患者采用益肾法治疗前后血清一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合成酶(NOS)活力及NOS含量的变化。结果：益肾法治疗后，患者NO含量、NOS活力及NOS含量明显提高(P<0.05)。结论：益肾法通过对NO-NOS系统的调控，从而降低高血压对血管内皮细胞(VEC)的损伤。

关键词益肾法；杞菊地黄丸；右归丸；原发性高血压；血管内皮细胞；NO-NOS系统

研究表明，高血压、高血脂、高血糖等心血管危险因素均可导致血管内皮细胞(VEC)受损。[1]VEC受损后，其内分泌功能失调，导致其分泌的活性物质与其相关的其他物质之间的平衡被打破，从而导致心血管系统功能障碍。[2]因此，如何保护和修复VEC损伤，延缓心脑血管疾病的发展，是临床急需解决的课题。本课题组前期研究结果显示，益肾法能明显促进受损VEC增殖，有效保护其形态和超微结构。为进一步明确益肾法保护VEC的作用机制，本研究从一氧化氮(NO)一氧化氮合成酶(NOS)系统入手，观察益肾中药对原发性高血压患者血管内皮的影响。

1资料与方法

1.1病例选择

1.1.1诊断标准及辨证标准：⑴西医诊断，参照1999年WHO/ISH四次高血压指南中的高血压诊断标准和临床分期标准；⑵中医辨证，参照1995年中华人民共和国卫生部制定发布的《中药新药临床研究指导原则》第二辑中肾阴虚证、肾阳虚证及肾阴阳两虚证的辨证标准。

1.1.2病例纳入标准及排除标准：参照2002年中国医药科技出版社《中药新药临床研究指导原则》中“中药新药治疗高血压病的临床研究指导原则”的纳入及排除标准。⑴纳入标准：符合高血压病西医诊断标准及中医辨证标准；年龄在18～65岁之间；以II期高血压为主要观察对象。⑵排除标准：年龄在18岁以下或65岁以上；妊娠或哺乳期妇女；继发性高血压；合并有心、脑、肝、肾和造血系统等严重原发疾病、精神病患者；过敏体质或对多种药物过敏者。

符合以上纳入标准的患者30例，男17例，女13例，年龄(46.8±11.2)岁。

1.2治疗方法采用益肾中药治疗前后自身对照，治疗观察原发性高血压30例。偏肾阴虚证以杞菊地黄丸(枸杞子、菊花、熟地黄、山茱萸、生山药、牡丹皮、茯苓、泽泻)为基础方，偏肾阳虚证以右归丸(熟地黄、附子、肉桂、山药、山茱萸、菟丝子、鹿角胶、枸杞子、当归、杜仲)为基础方，偏肾阴阳两虚证以二者合方为基础方。头晕头痛甚者加天麻、川芎；恶心呕吐者加清半夏、生赭石；眠差者加珍珠母、夜交藤；便干者加酒大黄、槟榔。随证加减。每日1剂，水煎，早晚分2次温服，治疗4周为1个疗程。要求患者治疗期间按时服药。

1.3观察指标

1.3.1血压：于治疗前、治疗第1、2、3、4周分别检测血压。采用台式水银柱血压计测定坐位右上臂血压，测前休息10 min，SBP(收缩压)取Korotkoff第1音，DBP(舒张压)取第5音，共测3次，重复测量时间间隔2 min，取平均值。

1.3.2中医证候：参照《中药新药治疗高血压病的临床研究指导原则》中的症状分级量化标准，对患者治疗前后眩晕、头痛、急躁易怒、腰酸、膝软、五心烦热、畏寒肢冷、面赤、目赤、口干、口苦、便秘、溲赤、心悸、失眠、耳鸣、健忘、舌淡、食少、气短、夜尿频等中医证候进行分级量化评分。

1.3.3血样检测：治疗前后抽取患者静脉3 mL，室温静置2～4 h，2 500 r/min离心20 min分离血清，分别检测NO含量、NOS活力及NOS含量。⑴NO含量检测：采用南京建成NO试剂盒(硝酸还原酶法)检测血清中NO含量。⑵NOS活力检测：采用南京建成NOS测定试剂盒(分光光度法)检测血清中NOS活力。⑶NOS含量检测：采用ELISA法检测血清中NOS含量。

2结果

2.1血压治疗前后的比较患者血压治疗后降低，与治疗前比较，差异有非常显著性(P<0.001)。详见表1。

2.2临床症状积分值治疗前后的比较患者临床症状积分值(分)治疗后降低，与治疗前比较，差异有显著性(P<0.05)。详见表1。

表1　血压、临床症状积分值治疗前后比较

注：与治疗前比较,* P<0.05，**P<0.001

2.3血清NO含量、NOS活力及NOS含量治疗前后的比较血清NO含量、NOS活力及NOS含量治疗后均有不同程度的升高，与治疗前比较，差异有显著性(P<0.05)。详见表2。

