痔宁洗液抗炎和镇痛作用的实验研究

刘晓梅，谷云飞

(南京中医药大学如皋市中医院肛肠科，江苏如皋226500)



痔宁洗液抗炎和镇痛作用的实验研究

刘晓梅，谷云飞*

(南京中医药大学如皋市中医院肛肠科，江苏如皋226500)

[摘要]目的：探讨痔宁洗液抗炎镇痛的效果。方法:建立炎症模型(角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型及二甲苯致小鼠毛细血管通透性增高模型)与疼痛模型(扭体模型及热板模型)，将各模型组随机分为5组(溶剂对照组、新洁尔灭组、痔宁洗液低剂量组、痔宁洗液中剂量组、痔宁洗液高剂量组)。测定不同时间点的大鼠足跖肿胀率及测定二甲苯染色后蓝斑色泽深浅及含量；测定扭体次数及计算扭体率，测定不同时间点的疼痛阈值。结果：痔宁洗液不同剂量组抗炎、镇痛作用均优于溶剂对照组及新洁尔灭组(P<0.05)。不同痔宁洗液剂量组间抗炎、镇痛作用差异均有统计学意义，并呈剂量依赖性。结论：痔宁洗液具有良好的抗炎及镇痛作用。

[关键词]痔宁洗液；抗炎；镇痛

痔宁洗液以鱼腥草、苦参、大黄、黄柏、蒲公英、紫花地丁、玄胡、朴硝组方，具有清热解毒、活血消肿、燥湿止痒之功，系如皋中医院肛肠科特色制剂，疗效显著且未发现毒副作用等不良反应，获得广大患者好评。本实验利用炎症和疼痛动物模型，观察痔宁洗液的抗炎及镇痛作用，以使该药更有效地为广大患者服务。

1材料与方法

1.1实验动物C57BL/6J小鼠，体重18～22 g，雌雄不限；SD大鼠240只，体重180～240 g，雌雄不限，由南通大学实验动物中心提供，合格证号：SYXK(苏)2007-0021。

1.2药品和试剂痔宁洗液以鱼腥草45 g、苦参30 g、大黄45 g、黄柏30 g、蒲公英30 g、紫花地丁30 g、玄胡30 g、朴硝30 g组方，加入蒸馏水制成5 000 ml，水煎浓缩成500 ml，加入防腐剂即得，如皋中医院药剂科提供，批号：苏药制字Z04001598。将原洗液3倍、6倍和12倍加入双蒸水稀释后设为高剂量、中剂量和低剂量，相当于人临床用药的2、1、0.5倍浓度；新洁尔灭，江西南昌白云制药厂，批号：20100401。角叉菜胶混悬液和0.5%醋酸等由南通大学医学院药理实验室提供。100%二甲苯由北京五二九五二化工厂提供，批号20090828。

1.3抗炎实验方法

1.3.1痔宁洗液对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响取SD大鼠40只，随机分为5组，每组8只：(1)对照组；(2)新洁尔灭组(作为阳性对照组)；(3)痔宁洗液低剂量组；(4)痔宁洗液中剂量组；(5)痔宁洗液高剂量组。分别将各组大鼠背部脊柱两侧毛脱去，大小5 cm×8 cm。各给药组分别给予相应涂抹，以药液不滴下为度，1次/d，连续3 d，对照组涂以双蒸水。于最后1 d给药20 min后，采用容积法测量各组大鼠左后足跖正常容积。然后分别在大鼠左后足跖掌腱膜下注射1%角叉菜胶混悬液0.1 ml/只致炎，注射结束后立即在左后足涂以上述药物，随后每隔1 h测1次左后足跖容积，连续6次，24 h后再测1次左后足跖容积。按以下公式计算足跖肿胀率(%)：致炎后足跖容积-致炎前足跖容积)/致炎前足跖容积×100%。

1.3.2痔宁洗液对二甲苯所致小鼠腹部皮肤毛细血管通透性增高的影响取C57BL/6J小鼠50只，随机分为5组，每组10只：(1)对照组；(2)新洁尔灭组(作为阳性对照组)；(3)痔宁洗液低剂量组；(4)痔宁洗液中剂量组；(5)痔宁洗液高剂量组。分别将各组小鼠腹部正中部位去毛，大小3.3 cm×3.3 cm。各给药组分别给予相应涂抹，以药液不滴下为度，1次/d，连续3 d，对照组涂以双蒸水。于末次涂药1 h后自尾静脉注入0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1 ml/10 g体重，随即于小鼠腹部正中部位去毛皮肤上滴二甲苯0.3 ml/只，20 min后小鼠颈椎脱臼处死，剥下腹部皮肤，翻转贴于白色搪瓷盘上，根据各蓝斑色泽深浅将其分为7～10个级别，1个级别记1分，评定皮肤蓝色斑块深浅后，每块蓝斑皮肤称重，用手术剪剪碎投入有塞玻璃试管内，加入丙酮-硫酸钠提取液10 ml，置暗处放置，每日轻轻摇动2～3次，3 d后2 000 r/min离心10 min，取上清液于590 nm测定光密度。最后得到每mg蓝斑皮肤中染料含量。

