贵州苗药酢浆草水提物的抗炎镇痛作用*

崔　珺， 杨雅欣， 郑　林， 董　莉， 何　彬， 刘　亭， 李　靖， 穆　琼*

(1.贵州医科大学 全科医学教研室， 贵州 贵阳　550004； 2.贵阳中医学院 药学院， 贵州 贵阳　550002； 3.贵州医科大学 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心， 贵州 贵阳　550004； 4.贵州医科大学 贵州省药物制剂重点实验室， 贵州 贵阳　550004)



贵州苗药酢浆草水提物的抗炎镇痛作用*

崔珺1， 杨雅欣2， 郑林3， 董莉3， 何彬3， 刘亭4， 李靖4， 穆琼1*

(1.贵州医科大学 全科医学教研室， 贵州 贵阳550004； 2.贵阳中医学院 药学院， 贵州 贵阳550002； 3.贵州医科大学 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心， 贵州 贵阳550004； 4.贵州医科大学 贵州省药物制剂重点实验室， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 研究贵州苗药酢浆草水提取物的抗炎镇痛作用。方法： 60只清洁级昆明系小白鼠采用冰醋酸法复制小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型，随机分为空白组、模型组、阳性组以及酢酱草水提物低、中、高剂量组，每组10只；另取50只小鼠采用冰醋酸法复制小鼠扭体模型，随机分为模型组、阳性组以及酢酱草水提物低、中、高剂量组，每组10只；空白组和模型组给予同体积生理盐水灌胃，阳性组给予0.005 mg/g阿司匹林灌胃，酢酱草水提物低、中、高剂量组分别给予0.07 mg/g、0.14 mg/g、0.21 mg/g酢酱草水提物灌胃，均连续灌胃 3 d，小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型末次灌胃 1 h后处死，用紫外分光光度计测定小鼠腹腔清洗液的吸光度值，以判定腹腔毛细血管通透性的变化；记录小鼠扭体模型10 min内的扭体次数，并计算扭体抑制率；采用DPPH实验初步考察酢酱草水提取物的自由基清除能力。结果： 酢浆草水提物中、高剂量组小鼠腹腔清洗液的吸光度值低于模型组，差异有统计学意义(P<0.01或P<0.001)；小鼠扭体模型10 min内扭体次数少于模型组，差异有统计学意义(P<0.001)；1～100 mg/L浓度的酢浆草水提物能够发挥直接清除DPPH自由基的作用。结论： 酢浆草水提物具有抗炎镇痛作用。

[关键词]小鼠； 苗药； 酢浆草； 植物提取物； 抗炎； 镇痛； 贵州

酢浆草为酢浆草科植物酢浆草(OxaliscorniculataL.)的新鲜或干燥全草，始载于《本草纲目》，为贵州省苗族常用药材。酢浆草含黄酮类物质、有机酸、酯类物质等成分，具有清热解毒、消炎止痛、利湿消肿、凉血散瘀之功效[1-3]。临床现有的制剂主要采用水提方法制备而得，但对其相关抗炎、镇痛药理作用研究仍然较少[4]。本实验探讨酢浆草水提取物的抗炎镇痛作用，为酢浆草的临床应用提供理论依据。

1材料与方法

1.1主要药物与试剂

选用贵州本地秋季采收的干燥酢浆草全草作为研究对象(经贵州医科大学龙庆德副教授鉴定为酢浆草OxaliscorniculataL.真品)；酢浆草提取物由本实验室自制；阿司匹林维生素C泡腾片购于沈阳奥吉娜药业有限公司(批号120203)，依文思蓝购于国药集团化学试剂有限公司(批号20120608)，冰醋酸(分析纯，上海申博化工有限公司，批号1003102)，乙腈(色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20110816)，DPPH试剂(1,1-二苯基-2-苦基肼试剂，M=394.32，BR级)购于Sigma公司。

1.2主要仪器和动物

高速万能粉碎机(林大机械有限公司，50～200目)、梅特勒电子天平(梅特勒托利多仪器上海有限公司，120 g/0.1 mg及500 g/0.1 g)、紫外分光光度计(岛津UV2401)。选用清洁级昆明系小白鼠，18～22 g，雌雄各半，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK(黔)2008-0005。

