“乌芷跌打膏”的药效学研究

黄颖花，冶冬阳，李日飞，王培祥,李引乾*

(1.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100；2.靖边县百草堂中医诊所，陕西靖边 718500)



“乌芷跌打膏”的药效学研究

黄颖花1，冶冬阳1，李日飞1，王培祥2,李引乾1*

(1.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100；2.靖边县百草堂中医诊所，陕西靖边 718500)

摘要：本研究通过建立二甲苯致小鼠耳壳肿胀模型、醋酸腹腔注射致小鼠疼痛模型、家兔骨折模型，观察“乌芷跌打膏”的抗炎、镇痛、促进骨折愈合作用效果。结果显示，“乌芷跌打膏”对二甲苯所致的小鼠耳壳肿胀有显著抑制作用,对腹腔注射醋酸引起的小鼠疼痛有显著抑制作用,对手术所致家兔骨折的愈合有促进作用。

关键词：中药；乌芷跌打膏；耳壳肿胀模型；骨折模型；药效学

近年来，中药越来越受到人们的青睐和关注[1]。中药在抗炎、镇痛和治疗骨折方面有着独特疗效[2]。论文拟对中药“乌芷跌打膏”进行药效学研究，观察其抗炎、镇痛和对促进骨折愈合作用[3-4]，为临床合理用药提供依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物昆明系小鼠，体重18 g～20 g，购自西安交通大学实验动物中心；家兔，体重2.5 kg±0.15 kg，由西北农林科技大学实验动物中心提供。

1.1.2主要药品及试剂乌芷跌打膏(百病无忧膏)为靖边县百草堂中医诊所研制(批号：20131002)；巴米尔阿司匹林泡腾片为阿斯利康制药有限公司产品(批号：H32026200)；二甲苯为天津博迪化工股份有限公司产品(批号：20130320)；脱毛剂(8 g/L硫化钠溶液)为天津科密欧化工股份有限公司产品(批号：20130820)；6 mL/L醋酸溶液为天津科密欧化工股份有限公司产品(批号：20130220);速眠新注射液为吉林省华牧动物保健品有限公司提供(批号：20120210);甲醛为天津博迪化工股份有限公司产品(批号：20131126);硝酸为天津博迪化工股份有限公司产品(批号：20130115)。

1.1.3试验器材游标卡尺，1 mL注射器，小鼠灌胃器，剪刀，线锯，X光机，光学显微镜等。

1.2方法

1.2.1抗炎作用观察取小鼠24只，随机分为A、B、C 3组，每组8只，雌雄各半。A组为空白对照组，每只小鼠灌服生理盐水0.2 mL；B组以100 mg/kg的剂量灌服阿司匹林约0.2 mL；C组以80 g/L的硫化钠溶液脱去小鼠腹部被毛，涂抹温热软融化的“乌芷跌打膏”适量于脱毛处。以上给药40 min后，涂抹二甲苯于小鼠一侧耳壳的正反两面，每只0.05 mL～0.1 mL，1 h后以游标卡尺测量小鼠耳壳中部厚度，记录数据，并对阿司匹林组和“乌芷跌打膏”组与空白对照组分别进行多重比较，检验数据均运用SPSS软件进行统计学处理。

1.2.2镇痛作用观察取小鼠24只，随机分为A、B、C 3组，每组8只，雌雄各半。A组为空白对照组，每只小鼠灌服生理盐水0.2 mL；B组以100 mg/kg的剂量灌服阿司匹林约0.2 mL；C组以80 g/L的硫化钠溶液脱去小鼠腹部被毛，涂抹温热软化的“乌芷跌打膏”适量于脱毛处。以上给药40 min后，各组小鼠均腹腔注射6 mL/L醋酸0.2 mL/只，观察10 min内各组出现扭体反应(腹部内凹、伸展后肢、臀部抬高)的小鼠只数，按照下面的公式计算各药的镇痛百分率。