1.4镇痛实验方法

1.4.1扭体法[1]取C57BL/6J小鼠100只，随机分为5组，每组20只。分组和给药同1.3.2。于末次涂药30 min后，每只小鼠腹腔注射0.5%醋酸溶液0.25 ml致痛。记录注射致痛物质后15 min内各小鼠的扭体次数(扭体反应的典型表现为腹部内凹，躯干与后肢伸展，臀部高起。如此1次记作1次扭体)。实验控温为(20±1)℃。扭体反应抑制率(%)=(对照组扭体均数-药物组扭体均数)/对照组扭体均数×100%。

1.4.2热板法[2-3]取雌性C57BL/6J小鼠若干。将电热套的温度调至55 ℃。预热10 min后将小鼠逐一放入电热套内，上盖一铁笼。以小鼠受热后出现舔后足行为所需时间(s)为痛阈值。30 s之内仍没有舔后足者弃之不用。筛选出合格小鼠50只(10 s<痛阈值<30 s)，再测1次每只小鼠的痛阈值，作为小鼠给药前的痛阈值。将小鼠随机分为5组，每组10只，分组方法同1.3.2。于小鼠后足分别涂抹上述受试物，1次/d，连续3 d。于末次给药后0.5、1、2 h记录小鼠投入热板至出现舔后足的时间(s)作为痛阈值[4-5]。

1.5统计学方法采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用方差分析和SNK检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1抗炎实验

2.1.1痔宁洗液对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响痔宁洗液高、中剂量组致炎2 h、3 h、4 h、5 h、6 h后足跖肿胀率均显著低于溶剂对照组和新洁尔灭组，差异均有统计学意义。痔宁洗液高剂量组致炎2 h、3 h、4 h、5 h、6 h后足跖肿胀率显著低于痔宁洗液中、低剂量组，差异均有统计学意义。新洁尔灭组各指标与溶剂对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　痔宁洗液对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响±s)

注：与溶剂对照组比较，1)P<0.05，2)P<0.01；与新洁尔灭组比较，3)P<0.05，4)P<0.01；与痔宁洗液高剂量组比较，5)P<0.05

2.1.2痔宁洗液对二甲苯所致小鼠腹部皮肤毛细血管通透性增高的影响痔宁洗液各剂量组蓝斑色泽深浅、蓝斑染料量数值均明显低于溶剂对照组和新洁尔灭组，差异均有统计学意义；痔宁洗液低剂量组蓝斑色泽深浅、蓝斑染料量数值均明显高于痔宁洗液中剂量组和高剂量组，差异有统计学意义。新洁尔灭组各指标与溶剂对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2　痔宁洗液对二甲苯所致小鼠腹部皮肤

注：与溶剂对照组比较，1)P<0.05，2)P<0.01；与新洁尔灭组比较，3)P<0.05，4)P<0.01；与痔宁洗液高、中剂量组比较，5)P<0.05

2.2镇痛实验

2.2.1痔宁洗液对醋酸所致小鼠扭体反应的影响醋酸致痛后，各组小鼠均出现扭体反应。痔宁洗液各剂量组扭体次数明显低于溶剂对照组和新洁尔灭组，抑制率均明显高于溶剂对照组和新洁尔灭组，差异均有统计学意义；痔宁洗液低剂量组体次数明显高于其他痔宁洗液剂量组，抑制率明显低于其他痔宁洗液剂量组，差异均有统计学意义。新洁尔灭组各指标与溶剂对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3　痔宁洗液对醋酸致痛小鼠扭体反应的影响±s)

注：与溶剂对照组比较，1)P<0.05，2)P<0.01；与新洁尔灭组比较，3)P<0.05，4)P<0.01；与痔宁洗液高、中剂量组比较，5)P<0.05

2.2.2痔宁洗液对小鼠热板法痛阈值的影响痔宁洗液各剂量组给药后不同时间痛阈值均显著高于溶剂对照组、新洁尔灭组，差异均有统计学意义；痔宁洗液低剂量组给药后不同时间痛阈值均显著低于其他痔宁洗液剂量组，差异均有统计学意义。新洁尔灭组各指标与溶剂对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。痔宁洗液高剂量组、痔宁洗液中剂量组给药后不同时间痛阈值均显著高于给药前，痔宁洗液低剂量组给药后0.5 h、1 h痛阈值均显著高于给药前，差异均有统计学意义。见表4。

表4　痔宁洗液对小鼠痛阈值的影响±s)

注：与溶剂对照组比较，1)P<0.05，2)P<0.01；与新洁尔灭组比较，3)P<0.05，4)P<0.01；与痔宁洗液低剂量组比较，5)P<0.05，6)P<0.01；与给药前比较，7)P<0.05，8)P<0.01