表2 血清NO含量、NOS活力及NOS含量治疗前后浓度比较

时间NO/μmol·L-1NOS/U·mL-1NOS3/U·mL-1治疗前53.60±21.80 25.28±6.26 12.35±3.15 治疗后65.00±23.90*31.42±4.32*17.98±5.06*

注：与治疗前比较，* P<0.05

3讨论

高血压是临床常见病、多发病，长期的高血压状态会引起血管内皮细胞的损伤，最终导致一系列心血管疾病的发生，甚至危及生命，因此减少VEC损伤也是治疗高血压的一项重要任务。中医学认为高血压的形成与肝肾阴虚，虚火上扰有关，同时又可因肾阳不足，无以鼓动阳气，清窍失养而成。杞菊地黄丸是在大补肾阴的六味地黄丸的基础上加用补养肾阴的枸杞子与清利头目的菊花而成，整方补肾阴而清虚火，从而达到清降血压之功。右归丸则以附子、肉桂、鹿角胶为君药，温补肾阳，填精补髓；臣以熟地黄、枸杞子、山茱萸、山药滋阴益肾，养肝补脾，取自阴中求阳之意；佐以菟丝子补阳益阴，固精缩尿；杜仲补益肝肾，强筋壮骨；当归补血养肝。诸药配合，共奏温补肾阳，填精益髓，充降血压之力。本课题组前期研究结果显示，益肾法在降压的同时，还能明显促进受损VEC增殖，有效保护其形态和超微结构，从而可延缓心脑血管疾病的发生。为了进一步明确益肾法保护VEC的作用机制，本研究从NO-NOS系统入手，观察益肾中药对原发性高血压病患者血管内皮的影响，从而明确其保护作用机制。

近20年来，西药在改善VEC功能方面的研究进展迅速。血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体阻断剂、他汀类药物、抗血小板药、内皮素受体拮抗药、血栓素A2( TXA2) 拮抗药等药物的作用的发挥是通过不同途径，如抑制氧化应激减少活性氧类(ROS) 的产生，减缓NO 的灭活失效，改善一氧化氮合成酶mRNA 的稳定性，减少血浆内皮素-1( ET-1) 的合成以及ET-1mRNA 的表达等，来预防、改善、修复血管内皮功能的失调。[3]但相关的诸多药物都是兼具该作用，并无专门防治VEC损伤、改善内皮功能失调的药物。

益肾法是中医临床常用的一种治法。临床研究表明，该法在治疗心血管疾病方面疗效确切，如益肾法治疗冠心病，可消除症状，明显改善心电图，同时不影响患者心率、血压，无明显副作用；[4-5]治疗动脉粥样硬化，能提高血管弹性，降低患者颈动脉厚度，缩小其动脉粥样硬化斑块的面积和厚度；[6]治疗高脂血症，能明显降低总胆固醇水平，并可升高高密度脂蛋白水平。[7]实验研究表明，益肾法治疗动脉粥样硬化，可通过抑制血管细胞黏附分子表达、发挥抗氧化作用、直接促进VEC的增殖调控等方面而对VEC起保护作用；[8-10]治疗高脂血症，可通过调节凝血、纤溶系统的平衡，调节血管收缩与舒张因子的平衡，抗氧化作用等来改善血管内皮功能；[11-13]治疗冠心病，可通过调节血管舒缩物质来改善内皮功能障碍；[14-15]治疗高血压，可调节血管活性物质之间的协调平衡，逆转高血压心室重塑。本研究结果显示益肾法可降低血压，改善症状，并提高NO含量、NOS活力及NOS含量，说明益肾法通过对NO-NOS系统的调控，从而降低高血压对VEC的损伤，可为临床应用益肾法防治心血管疾病血管内皮损伤提供科学的依据。

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(2015-10-16收稿)

Effect of Kidney-tonifying Therapy on VEC NO-NOS System inPatient with Primary Hypertension

TCM Department in Beijing Tiantan Hospital of Capital Medical University

JIAChun-rongWANGWen-juan(Beijing 100051)

AbstractObjective: to explore the effect of Chinese medicine of kidney-tonifying on VEC (vascular endothelial cell) NO-NOS system in patients with primary hypertension. Methods: Observe the changes of NO level, NOS activity and NOS level in 30 cases with primary hypertension before and after treatment with kidney-tonifying therapy. Results: After treatment, NO level, NOS activity and NOS level increased significantly (P<0.05). Conclusion: Kidney-tonifying therapy can reduce the damage on VEC through regulating NO-NOS system.

Key wordskidney-tonifying therapy； Qi Ju Di Huang Wan (Lycii and Chrysanthemi and Rehmanniae Bolus)； You Gui Wan (youguipill)； primary hypertension； VEC (vascular endothelial cell)； NO-NOS system

通讯作者：王文娟，女，副教授，医学博士。

中图分类号：R259.441

文献标识码：A

文章编号：1007-5615(2016)02-0009-03

*首都医科大学基础-临床科研合作项目：No.10JL19

△首都医科大学中医药学院