1.3方法

1.3.1腹腔毛细血管通透性的测定采用冰醋酸复制小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型。取60 只小鼠，雌雄各半，随机分为6组，每组10只，即空白组、模型组、阳性组以及酢浆草水提取物低 (0.07 mg/g)、中(0.14 mg/g)、高(0.21 mg/g)剂量组；空白组和模型组以0.01 mL/g给予同体积生理盐水灌胃，阳性组以0.005 mg/g剂量给予阿司匹林灌胃，酢浆草水提物低、中、高剂量组以不同剂量灌胃。各组小鼠每日灌胃1 次，连续灌胃3 d。末次灌胃1 h后，小鼠尾静脉注射0.6%依文思蓝生理盐水溶液0.01 mL/g，随即腹腔注射0.8%冰醋酸生理盐水溶液0.01 mL/g致炎。2 h后脱颈处死小鼠，腹腔注射6 mL生理盐水，轻揉小鼠腹部，轻微振摇，于腹腔收集腹腔清洗液，4 000 r/min离心15 min，取上清液，用紫外分光光度计于590 nm波长处测定吸光度值[5]，以判定各组小鼠腹腔毛细血管通透性的变化。1.3.2扭体实验采用冰醋酸复制小鼠扭体模型。取50只小鼠，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，即模型组、阳性组、酢浆草水提物低 (0.07 mg/g)、中(0.14 mg/g)及高(0.21 mg/g)剂量组。模型组以0.01 mL/g给予同体积生理盐水灌胃，阳性组以0.005 mg/g剂量给予阿司匹林灌胃，酢浆草水提物以低 (0.07 mg/g)、中(0.14 mg/g)、高(0.21 mg/g)剂量予以不同剂量灌胃。各组小鼠每日灌胃1次，连续灌胃3 d。末次灌胃1 h后，予各组小鼠腹腔注射0.8%的冰醋酸生理盐水溶液0.01 mL/g，稳定5 min后，记录10 min之内小鼠发生扭体反应(腹部内凹、躯干和后腿伸张、臀部高起为1次扭体反应)的次数，并计算药物对扭体反应的抑制率[5]。

抑制率(%)=生理盐水组扭体均数-给药组扭体均数/生理盐水组扭体均数×100%

1.3.3自由基清除能力测定实验时，配制浓度为1×10-4mol/L的DPPH 乙醇溶液(即自由基溶液)，闭光置于摇床上轻轻摇动10 min，备用。将酢浆草水提物配成10倍终浓度的水溶液(浓度分别为0 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、100 mg/L)，吸取各浓度药液300 μL，分别加入1×10-4mol/L的DPPH 醇溶液2 700 μL。摇匀后标记为待检测样品，室温放置30 min后使用紫外分光光度计于517 nm波长处检测各样品的吸光度值，以判定不同浓度酢浆草水提物对自由基溶液的清除水平。每组3个复孔，重复3次实验[6]。

1.4统计学方法

2结果

2.1小鼠腹腔毛细血管通透性

模型组小鼠腹腔清洗液的吸光度值与空白组比较明显升高，差异有统计学意义(P<0.001)，说明冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的炎症模型建立成功。酢浆草水提物中、高剂量组小鼠腹腔清洗液的吸光度值与模型组比较明显降低，差异有统计学意义(P<0.01，P<0.001)。见图1。

(1)与空白组比较，P<0.001；(2)与模型组比较，P<0.01；(3)与模型组比较，P<0.001图1　各组小鼠腹腔毛细血管通透性Fig.1　The celiac capillary permeability in each group

2.2小鼠扭体实验

如表1所示，阳性组以及酢浆草水提物中、高剂量组的扭体次数与模型组比较明显减少，差异有统计学意义(P<0.001)，酢浆草水提物中、高剂量组小鼠的扭体抑制率低于阳性组小鼠，提示中、高剂量组酢浆草水提物可抑制小鼠扭体。见表1。

2.3自由基清除能力

以酢浆草提取物浓度为0 mg/L组吸光度值为参照，1～100 mg/L浓度的酢浆草水提取物组能够发挥直接清除DPPH自由基的作用。酢浆草水提取物浓度1、10及100 mg时共吸光度值分别为(87.24±0.15)、(85.13±0.16)及(64.21±0.11)，均低于未加酢浆草的吸光度值(100.00±0.15)，差异有统计学意义(P<0.01)。

表1　各组小鼠的扭体次数和

(1)与模型组比较，P<0.001

3讨论

酢浆草是贵州省苗族习用药材，收载于《贵州省中药材、民族药质量标准》2003年版[2-3]，以酢浆草为主药开发的制剂品种在临床上发挥了较好的治疗作用，带动当地制药产业和经济水平的发展。目前，水提取法是酢浆草等临床制剂常用的提取方法，酢浆草药理活性研究主要集中在体外抗菌方面，关于酢浆草提取物体内抗炎镇痛药效的报道仍然十分薄弱，极大限制了酢浆草的临床应用[4,7-9]。

