2 638例细胞DNA定量分析法筛查宫颈癌的意义

刘国生　王晓亮　郑建琼　曾守逵　周维



2 638例细胞DNA定量分析法筛查宫颈癌的意义

刘国生王晓亮郑建琼曾守逵周维

［摘要］目的通过DNA定量分析法筛查恩施地区社区妇女宫颈病变的发病情况，明确其在筛查及预防宫颈癌变的作用。方法对2013年12月至2014年11月在湖北民族学院附属民大医院自愿免费参加宫颈疾病普查的恩施州社区妇女，采用宫颈刮片采集宫颈脱落细胞样本进行分析。结果2 638例普查者中，发现异倍体细胞和异倍体细胞峰以及细胞异常增生共131例，占4.97%，经病理确诊为宫颈上皮内瘤样病变（cervical intraepithelial neoplasias，CIN）45例，细胞DNA定量分析阳性患病率34.35%。结论采用细胞DNA定量分析法能及早发现宫颈癌前病变，通过妇女宫颈癌及癌前病变筛查可提高宫颈病变检出率。

［关键词］细胞DNA定量分析；筛查；宫颈病变

作者单位：湖北民族学院附属民大医院医学检验科，湖北，恩施445000

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌［1］。而在我国，其发生率和病死率明显高于西方发达国家，究其原因，与缺乏对适龄妇女宫颈癌前病变的早期筛查和及时正确的进行医学干预有着十分密切的关系。原位癌的高发年龄约为30岁～35岁，浸润癌约为45岁～55岁，近年来宫颈癌发病有年轻化的趋势［2］。大量的研究与实践表明，严重危害妇女健康的宫颈癌，是唯一一种可采用医学干预手段使其发病率和死亡率下降的人类恶性肿瘤［1-2］。随着宫颈癌的细胞学检测技术和方法不断提高与发展，宫颈癌检出率有明显提高。DNA异倍体细胞的改变，是诊断宫颈癌及癌前病变的一个客观、早期、敏感、特异性的指标［2］。伴随着近些年来宫颈细胞学筛查的普遍使用，宫颈癌和癌前病变的二级预防早发现、早治疗落实得越来越好，宫颈癌的发病率和死亡率已经明显降低［3］。为探讨细胞DNA含量及特征分析对筛查宫颈病变的价值，本研究选择2 638例行宫颈癌筛查的受试者，行细胞DNA倍体分析，并对异常者进行病理学检测，以期及早发现宫颈癌前病变，提高检出率。现将结果报告如下：

1　材料与方法

1.1一般资料

1.1.1研究对象

选择恩施州2013年12月至2014年11月自愿免费来湖北民族学院附属民大医院参加宫颈疾病筛查的社区妇女2 638例，年龄20岁～83岁，平均年龄44岁。其中30岁以下169例，平均年龄28.5岁；31岁～40岁854例，平均年龄35.5岁；41岁～50岁918例，平均年龄46.5岁；51岁～60岁629例，平均年龄54岁；61岁及以上者68例，平均年龄63.5岁。