1.2.3促进骨折愈合作用观察

1.2.3.1骨折模型建立将60只家兔随机分为“乌芷跌打膏”外敷治疗组和空白对照组两组，每组30只，公母各半。以脱毛剂脱去家兔前肢手术部位被毛，用速眠新注射液以0.2 mL/kg的剂量肌肉注射将动物麻醉。手术暴露前肢一侧桡骨，轻微剥离桡骨中段骨膜，用两条线锯并拢将桡骨中段锯断，造成2 mm骨缺损，尺骨不做骨折，缝合切口。给药组将“乌芷跌打膏”温热软化后外敷于骨折处周围，无菌敷料包扎，以小夹板固定，3 d～4 d换药1次；空白组不给药，其他处理同给药组。

1.2.3.2术后观察两组家兔分别于手术后2周～4周在相同条件下进行骨折端X线拍片，观察骨痂出现的时间、数量和钙化情况。制订骨折愈合标准：“-”表示无骨痂形成；“+”表示骨折边缘趋向模糊，有少量骨痂出现；“++”表示骨折边缘明显模糊，有中等量骨痂出现；“+++”表示骨折边缘接近消失，有较多量骨痂出现；“++++”表示骨折边缘基本消失，已完全连接，有大量密度高的骨痂出现，密度接近常骨。记录治疗结果并进行统计学分析。

1.2.3.3组织学观察两组家兔分别于手术后2周～4周，每组随机抽样10只剖检观察。组织学检查：切取带骨痂标本，100 mL/L甲醛固定，100 g/L硝酸脱钙，石蜡包埋、切片，HE染色，光镜下观察。根据骨折断端间肉芽组织、纤维组织、软骨骨痂和新骨增生规律，按主要成分所占比例予以病理分级。0级：未愈合，断端间只有肉芽组织或纤维组织；Ⅰ级：初步愈合，以软骨为主，有少量新骨；Ⅱ级：愈合良好，软骨、新骨各半；Ⅲ级：骨性愈合，新骨多，有少量软骨。记录结果进行统计学分析。

2结果

2.1抗炎作用观察结果

给药40 min后，小鼠耳壳两面涂抹二甲苯后，立即出现发红现象，1 h后测量空白组小鼠耳壳中部厚度，平均值为0.595 mm±0.053 mm，“乌芷跌打膏”处理组为0.524 mm±0.060 mm。该药组方中的的白芷、大黄、连翘等具有袪风止痛，消肿排脓的作用。统计学分析表明，阿司匹林组和“乌芷跌打膏”组均与空白组差异显著(P<0.05)，而阿司匹林与“乌芷跌打膏”之间差异不显著(P>0.05)，说明“乌芷跌打膏”具有明显的抗炎作用(表1)。

2.2镇痛作用观察结果

空白对照组小鼠腹腔注射6 mL/L醋酸后，约3 min～5 min后出现强烈的扭体反应，镇痛率为0(0/8)。“乌芷跌打膏”组在腹腔注射6 mL/L醋酸后，15 min内小鼠未出现明显异常，镇痛率为100%(8/8)；阿司匹林组小鼠在腹腔注射6 mL/L醋酸后，10 min内有两只小鼠出现轻微的扭体反应，其他小鼠活动正常，镇痛率为75%(6/8)。经过对小鼠镇痛作用的观察表明，3个处理组当中以“乌芷跌打膏”的镇痛作用最好(表2)。

2.3促进骨折愈合作用观察

给药组愈合情况好于空白组，但两组间愈合情况经统计学分析，差异不显著(P>0.05)。第4周给药组骨折愈合良好，两组间愈合情况经统计学分析，差异极显著(P<0.01)(表3)。从表4组织学愈合等级观察，第2周给药组愈合情况好于空白组，但两组间愈合情况经统计学分析，差异不显著(P>0.05)。第3和4周给药组骨折愈合良好，且两组间愈合情况经统计学分析，差异显著(P<0.05)。

表1　各处理组小鼠耳壳肿胀厚度

注：“*”表示差异显著(P<0.05)。

Note: "*" Shows significant difference(P<0.05).

