产后抑郁母代对子代小鼠青少年期抑郁发病的影响

吴如燕，陆　彩，夏宝妹，薛文达，陶伟伟，陈　刚

南京中医药大学　基础医学院转化系统生物学与神经科学实验中心，南京 210023



·论著·

产后抑郁母代对子代小鼠青少年期抑郁发病的影响

吴如燕，陆彩，夏宝妹，薛文达，陶伟伟，陈刚

南京中医药大学基础医学院转化系统生物学与神经科学实验中心，南京 210023

摘要：目的探讨产后抑郁母代对子代小鼠青少年期抑郁发病的影响。方法48只Balb/c雌鼠按随机数字表法分为对照组及应激组，每组24只。对照组不予任何刺激，应激组给予慢性应激3周：束缚(6 h/d)联合光照24 h(2次/周)。应激结束后，应激组分为3组，每组8只，分别于造模后、造模后正常饲养3周后、分娩3周后予以行为测量，以验证产后抑郁造模成功。正常母代与造模成功的产后抑郁母代所生的F1代雄鼠为：正常对照子代组(CTL-F1)及产后抑郁子代组(PPD-F1)。3～4周龄CTL-F1及PPD-F1雄鼠糖水偏好、强迫游泳及新奇环境摄食实验测量子代的抑郁样行为。结果PPD-F1代3及4周龄体质量显著低于正常对照组(CTL-F1)(P=0.000，P=0.002)；糖水偏好显著下降(P=0.000)；强迫游泳不动时间显著延长(P=0.001)；摄食潜伏期显著延长(P=0.000)，并且单位体质量摄食量显著下降(P=0.005)。结论产后抑郁子代可能更易患抑郁症，最早可能发病于青少年期。

关键词：产后抑郁子代；抑郁症；青少年期

ActaAcadMedSin，2016,38(2)：187-191

抑郁症是以情绪低落、悲观、睡眠障碍为特点的情志疾病，严重者常伴有自杀念头或行为[1]。本病发病率高，全球有10%～30%的女性易患抑郁症[2]，而产后是女性抑郁症高发阶段。产后抑郁(postpartum depression，PPD)是指产妇在分娩后出现抑郁、悲伤、沮丧、哭泣、易激怒、烦躁、甚至有自杀或杀婴倾向等一系列症状为特征的心理障碍，是产褥期精神综合征中最常见的一种类型。PPD发病率较高，全球发病率为10%～20%[3- 4]。患有产后抑郁症的母亲不仅影响自身的心身状态，而且对其子女的生理[5- 6]及心理发展都会产生不良影响，并且显著增加其子女罹患精神疾病的风险[7]。有证据表明，产后抑郁症母亲的子女较正常同龄人出现抑郁症状的比例更高(20%～41%)，并且出现抑郁的年龄更早，持续时间更长[8]。母亲抑郁作为婴儿出生早期所遭遇到的压力将会影响其激素水平和大脑发育，进而导致婴儿抑郁易感性的提高[9]。并且产后抑郁症母亲在教养子女时的负性互动方式将会使其子女在家庭活动中习得母亲的抑郁型认知、行为和情绪[10]。本研究采用产后抑郁子代动物模型，从抑郁小鼠行为测试，包括糖水偏好测验、强迫游泳测验及新奇环境摄食实验，探讨母亲产后抑郁对子代在青少年期抑郁症发病的影响。

材料和方法

实验动物Balb/c雌性小鼠48只，雄性小鼠24只，7～8周龄，体质量18～22 g，购自北京军事医学科学院实验动物中心。所有小鼠适应环境1周。

PPD子代模型的建立将所有小鼠按随机数字表法分为对照组(24只)及应激组(24只)。对照组不给予任何刺激，应激组给予慢性应激3周：束缚(6 h/d)联合24 h光照刺激(2次/周)。应激结束后，应激组分为3组，每组8只，第1组于造模后测量悬尾实验，以验证抑郁样行为。第2组于造模后正常饲养3周(期间不予任何应激)后测量悬尾实验，观察抑郁行为是否消退。第3组于抑郁行为消退后，与正常雄鼠合笼交配怀孕，并于分娩3周后检测雌鼠悬尾实验，以验证PPD造模成功。正常母代与产后抑郁造模成功的PPD母代所生的第1代(F1)与母代同笼至3周(断奶)，按雌雄分笼，每笼6～8只。平均每笼选取同一出生时段的雄性子代小鼠2只，形成正常对照子代组(control-F1，CTL-F1)(8只)及产后抑郁子代组(PPD-F1)(8只)。