本文采用酢浆草水提取物，建立药理学抗炎和镇痛模型，以此考察酢浆草水提物在体内的抗炎和镇痛药效，并初步研究其抗炎作用方式。本研究中，实验小鼠均没有中毒死亡等现象，说明酢浆草安全性较高。在经典抗炎镇痛药理模型中[5]，冰醋酸使小鼠腹腔毛细血管通透性明显增高，渗出液吸光度值显著上升，表明小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型建立成功。腹腔注射冰醋酸以后小鼠出现不同程度的扭体，表明小鼠扭体模型建立成功。实验结果提示酢浆草水提物可明显降低腹腔毛细血管通透性，抑制冰醋酸所致小鼠扭体反应，两个经典实验共同说明酢酱草水提物具有抗炎镇痛作用。本研究结果显示，酢浆草水提取物能够在1～100 μg/mL浓度内发挥直接清除DPPH自由基的作用，推测酢浆草水提取物的抗炎活性可能与其能够较好的直接清除机体内DPPH等自由基有关。目前对于酢浆草的最佳提取方法及其作用机制还有待于进一步研究。

4参考文献

[1] 王海生，王隶书，范艳君,等.酢浆草提取物中总黄酮含量的分光光度法测定[J].时珍国医国药， 2011(3)：578-579.

[2] 贵州省食品药品监督管理局编.贵州省中药材、民族药材质量标准[M].贵州：贵州科技出版社， 2003：366.

[3] 江毅，李朝斗，杨卫平，等.草药彩色图集[M]. 贵州：贵州科技出版社， 2001：324.

[4] 张萌，王俊丽.酢浆草研究进展[J].黑龙江农业科学， 2012(8)：150-155.

[5] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理研究方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社， 2002：798-799.

[6] 裘璐，郝小燕，张一. 肖氏生物液抗氧化活性分析[J]. 贵阳医学院学报, 2011(3): 251-254.

[7] 刘世旺，徐艳霞，石宏武.酢浆草乙醇提取物对细菌生长曲线的影响[J].北方同艺， 2007(3)：113-115.

[8] 王玉仙，丁良，申文增，等.酢浆草的抗炎作用[J].医学研究与教育， 2010(5)：11-13.

[9] 丁良，李静，杨慧.酢浆草提取物体外抗氧化活性研究[J].辽宁中医杂志， 2011(10)：2055-2056.

(2016-01-06收稿，2016-03-23修回)

中文编辑： 文箐颍； 英文编辑： 刘华

Effect of Anti-Inflammatory and Analgesia Activities of Aqueous Extracts of Miao MedicineOxaliscorniculataL.

CUI Jun1, YANG Yaxin2, ZHENG Lin3, DONG Li3, HE Bin3, LIU Ting4, LI Jing4, MU Qiong1

(1.DepartmentofGeneralPractice,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 2.SchoolofPharmacy,GuiyangUniversityofTCM,Guiyang550002,Guizhou,China; 3.EngineeringResearchCenterofMinistryofEducationfortheDevelopmentandApplicationofEthnicMedicineandTCM,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 4.GuizhouProvincialKeyLaboratoryofPharmaceutics,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To investigate anti-inflammatory and analgesia effects of aqueous extracts of Miao medicine Oxalis corniculata L(CJCS). Methods: Sixty Kunming mice of clean grade were randomly divided into control group, model group, positive control group and low-dose group, middle-dose group, high-dose group of CJCS, 10 mice per group. Among these groups, glacial acetic acid was adopted to induce and construct celiac capillary permeability model. Another fifty mice were randomly divided into model group, positive control group and low-dose group, middle-dose group, high-dose group of CJCS, 10 mice per group. Among these groups, glacial acetic acid was adopted to induce and construct writhing model. Control group and model group was orally administered with equal volume of physiological saline, and positive group was orally administered with 0.005 mg/g of aspirin. Low-dose group, middle-dose group and high-dose group was orally administered with 0.07 mg/g, 0.14 mg/g and 0.21 mg/g of CJCS, respectively. All groups received continuous oral administration of 3 d, and the mice were sacrificed 1 hour after the last intragastric administration of glacial acetic acid for celiac capillary permeability model. The absorbance value of celiac washing liquid of sacrificed mice was detected by UV spectrophotometer to determine changes in celiac capillary permeability. For the writhing model, the writhing times within 10 min were recorded and writhing inhibition rates were calculated. DPPH assay was adopted to preliminarily evaluate the free radical scavenging activities of aqueous extracts of CJCS. Results: The absorbance value of celiac washing liquid of middle-dose group and high-dose group were significantly lower than that of model group,(P<0.01 and P<0.001). The writhing times within 10 min of middle-dose group and high-dose group were significantly lower than that of model group (P<0.001). The results suggested that middle-dose group and high-dose group of CJCS could remarkable suppressed the increase of peritoneal capillary permeability induced by acetic acid. 1～100 mg/L concentration of CJCS could show strong free radical scavenging activity in vitro. Conclusion: CJCS aqueous extracts have anti-inflammatory and analgesia effects.

[Key words]mice; Miao medicine; Oxalis corniculata L.; plant extracts; anti-inflammatory; analgesia; Guizhou

[中图分类号]R29； RZ273

[文献标识码]A

[文章编号]1000-2707(2016)04-0427-03

*通信作者E-mail:mu0731@126.com

网络出版时间：2016-04-20网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160420.1823.030.html