急性脑梗死患者HMGB1水平动态变化研究

韩亚州　吕壮伟　董家丰

1)河南市沁阳人民医院神经内二科　沁阳　454550　2)新乡医学院三附院检验科　新乡　453000　3)河南市沁阳市人民医院　沁阳　454550



急性脑梗死患者HMGB1水平动态变化研究

韩亚州1)吕壮伟2)董家丰3)

1)河南市沁阳人民医院神经内二科沁阳4545502)新乡医学院三附院检验科新乡4530003)河南市沁阳市人民医院沁阳454550

【摘要】目的观察急性脑梗死患者血清HMGB1表达水平的动态变化，探讨HMGB1在急性脑梗死中的临床意义。方法60例患者分为实验组和健康人对照组，2组分别于发病1 d、2 d、4 d取空腹静脉血，分别采用RT-PCR方法和酶联免疫吸附试验测定血清HMGB1表达水平的变化。结果实验组血清HMGB1的表达水平在测定时间内持续升高，显著高于对照组(P<0.05)。结论在急性脑梗死患者中，HMGB1起重要的炎症因子作用。

【关键词】急性脑梗死；HMGB1

高迁移率组蛋白Bl(high mobility group box-1，HMGBl)是一种存在于真核生物细胞内的非组蛋白染色体结合蛋白[1]。研究证实，HMGB1作为一种炎症介质和致炎细胞因子，是启动和维持炎症级联放大效应的中心分子，与多种肿瘤、关节炎、动脉粥样硬化、糖尿病、多器官功能障碍综合征等发病机制关系密切，已成为近年危重医学研究的热点之一[2]。急性脑梗死是一种复杂的炎症过程疾病，是伴脑血管梗死后出现的炎症反应造成的脑损伤。本文主要研究HMGB1与急性脑梗死的相关性，以期为急性脑梗死的治疗提供理论依据。

1资料和方法

1.1一般资料选取我院2014-01-2015-01，急性脑梗死住院病人60例，男30例，女30例；年龄50～70岁；对照组60例，均来至我院健康体检老年人，与实验组年龄和性别配对。2组一般临床资料无明显差别(P>0.05)，具有可比性。

1.2主要试剂Trizol试剂、Taq酶，DNA MarkerII,反转录酶(M．MLv)，所用引物(见表1)均为上海英骏生物公司合成。酶免试剂盒由GIBCO公司提供。

表1　PCR引物序列

1.2方法

1.2.1标本采集：采集急性脑梗死患者发病1 d、2 d、4 d的空腹静脉血3 mL，普通生化管采集，采集后，3 000 r/min，5 min，-80℃冰箱放置，成批测定。对照组方法同实验组。

1.2.2RT-PCR检测血清HMGB1 mRNA水平变化：提取全血细胞的总RNA，RT-PCR检测HMGB1的mRNA的表达的变化。退火温度是58 ℃。取RT-PCR扩增产物5 μL在2%琼脂糖凝胶上电泳20 min，用uvp成像仪获取图像，用相对灰度值(HMGB1灰度值/GAPDH灰度值)表示样本HMGB1mRNA相对表达。

1.2.3酶联免疫法检测血清HMGB1蛋白水平变化：采用酶联免疫法检测HMGB1表达变化。

2结果

2.1外周血清HMGB1蛋白表达结果实验组1 d、2 d、4 d时血清HMGBl高于正常健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。实验组中患者在发病l d、2 d、4 d时间段血清HMGB1表达水平持续性升高，各个时间段之间数值比较差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2　外周血清HMGB1表达水平　

注：2组比较，P<0.05

2.2外周血清HMGB1 mRNA相对表达结果RT-PCR检测显示，各组均存在HMGB1条带648bp，也存在内参GAPDH条带568bp。实验组1 d、2 d、4 d检测的HMGB1 mRNA表达的水平依次升高。见图1。利用灰度分析软件分析，HMGB1在每组中相对表达的灰度值依次是健康组的HMGB1 mRNA相对表达灰度值0.25±0.04,实验组1 d 、2 d、3 d HMGB1 mRNA相对表达灰度值分别为0.45±0.07、0.65±0.11、0.87±0.14，各时间段比较差异有统计学意义(P<0.05)。

图1　1 d、2 d、4 d检测的HMGB1 mRNA表达的水平

3讨论

实验证明，急性脑梗死后随着神经元缺血缺氧坏死、炎症细胞因子增加、趋化因子上调等一系列免疫炎症反应，加重脑组织损伤[3-4]。但急性脑梗死的炎性损伤机制比较复杂，目前还不明确。HMGB1是高迁移蛋白家族成员之一，在炎症介质中起着重要作用。

文献[5]报道，发现单做酶联免疫吸附实验来测定急性脑梗死后HMGB1的变化；也有文献[6]报道经做RT-PCR和流式细胞技术的方法来测定急性脑梗死后HMGB1的免疫学作用；本实验分别从HMGB1的mRNA水平和蛋白水平来研究HMGB1在急性脑梗死后的变化。

实验的结果显示，急性脑梗死后，经1 d、2 d、4 d后，外周血中HMGB1的含量依次升高。从而说明HMGB1在急性脑梗死后的病程中起重要作用。为了改善急性脑梗死后的炎症病程，我们可以HMGB1为靶点进行治疗，这样可改善急性脑梗后的炎症进程。

4参考文献

[1]Yang H,Wang H，Czura CJ,et al．The cytokine activity of HMGBI[J]．J Leukoc Biol，2005,78(1)：1-8．

[2]Scaffidi P，Misteli T，Bianchi ME．Release of chromat protein HMGBI by necrotic cells triggers inflammation[J]．Nature，2002,418(6 894)：191-195.

[3]Bolanle M,Famakin.The Immune Response to Acute Focal Cerebral Ischemia and Associated Post-stroke Immunodepression: A Focused Review[J].Aging Dis,2014,5(5):307-326.

[4]Benakis C,Garcia-Bonilla L,Iadecola C,et al．The role of microglia and myeloid immune cells in acute cerebral ischemia[J].Front Cell Neurosci,2014,8:461.

[5]黄兴友.脑梗死患者HMGBl和IL-1水平动态变化研究[J]检验与临床,2012,50(20)：64-65.

[6]祁玲,刘强.HMGB1在急性脑梗死患者外周血的表达和免疫学作用[J]中国免疫学杂志,2013,29(11)：1 186-1 189.

(收稿2015-10-29)

【中图分类号】R743.33

【文献标识码】B

【文章编号】1673-5110(2016)06-0058-02