悬尾实验悬尾实验使用的行为箱为隔音、避光箱。实验时，小鼠被倒挂在离地面50 cm的高处，用于固定小鼠的胶带粘贴于离尾尖1 cm处。使用录像设备记录小鼠的挣扎时间及不动时间等，每次实验时间为6 min，系统自动记录最后4 min内小鼠的不动时间。当小鼠无晃动及挣扎行为，保持静止时，则被认为是不动的。

体质量测量CTL-F1及PPD-F1分别于出生后第3及4周测量小鼠体质量。

糖水偏好测验先予小鼠以2%蔗糖水每笼双瓶适应3 d，并于小鼠出生后第4周，单笼禁食禁水18 h后，予每笼2%蔗糖水1瓶与纯净水1瓶测量2 h，期间1 h后予以交换蔗糖水瓶及纯净水瓶所放位置。实验结束后统计蔗糖水饮用比率[饮蔗糖水量/(饮蔗糖水量+饮纯净水量)×100%]。糖水偏好实验是测量抑郁模型核心症状：快感缺失的金标准。

强迫游泳实验于强迫游泳实验前1 d，予小鼠游泳适应1次，共适应6 min。实验时，小鼠被迫在一个开放的圆柱形容器内游泳(直径10 cm，高25 cm)，水温(25±1)℃，共游泳6 min，计算后4 min的不动时间。当小鼠没有斗争，保持浮动时，则被认为是静止的。

新奇环境摄食实验小鼠禁食24 h后放入(40×40) cm开场中。单颗粒的小鼠正常食品饲料称量后记下重量，放置在开场中心。每只小鼠从固定的角落放入开场中，使用视频设备录像记录10 min。实验结束时再次称量食品饲料重量，计算食品饲料减少的重量作为本实验食物消耗量(食物摄入量=后一次食物重量-前一次食物重量)，从放入开场中到主动咀嚼食物的时间作为本实验潜伏期。

结果

慢性应激对母代3个时间点(造模3周后、休息3周后及分娩3周后)悬尾实验的影响在慢性应激3周后，造模组雌鼠悬尾不动时间显著长于正常对照组(t=6.191，P=0.000)，表现出抑郁样行为；在给予造模组雌鼠休息3周(期间不予任何刺激)后，测量悬尾实验显示，造模组与正常对照组悬尾不动时间差异无统计学意义(t=0.648，P=0.650)，显示抑郁样表型的消退，此时造模组雌鼠行为恢复正常；然而，在造模组雌鼠受孕分娩后3周，测量悬尾不动时间显示，造模组雌鼠悬尾不动时间显著长于正常对照组(t=5.290，P=0.000)，再次表现抑郁样行为(图1)。

产后抑郁对子代小鼠青少年期(3及4周龄)体质量的影响产后抑郁子代小鼠在3周龄时体质量显著低于正常对照组[CTL-F1：(11.04±0.54) g，PPD-F1：(7.70±0.87) g，t=9.180，P=0.000]，并且这一体质量差异持续到4周龄[(CTL-F1：(14.12±0.69) g，PPD-F1：(11.97±1.48) g，t=3.723，P=0.002](图2)。

产后抑郁对子代小鼠糖水偏好的影响产后抑郁子代小鼠(PPD-F1)糖水偏好较正常对照组(CTL-F1)显著下降(t=7.638，P=0.000)(图3A)。

产后抑郁对子代小鼠强迫游泳实验中不动时间的影响产后抑郁子代小鼠(PPD-F1)在强迫游泳实验中，不动时间较正常对照组(CTL-F1)显著上升(t=4.074，P=0.001)(图3B)。