1.1.2仪器与试剂

武汉兰丁医学高科技有限公司提供的全自动细胞DNA定量分析仪（兰丁细胞CT）、全自动细胞图象分析系统、宫颈刷和配套试剂富尔根（Feul⁃gen）DNA染液。

1.2研究方法

1.2.1标本采集方法

采用宫颈刷采集宫颈脱落细胞样本，将样本浸泡在样本收集瓶固定液内，旋紧瓶盖后震荡摇晃，贴上条码标签，于常温及时送医学实验室。

1.2.2制片与染色

玻片经粘附剂处理，取沉渣加悬浮液震荡混匀，混匀后滴片，制片后用富尔根（Feulgen）DNA染色，然后上机做细胞DNA定量分析诊断。

1.2.3细胞DNA定量分析

所有Feulgen染色片用武汉兰丁全自动细胞图像分析系统进行扫描处理，并由定量分析诊断软件自行进行结果判定。

1.2.4病理学检查

筛查中凡细胞DNA定量分析结果建议活检的对象，均进行阴道镜检查并对可疑部分进行4点以上的组织取材，送重庆金域医学检验公司进行病理学检测。

2　结果

2.1宫颈上皮细胞DNA定量分析图

经武汉兰丁细胞DNA定量分析系统对2 638例患者标本进行检测后，可生成3种不同的细胞DNA定量分析检测图：（1）未见异倍体细胞、异倍体细胞峰及异常细胞增生，大多数细胞DNA指数（DNA index，DI）DI=1，个别细胞DI=2，且没有DI〉2.5的细胞，建议定期进行正常筛查（2～3年）（图1A）。（2）可见个别DNA倍体异常细胞，即DI〉2.5，或可见少量细胞增殖比例在5%～10%，但不包括10%，大多数细胞DNA指数依然等于1，建议4～6个月进行复查，以明确原因（图1B）。（3）可见 3个细胞DI〉2.5，或可见异常增生细胞 10%及细胞异倍体峰，建议行阴道镜检查并对可疑组织进行取材，行病理学检查（图1C）。

2.22 638例妇女宫颈脱落细胞DNA倍体筛查结果

本研究共筛查2 638例，正常结果2 236例，占84.76%；建议复查271例，占10.27%；建议活检131例，占4.97%。具体结果见表1。

2.3131例妇女宫颈脱落细胞活检后病理结果

在本组筛查数据中，共有131例经细胞DNA定量分析呈阳性者，行阴道镜检查并对可疑组织进行取材，经专家切片、病理学检测，发现轻度异型增生（mild cervical intraepithelial neoplasias，CIN⁃Ⅰ）（图2B）、中度异型增生（moderate cervical in⁃traepithelial neoplasias，CIN⁃Ⅱ）（图2C）和重度异型增生（severe cervical intraepithelial neoplasias，CIN⁃Ⅲ）（图2D）患者共45例，包括癌前病变者42例，鳞状细胞癌或腺癌（图2E）病变者3例，阳性检出率为34.35%。结果见表2。

3　讨论

表1　2 638例妇女宫颈脱落细胞DNA倍体筛查结果（n）Table 1 The DNA ploidy screening results of cervical exfoliated cells in the 2 638 cases（n）

表2　131例妇女宫颈脱落细胞活检后病理结果（n）Table 2 The biopsy pathologic results of cervical exfoliated cells in the 131 cases（n）

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，主要是因持续感染人乳头瘤状病毒（human papilloma vi⁃rus，HPV）引起，最常感染的HPV亚型是HPV6、HPV11和HPV51［4］。宫颈癌是目前惟一病因明确、可以有效筛查阻止其发生的肿瘤。随着社会的发展，人们对宫颈癌二级预防的意识不断增强，自行宫颈癌筛查的受试者日益增多［5］。细胞形态学检查虽是宫颈癌与宫颈上皮内瘤样病变（cervi⁃cal intraepithelial neoplasias，CIN）筛查的主要方法之一，但因形态学检查所具有的局限性，和长时间阅片导致的视觉疲劳问题，造成敏感性相对较低，重复性较差以及较多意义不明的判片结果［6］。细胞DNA定量分析检测宫颈癌及癌前病变的诊断在国外有大量的文献报道，国内使用细胞DNA定量分析检测方法和诊断已在开展。DNA异倍体的出现，是染色体异常的表现，也是细胞癌变和癌前病变的特征指标［7-11］。细胞DNA定量分析检测是在液基薄层制片的基础上，进行Feulgen染色，通过全自动扫描系统进行细胞DNA定量分析，测定细胞DNA倍体是否异常。因细胞恶变过程中出现DNA含量的改变较形态学改变早，因此细胞DNA定量分析检测不仅能识别宫颈脱落细胞中的DNA异倍体细胞，还能识别异常增生细胞。通过DNA定量分析来掌握肿瘤细胞遗传基因变异过程，可作为一种评估癌前病变的指标［12］。这种方法的敏感性高，能早期检测到宫颈癌及癌前病变，并且可以检测到肉眼不能观察到的细胞微小的改变，这种改变往往是癌前病变的表现，有利于早期治疗。