3讨论

本实验采用致炎物角叉菜胶和二甲苯，分别造成大鼠足跖肿胀和皮肤毛细血管扩张等非特异性炎症模型；采用扭体法和热板法，分别造成醋酸和热刺激诱导的疼痛模型，利用痔宁洗液进行实验性治疗并观察疗效。本研究结果显示给予大鼠左后足跖皮下注射角叉菜胶后，可诱发显著的炎症肿胀反应，此肿胀反应在致炎5 h左右达到高峰；新洁尔灭无明显的抗炎症肿胀作用，而痔宁洗液各剂量涂抹对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀具有明显的抑制作用，作用持续达6 h以上，24 h后仍有一定程度的抗炎作用，可知痔宁洗液对角叉菜胶导致大鼠足跖肿胀有明显抑制作用。小鼠腹部皮肤毛细血管通透性试验结果显示：痔宁洗液各剂量组数值均明显低于对照组，可知痔宁洗液能显著抑制二甲苯滴于小鼠腹部皮肤引起的毛细血管通透性的增高，但是不同剂量作用效果不同，痔宁洗液低剂量组蓝斑色泽深浅、蓝斑染料量数值均明显高于痔宁洗液中剂量组和高剂量组，提示血管通透性存在剂量依赖性。

本研究发现，在扭体次数、抑制率方面，痔宁洗液各剂量组与溶剂对照组比较差异均有统计学意义，说明痔宁洗液能明显减少醋酸致痛小鼠的扭体次数，提高抑制率；同时，研究还发现痔宁洗液各剂量组给药后不同时间痛阈值与溶剂对照组比较差异有统计学意义，痔宁洗液各剂量组给药前后比较差异有统计学意义，从最后一次给药后0.5 h开始，镇痛作用加强，且随时间的延长效果更加显著，但是作用2 h后，镇痛效果开始不再明显；由此可见，痔宁洗液能明显延长由热刺激引起的小鼠的痛反应时间，对由热刺激而导致的小鼠疼痛有明显的抑制作用，表明对小鼠有镇痛作用，可明显减少醋酸致痛小鼠扭体次数和延长由热刺激而引起的小鼠痛反应时间。

痔宁洗液方剂组成为鱼腥草、苦参、大黄、黄柏、蒲公英等，其中鱼腥草具有清热解毒的作用，苦参具有燥湿止痒，生肌敛疮之效，大黄、黄柏清热祛湿，利水渗湿效果较好，蒲公英可祛瘀止痛，诸药合用可清热解毒、祛湿消肿、止痛化瘀效果良好[6-8]。现代药理学研究证实鱼腥草、苦参、大黄、黄柏、蒲公英等药物组方水浸液具有止痛、镇痛、抗炎消肿、抑制血管通透性增加、促进血液循环等作用[9]。此外，大黄、黄柏水浸液具有抑制金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及支原体等致病菌效果，同时可减轻局部炎性反应，促进水肿消退，抗炎效果较好[10]。本研究结果也提示痔宁洗液方剂存在较好的镇痛、抗炎效果，且痔宁洗液不同剂量组抗炎作用均优于溶剂对照组及新洁尔灭组，并呈剂量依赖性，提示痔宁洗液高、中剂量疗效相对较好。

综上所述，痔宁洗液具有明显的抗炎作用和镇痛作用，并呈相应的剂量依赖性。

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(文敏编辑)

Experimental Study on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Hemorrhoids Lotion

LIU Xiaomei,GU Yunfei*

(Department of Anorectology,Rugao TCM Hospital,Nanjing University of Chinese Medicine,Rugao 226500,China)

[Abstract]Objective:To investigate the anti-inflammatory and analgesic effect of hemorrhoids lotion.Methods:Inflammation model (carrageenin-induced paw swelling in rat and increased capillary permeability induced by xylene in mice) and pain model (writhing test and hot plate model) were established.The model groups were randomly divided into 5 groups (solvent control group,the new clean Er destroy group,hemorrhoid lotion low dose group,hemorrhoid lotion middle dose group,hemorrhoid lotion high dose group).The paw swelling rate in rats and color of blue spot and content after xylene stained were determined at different points.The times and incidence rate of writhing were calculated and pain threshold was determined at different points.Results:The anti-inflammatory and analgesic effect of hemorrhoids lotion in different dose groups were better than that in the solvent control group and new clean Er destroy group(P< 0.05).There were significant differences in the analgesic and anti-inflammatory effects of hemorrhoids lotion in different dose groups in dose-dependent manner.Conclusion:Hemorrhoids lotion has good anti-inflammatory and analgesic effects.

[Key words]hemorrhoids lotion; anti-inflammation; analgesia

[收稿日期]2015-11-30

doi:10.16753/j.cnki.1008-2344.2016.02.004

[中图分类号]R285.5

[文献标识码]A

[文章编号]1008-2344(2016)02-0074-04

[通讯作者]谷云飞(1960—)，男(汉)，主任医师，副教授．研究方向：肛肠常见疾病的诊治及疑难杂症的处理．E-mail：guyunfei127@126.com