产后抑郁对子代小鼠在新奇环境摄食中摄食潜伏期及单位体质量摄食量的影响产后抑郁子代小鼠(PPD-F1)在新奇环境摄食实验中，摄食潜伏期较正常对照组(CTL-F1)显著延长(t=5.622，P=0.000)，并且单位体质量摄食量显著下降(t=3.331，P=0.005)(图4)。

MOD：模型；CTL：对照；与CTL组比较，aP=0.000

MOD：model；CTL：control；aP=0.000 compared with CTL group

图 1MOD及CTL在慢性应激结束后(A)、休息3周后(B)及分娩3周后(C)悬尾实验结果

Fig 1Results of tail suspension test of MOD and CTL group at post stress(A)，after rest for 3 weeks(B)，and after delivery for 3 weeks(C)

CTL-F1：对照子代；PPD-F1：产后抑郁子代；与CTL-F1组比较，aP=0.000，bP=0.002CTL-F1：control-F1；PPD-F1：postpartum depression-F1；aP=0.000，bP=0.002 compared with CTL-F1 group

图 2CTL-F1及PPD-F1代3周龄(A)及4周龄(B)体质量

Fig 2Body mass of CTL-F1 and PPD-F1 mice at 3-week (A) and 4-week old (B)

与CTL-F1组比较，aP=0.000，bP=0.001

aP=0.000，bP=0.001 compared with CTL-F1 group

图 3产后抑郁对子代小鼠(PPD-F1)糖水偏好(A)及强迫游泳(B)的影响

Fig 3Effect of postpartum depression on PPD-F1 mice during sucrose preference test (A) and forced-swimming test (B)

与CTL-F1组比较，aP=0.000，bP=0.005

aP=0.000，bP=0.005 compared with CTL-F1 group

图 4产后抑郁对子代小鼠(PPD-F1)新奇环境摄食潜伏期(A)及摄食量(B)的影响

Fig 4Results of novelty-suppressed feeding test latency (A) and food intake test(B) for CTL-F1 and PPD-F1 mice

讨论

本研究产后抑郁子代小鼠体质量明显低于正常对照组，体现产后抑郁母代的喂养不当及关爱不良。糖水偏好是测量小鼠抑郁模型中快感缺失这一典型症状的金标准，得到国内外的广泛认可。而产后抑郁子代小鼠表现出显著的糖水偏好下降，反映其典型的抑郁症状，并且产后抑郁子代小鼠强迫游泳不动时间显著延长，这一结果反应了其比正常对照组小鼠更易产生行为绝望。新奇环境摄食早期作为测量动物焦虑的标准，近年被国内外研究者认为更能反应动物的抑郁状态。本研究产后抑郁子代小鼠摄食潜伏期延长，并且摄食量显著下降，表现明显的抑郁状态。

母亲产后抑郁严重影响子女的生理及心理发展，使其子女更易患精神疾病。母亲抑郁的子女们，抑郁症的发病率更高。Hammen和Brennan[11]提出，抑郁母亲的子女们更容易患抑郁症。本研究结果显示，产后抑郁母亲对于子代可能产生不良影响，使小鼠早在青少年期就表现出抑郁样行为。这一结果与Nomura等[12]的研究结果一致。Nomura等[12]研究显示，抑郁母亲的子女们，有20%～41%在学龄期及青少年期已被诊断出抑郁症。产后抑郁母亲影响下的子代抑郁症，病情可能更严重，复发率更高，更易形成难治性抑郁症。

临床上，产后抑郁母亲一般于产前已有过抑郁发作史或经历过应激事件，产妇在经历妊娠过程后，有可能形成产后抑郁。因而，产前的应激史对于形成产后抑郁有重要影响。然而，对于产后抑郁的动物模型大部分只于产后予以应激造模，如Kurata等[13]采用对分娩后SD大鼠习得性无助造模，形成产后抑郁，或如Nakata等[14]对产后小鼠每日束缚3 h，共造模3周造成产后应激，从而形成产后抑郁。但是，这种造模方式与临床发病模式相差较大。因此，本研究的动物模型模仿临床发病模式，于产前给予应激，待抑郁表型消退后，通过受孕分娩过程再次唤起抑郁表型，这样的造模方式更贴近临床产后抑郁发病模式，依据此动物模型观察产后抑郁母代对子代抑郁症发病的影响，更能接近真实的产后抑郁母代影响子代情况，从而使研究结果更加可靠。

