急性期肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液E-选择素水平的变化

李苏亮， 叶　芸

(西安医学院第一附属医院中心实验室，西安　710077; *通讯作者，E-mail: yeyun236@163.com)



急性期肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液E-选择素水平的变化

李苏亮， 叶芸*

(西安医学院第一附属医院中心实验室，西安710077;*通讯作者，E-mail: yeyun236@163.com)

摘要：目的探讨急性期肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液E-选择素(E-selectin)水平的变化及其在儿童肺炎支原体感染中的价值。方法采用ELISA法测定急性期及恢复期支原体肺炎患儿肺泡灌洗液E-selectin水平；采用荧光定量PCR法检测肺泡灌洗液肺炎支原体(M.pneumoniae,MP)DNA拷贝数并进行相关性分析。结果急性期患儿肺泡灌洗液E-selectin明显高于恢复期，差异有统计学意义(P<0.05)；急性期患儿肺泡灌洗液E-selectin与MP-DNA拷贝数呈明显正相关(rs=0.818，P<0.01)。结论急性期肺炎支原体感染患儿肺泡灌洗液E-selectin水平明显增高，在肺炎支原体肺炎发病、发展、预后中有重要的临床价值。

关键词：肺炎支原体；肺泡灌洗液；E-选择素

肺炎支原体是儿童呼吸道感染的常见病原体，其导致的肺炎及肺外并发症对儿童健康危害严重[1,2]。近年来的研究显示，黏附分子(adhesion molecules，AMs)在儿童肺炎支原体(MP)肺炎的发生、发展中起重要作用。E-selectin是AMs中选择素超家族成员之一，主要由毛细血管和后微静脉的内皮细胞分泌,炎性刺激内皮细胞后，可激活E选择素基因快速而短暂表达，进一步加重炎症反应[3]。本研究旨在通过探讨急性期与恢复期肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液E-选择素水平的变化，评价其在MP感染诊断中的应用价值，对判断病情和临床治疗提供指导。

1材料与方法

1.1标本来源

选取我院儿科2013-12～2015-06住院并确诊为肺炎支原体肺炎，且临床资料完整的患儿共108例，其中急性期患儿58例(男28例，女30例)，年龄3-12岁，平均年龄为(5.5±3.2)岁；恢复期患儿50例(男24例，女26例)，年龄3-12岁，平均年龄为(5.8±2.6)岁。所有入选患儿均符合《诸福棠实用儿科学》[4]。急性期的判定标准为发病10 d内，有肺炎支原体肺炎的症状和体征且经抗生素治疗无效，未经激素和免疫抑制剂治疗。恢复期判定标准为退热两周以上，所有临床症状和体征消失。本项研究得到了院伦理委员会的批准，并获得了所有研究对象或患者亲属的同意。

1.2支气管肺泡灌洗的采集

所有患儿均采用局部麻醉。术前禁食、禁饮,术前肌注阿托品和安定。术前用利多卡因泵雾化作局部表面麻醉。纤支镜进入声门后,气管内滴入利多卡因进行局部麻醉。同时给鼻导管吸氧,心电、呼吸和经皮血氧饱和度监测。使用Olympus纤维支气管镜BF-P30插入病变管嵌入管腔内(灌洗部位多选择病变严重肺段，少数病变范围比较广泛者则选右肺中叶，小婴儿选择右下叶)，以37 ℃生理盐水(体重小于20 kg者，每次灌洗量1 ml/kg，体质量大于20 kg者，每次灌洗量20 ml)进行支气管肺泡灌洗3次。随即以负压13.3-20 kPa(100-150 mmHg)进行抽吸以获取灌洗液标本入灭菌痰液收集器。灌洗液全部分装成1.5 ml于离心管中，12 000 r/min离心5 min，留取上清液用于E-selectin的测定，留管底沉淀作为DNA提取标本，并将处理后标本保存于-80 ℃冰箱。

1.3FQ-PCR测定MP-DNA拷贝数

采用中山大学达安基因股份有限公司提供荧光定量检测试剂盒检测MP-DNA拷贝数。所有操作均按照试剂盒说明书进行。

1.4统计学分析

采用SPSSl8.0软件进行统计学分析。非参数资料用Personχ2检验进行分析；MP-DNA拷贝数取对数后，用平均值及标准差表示；E-selectin呈偏态分布，用中位数(四分位数)表示，采用Mann-Whitney U检验做比较。E-selectin与MP-DNA拷贝数之间的关系采用Spearman相关分析；以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组一般资料比较

两组患者的年龄、性别、体质量指数差异均无统计学意义(均P>0.05，见表1)。

表1两组患者一般资料比较

Table 1Baseline data of acute and recovery phase patients

指标急性期恢复期统计值P性别0.0010.977 男2824 女3026年龄0.0710.965 <5岁1614 5-10岁2825 >10岁1411体质量指数0.0470.953 <15kg/m2108 15-18kg/m23632 >18kg/m21210

2.2两组MP-DNA拷贝数检测结果

FQ-PCR检测结果表明,58例急性期支原体肺炎患者肺泡灌洗液结果均为阳性，阳性标本的拷贝数在3.70×104-4.90×107copies/ml之间，取对数后计算，平均5.63±0.87。恢复期患者拷贝数均为0，两组结果差异有统计学意义(P<0.01)。