表2　“乌芷跌打膏”对小鼠的镇痛作用(扭体法)

表3　“乌芷跌打膏”外敷治疗组和空白对照组X线愈合等级结果

表4　“乌芷跌打膏”外敷治疗组和空白对照组组织学愈合等级结果

3讨论

3.1“乌芷跌打膏”的抗炎效果

研究通过对3组小鼠分别进行灌服等量生理盐水、阿司匹林和涂抹温热软融化的“乌芷跌打膏”，40 min后，涂抹等量二甲苯于小鼠一侧耳壳的正反两面，测量发现1 h后测量空白组小鼠耳壳中部厚度，平均值为0.595 mm±0.053 mm，阿司匹林组为0.502 mm±0.078 mm，“乌芷跌打膏”处理组为0.524 mm±0.060 mm。统计学分析表明，阿司匹林组和“乌芷跌打膏”组均与空白组差异显著(P<0.05)，而阿司匹林与“乌芷跌打膏”之间差异不显著(P>0.05)，说明“乌芷跌打膏”具有明显的抗炎作用。

3.2“乌芷跌打膏”的镇痛效果

对小鼠腹腔注射6 mL/L醋酸，引起腹腔深部大面积且较持久的疼痛刺激，致使小鼠出现“扭体”反应，该方法是筛选非甾体抗炎药镇痛作用的一种敏感耳简便的方法[5-8]。“乌芷跌打膏”组镇痛率为100%，阿司匹林组镇痛率为75%，空白对照组镇痛率0，3个处理组当中以“乌芷跌打膏”的镇痛作用最好。“乌芷跌打膏”组方中乌药、川乌、草乌、白芷、血竭等具有行气活血、消肿止痛、散结化瘀的功效。从川乌以及草乌中可以提取得到毒性十分强的乌头碱等，它们可用于治疗心腹冷痛、头风头痛、寒湿痹痛、跌打伤痛[9]，具有很好的镇痛效果。

血竭是活血化瘀类中药，对损伤性疼痛、炎性疼痛及术后疼痛均有明显的消肿止痛作用，尤其治疗瘀血性疼痛效果更加显著，适用于各种扭伤、损伤、骨折、痛经等。“乌芷跌打膏”中的一些药物成分，能够减少P 物质在中枢的放出，从而达到镇痛作用[10-11]。

3.3“乌芷跌打膏”对骨折愈合的影响

骨折愈合是一个遵循特定再生模式和涉及几千个基因表达的复杂生物学过程[12]。中医理论认为骨折初期，瘀血留滞，瘀血不去，新血不生。恶血留内，经络受阻，治疗应活血化瘀。“乌芷跌打膏”中的赤芍、血竭、鹰爪、当归等均有活血、化瘀、通络之功效。在活血化瘀基础上，配以白芷、白及等有助于理气、消肿生肌的药物，使损伤得以恢复。瘀去而新生，气促血运，软骨痂减少而骨性骨痂大量增生，骨折愈合加速。故而“乌芷跌打膏”能加速骨折断端血液循环，促进骨折愈合。目前的研究结果一致认为，中药促进骨折愈合的机理通过改善血液循环、纠正血液流动状态及抗凝过程来实现的[13-14]。

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Study on Pharmacodynamics of "uzhi Dieda Ointmeat"

HUANG Ying-hua1, YE Dong-yang1, WANG Pei-xiang2, LI Ri-fei1, LI Yin-qian1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine，NorthwestA&FUniversity，Yangling，Shaanxi，712100，China;2.TheChineseMedicineClinicofThatchedCottageinJingbianCounty，Jingbian，Shaanxi，718500，China)

Abstract:Three models were established in this research,including mouse auricular swelling model induced by xylene,mouse pain model induced by intraperitoneal injection of acetic acid and rabbit fracture model. The effects of "Wuzhi dieda ointmeat" on anti-inflammation, analgesia, promoting fracture healing were observed. The results showed that "Wuzhi dieda ointmeat" significantly inhibited the auricular swelling induced by xylene and intraperitoneal injection of acetic acid-induced pain in mice.Meanwhile, the ointment promoted the healing of fracture in rabbits.

Key words:Chinese herbal medicine; "Wuzhi dieda ointmeat"; auricular swelling model; fracture model; pharmacodynamics

收稿日期：2015-12-03

作者简介：黄颖花(1985-)，女，陕西西安人，硕士研究生，主要从事兽医药理学研究。 *通讯作者

中图分类号:S853.7

文献标识码:A

文章编号:1007-5038(2016)06-0080-04