产后抑郁母代在应激后所表现出的抑郁样行为可消退，并且可由分娩再次诱发，这其中的机制可能由产前应激产生下丘脑-垂体-肾上腺轴的异常变化，导致精神疾病的易感性增强，这一变化在应激结束后休息的3周内可能消退，然而经历受孕分娩这一过程可能再次诱发其异常变化。下一步研究应集中于对母代的下丘脑-垂体-肾上腺轴及应激相关激素水平的监测，以期解释母代的抑郁样行为。

应激会对小鼠的怀孕率产生影响。本研究使用产前应激，待抑郁表型消退，即行为恢复正常后才受孕分娩，而在分娩后再次观察到抑郁样行为，因此，这种造模方式可能对小鼠的受孕率及分娩率影响较弱。考虑到大部分动物研究使用雄性作为实验对象，本研究使用雄性子代作为主要的观察对象，对雌性子代小鼠未做进一步观察，后续研究应关注性别对实验的影响。

本研究产后抑郁子代小鼠在青少年期表现出体质量显著低于正常对照组，这一方面可能是因为母代喂养不当，导致子代营养缺乏，生长发育不良，另一方面可能是因为母代关爱有失，导致子代小鼠神经系统发育不良，应激水平增加，应激相关分子异常表达。进一步研究可从与应激相关脑区分子的变化方面观察子代小鼠抑郁样行为的分子机制。

青少年期是子女生理心理发展的重要时期，本研究表明，产后抑郁的母亲可能增加其子代患抑郁症的风险，并且最早可能于青少年期已有抑郁样行为。目前对母亲产后抑郁影响子代抑郁发病的生理机制研究较少，因此对于其内在的发病机制亟待进一步研究。

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Effect of Postpartum Depression on Adolescent Depression of Mice Offspring

WU Ru-yan，LU Cai，XIA Bao-mei，XUE Wen-da，TAO Wei-wei，CHEN Gang

Center for Translational Systems Biology and Neuroscience，School of Basic Biomedical Science，Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210023，China

ABSTRACT：ObjectiveTo study the effect of postpartum depression (PPD) on adolescent depression of mice offspring. MethodsTotally 48 Balb/c female mice were equally randomized into control group and stress group. Control group was not given any stress，whereas stress group were given chronic stress：constraining (6 h/d) combined with light stimulation for 24 hours(twice a week). The stress group was divided into 3 groups to measue the animals’ behaviors immediately after modeling，three weeks after modeling，and three weeks after delivery to test whether the PPD models were successfully constructed. The first generation (F1) of normal mothers and PPD-born F1 were as follows：control group (CTL-F1) and PPD offspring group (PPD-F1). The 3- 4-week-old male CTL-F1 and PPD-F1 mice (n=8 each) were weighed，and received sucrose preference test，forced swimming test，and novelty-supressed feeding test to measure the depression-like behaviors. ResultsThe 3-and 4-week-old PPD-F1 had significantly lower body mass than CTL-F1 (P=0.000，P=0.002). Also，the sucrose preference significantly decreased (P=0.000)，the forced swimming immobility time significantly increased (P=0.001)，the latency to feed significantly increased (P=0.000)，while food intake significantly decreased (P=0.005). ConclusionPPD offspring may be more susceptible to depression，with a possible eary onset in adolescence.

Key words：postpartum depression offspring；depression；adolescence

(收稿日期：2015- 06- 23)

Corresponding author：CHEN GangTel：025- 85811160，E-mail：chengang@njucm.edu.cn

DOI：10.3881/j.issn.1000- 503X.2016.02.011

中图分类号:R749.4

文献标志码:A

文章编号：1000- 503X(2016)02- 0187- 05

通信作者：陈刚电话：025- 85811160，电子邮件：chengang@njucm.edu.cn

基金项目：江苏省自然基金(BK20140961，BK20140962)和南京中医药大学青年基金(12XZR04，13XZR06)Supported by the Natural Science Foundation of Jiangsu Province (BK20140961，BK20140962) and Nanjing University of Chinese Medicine Funds for Young Scientists (12XZR04，13XZR06)