2.3两组肺泡灌洗液E-selectin测定结果

急性期组肺泡灌洗液E-selectin结果为5.58 ng/ml(4.00-7.15 ng/ml)，恢复期组肺泡灌洗液E-selectin结果为1.12 ng/ml(0.43-2.78 ng/ml)。经非参数Mann-WhitneyU检验，两组肺泡灌洗液E-selectin结果差异有统计学意义(Z=-4.584,P<0.01，见图1)。

图1　两组患者E-selectin测定结果箱式图Figure 1　The box figure of E-selectin in two groups

2.4急性期肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液

E-selectin与MP-DNA拷贝数相关性结果显示,急性期肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液E-selectin水平与MP-DNA拷贝数密切相关(rs=0.818，P<0.01，见图2)。

图2　E-selectin与MP-DNA拷贝数相关性分析Figure 2　The correlation analysis between plasma E-selectin and MP-DNA copies

3讨论

肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)是一种基因组很小、无细胞壁、具有多形性且自身不能合成胆固醇的原核生物[5]。黏附分子(adhesion molecules，AMs)是指由细胞产生、存在于细胞表面、介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合的一类分子，在许多疾病的发生发展过程中起重要作用[6]。E-selectin是黏附分子中选择素超家族成员之一，主要由毛细血管和后微静脉的内皮细胞分泌。E-selectin存在于活化的血管内皮细胞表面。炎症组织释放的白细胞介素-1(IL-1)及肿瘤坏死因子(TNF)等细胞因子可活化脉管内皮细胞，刺激E-selectin的合成，并通过白细胞与内皮细胞的相互作用发挥重要作用[7]。炎症过程中E-selectin参与细胞增殖功能的调控，与肺炎支原体肺炎的发生发展有关[8]。

有文献报道，肺炎支原体患儿的肺泡灌洗液中，肺炎支原体DNA拷贝数越大临床症状越重，且与疾病的病情及临床分期有关[9]。本研究中FQ-PCR检测结果表明58例急性期支原体肺炎患者肺泡灌洗液结果均为阳性，阳性标本的拷贝数在3.70×104-4.90×107copies/ml之间，取对数后，计算其平均值及标准差为5.63±0.87。恢复期患者拷贝数均为0，两组结果差异有统计学意义(P<0.01)。急性期组和恢复期组间肺泡灌洗液E-selectin水平经非参数Mann-WhitneyU检验，差异有统计学意义(Z=-4.584,P<0.01)。急性期组肺泡灌洗液E-selectin水平升高可能与急性期感染血管内皮受损有关。MP数量越多,释放的毒素越多,产生的毒力越强,炎症反应越重,血管内皮细胞损伤程度就越重，因此Spearman相关性分析结果显示急性期肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液E-selectin水平与MP-DNA拷贝数密切相关(r=0.818，P<0.01)。该结果提示我们在临床中对于急性支原体肺炎患者应当尽早使用大环内酯类药物,抑制增殖。同时应重视气道上皮细胞的修复,控制炎症反应。

综上所述，急性期肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液E-selectin水平显著升高且与MP-DNA拷贝数密切相关，在儿童肺炎支原体肺炎发病、发展、预后中有重要的临床价值。将血浆E-selectin结合其他临床指标，可以用于临床诊断急性期和恢复期支原体肺炎患者,也可作为判断疾病严重程度和评价临床疗效的重要指标之一。

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[8]李苏亮，叶芸.E-selectin和sICAM-1在儿童肺炎支原体感染中的价值[J].山西医科大学学报，2015,45(10):1027-1029.

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Expression of E-selectin in bronchoalveolar fluid in children with acute pneumoniaMycoplasmapneumonia

LI Suliang，YE Yun*

(DepartmentofClinicalLaboratory，FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity，Xi’an710077，China;*Correspondingauthor，E-mail:yeyun236@163.com)

Abstract：ObjectiveTo explore the changes and application value of the E-selectin expression in children suffering from acute Mycoplasma pneumoniae(MP) infection.MethodsELISA was used to detect the level of E-selectin in bronchoalveolar fluid of acute and recovery phase patients with acute Mycoplasma pneumoniae infection. MP-DNA copies were detected by fluorescence quantitative PCR method and its correlation with acute Mycoplasma pneumoniae infection was analyzed.ResultsE-selectin expression was significantly higher in acute Mycoplasma pneumoniae infection patients than that in recovery phase patients(P<0.05). Correlation analysis showed that E-selectin expression was correlated with MP-DNA copies in acute phase patients(rs=0.818,P<0.01). ConclusionE-selectin is significantly increased in children with acute Mycoplasma pneumoniae infection, and can be important in the progression, development and prognosis of children with MP infection.

Key words:Mycoplasma pneumoniae;bronchoalveolar fluid;E-selectin

基金项目：西安医学院第一附属医院科研基金资助项目(XYFY14-02)

作者简介：李苏亮，男，1973-10生，本科，副主任技师,E-mail:lisuliang01@163.com

收稿日期：2016-02-29

中图分类号：R563.1

文献标志码：A

文章编号：1007-6611(2016)05-0447-03

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2016.05.011