多项研究和理论都证实，DNA倍体异常细胞的出现是细胞癌变的一个特征［7-11］。在宫颈癌的发生发展过程中，细胞核内染色体的异常要早于细胞形态上的异常改变，因此采用细胞核内DNA定量分析技术较常规细胞形态学检测宫颈癌变更敏感［7-12］。本组筛查数据中共发现131例建议活检者，经重庆金域医学检验公司病理学专家确定为CIN 45例，建议活检者阳性检出率为34.35%，筛查后明显地提高了病变检出的针对性和有效率。由表2可见，41岁～50岁之间发病率最高，其次为31岁～40岁和51岁～60岁年龄段，这与郎景和等［13］研究的结果相一致。宫颈异倍体细胞和细胞异常增生的出现象征着细胞染色体结构和数量出现异常的变化，最终发展至浸润性宫颈癌。目前普遍认为宫颈癌是逐渐形成的，从CINⅠ至CINⅡ至CINⅢ，而后进展为浸润性癌，估计从CIN进展为癌大约需要10年以上的时间。传统上认为：更多CINⅠ和CINⅡ会消退，大约10%的CINⅠ、20%的CINⅡ会进展为CINⅢ，12%的CINⅢ会进展为浸润性癌［14］。因此，正确及时地进行医学干预，有利于降低宫颈癌的发病率和死亡率［15-16］。根据郎景和［13］研究资料显示，宫颈浸润癌的好发年龄在50岁左右，符合从宫颈上皮内瘤变到宫颈癌大约10～20年的演变过程，这是一个可以采用医学干预手段加以阻断的最好时期，是癌瘤早期防治的重要阶段。

本次筛查结果表明，利用细胞DNA定量分析的方法能及时发现宫颈癌前病变，对及时采用预防和治疗措施、防止癌变发生可提供有益指导和方向。这种方法，可明确提高标本质量，提高癌变检出率，与病理学诊断符合率高。黄卫彤等［17］报道，意义未明的不典型鳞状细胞（atypicai squa⁃mous cells of unknown significance，ASCUS）在描述性诊断报告中很常见，其特点是检查结果重复性差，即可是良性病变，也可是不同级别的CIN，甚至是早期浸润癌，但宫颈浸润癌检出率低，病变转归差异明显。细胞DNA倍体分析可辅助用于ASCUS的分流诊断，对ASCUS患者结合DNA定量分析进行有选择性的活检，可明显提高CIN的检出率、降低宫颈癌的漏诊。陈志香等［18］报道，在宫颈癌的发生和发展过程中，病变细胞核内染色体的异常和DNA含量的改变要明显早于细胞形态学的异常改变。所以，相比较常规细胞形态学检测而言，DNA定量分析技术的敏感度更高，可有效地降低漏诊率，提高检测的阳性率。

综上所述，通过对细胞DNA定量分析，进行有选择性的活检，既可以提高宫颈上皮细胞癌变和癌前病变的阳性检出率，又可以避免漏诊和资源的浪费。尤其是在湖北恩施州地区经济发展相对落后的山区，使用细胞DNA定量分析检测，不仅可以有效地解决经济落后地区大规模妇女宫颈疾病的筛查，还可以有效地解决经济落后地区病理学专家人力资源不足和工作压力相对过大的局面。该方法敏感性高、成本相对较低、是宫颈疾病筛查和诊断的有效方法。

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论著

The significance of the DNA quantitative analysis in screening of 2 638 cervical cancer patients

LIU Guosheng，WANG Xiaoliang，ZHENG Jianqiong，ZENG Shoukui，ZHOU Wei
（Laboratory Medicine，Affiliated Hospital of Hubei University for Nationalities，Enshi，Hubei，China，445000）

［ABSTRACT］Objective To screen for the incidence of cervical lesions in women in Enshi by DNA quantitative cytology, and to investigateits effects in screening and preventing of cervical lesions. Methods DNA quantitative cytology and pathology were used in the medical examination of women who volunteered in the census of cervical disease in Affiliated Hospital of Hubei University for Nationalities from December, 2013 to November, 2014. Results A total of 131 cases of heteroploid cell, aneuploid peaks and abnormal proliferation were found, with an incidence of 4.97% in 2 638 cases. 45 cases of cervical intraepithelial neoplasias (CIN) were diagnosed by DNA quantitative cytology, with the positive prevalence rate of 34.35%. Conclusion DNA quantitative cytology is an effective way to detect CIN betimes, and cervical cancer and precancerous lesions screening may improve the detection rate of cervical lesions.

［KEY WORDS］DNA quantitative cytology；Screening；Cervical lesions

基金项目：湖北省恩施州农业与社会发展科技指导性计划项目（恩州科业［2013］9号）

通讯作者：周维，E⁃mail：zw200811@163.com