CK19表达与子宫颈癌前哨淋巴结转移的关系

李　琳　邢　辉　覃小敏　周　敏

441021 湖北文理学院医学院襄阳市中心医院



CK19表达与子宫颈癌前哨淋巴结转移的关系

李琳邢辉覃小敏周敏

441021 湖北文理学院医学院襄阳市中心医院

【摘要】目的观察CK19表达与子宫颈癌前哨淋巴结转移的关系。方法回顾性分析行宫颈癌根治术治疗的46例宫颈癌患者的临床资料，采用mRNA和免疫组化检测CK19在子宫颈前哨淋巴结中的表达。结果RT-PCR分析结果显示82个淋巴结中，11个淋巴结CK19高表达，71个淋巴结CK19低表达。免疫组化染色结果显示，11个CK19高表达淋巴结免疫组化染色阳性，71个CK19低表达淋巴结免疫组化染色阴性。多因素分析结果表明CK19高表达与前哨淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。结论CK19表达与宫颈癌患者淋巴结转移呈正相关，CK19有可能称为宫颈癌转移的分子标记物。

【关键词】细胞角蛋白19；子宫颈癌；前哨淋巴结；转移

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:387～389)

目前很多妇科肿瘤的预后与淋巴结转移的发生发展有着密切的关系，这种重要的临床指示提示我们对这方面进行研究，我们推测可能是由于某种原因导致这种生物行为，有些研究表明，在评估乳腺癌或者黑色素瘤患者时发现，这些患者病情复发的1个重要原因时是由于其发生微转移，这种转移的肿瘤大小多数是0.2～2 mm，与淋巴结转移呈阴性。那么，临床上的淋巴结切除在妇科肿瘤中的作用仍然是非常重要的，它直接关系着肿瘤分级[1-2]。例如宫颈癌，子宫内膜癌。在病理分级下确定其手术范围直接影响着患者的5年生存率。

淋巴结的转移被视为妇科肿瘤疾病的预后指标，所以组织病理分型的确定能有效帮助患者确定可靠地治疗方案，目前很大一部分研究集中在淋巴结微转移的研究上，但是如何确定其淋巴结转移是困扰广大医疗工作者的1个重大因素[3-4]。CK19属于细胞角蛋白1型，其分子量多集中在40～56 kD，CK19多分布在官腔上皮组织中，如，胆管，胰腺，肾小管和胃肠道粘膜处，CK19表达在鳞癌组织中[5]。CK19作为预后的指标已经被用作甲状腺乳头癌，肝细胞癌和肠癌中[6-7]。但是CK19在子宫颈癌前哨淋巴结中的转移还未被研究清楚。

1材料与方法

1.1临床资料

回顾性分析2011年5月到2013年5月于我院妇瘤科进行宫颈癌根治术治疗的宫颈癌患者46例，对照患者是有病理活检后确认为良性肿瘤的组织，所有操作均符合伦理规范。其中鳞癌32例，乳头状腺癌9例，鳞状细胞癌角质化3例，鳞腺癌2例。临床分期：Ⅰb1期27例，Ⅰb2期15例，Ⅱa1期2例，Ⅱa2期例。

1.2方法

1.2.1Semi-quantitation PCR试剂及方法逆转录试剂盒购自TaKaRa公司，引物CK19，F:5′-TCGACAACGCCCGTCTG-3′，R:5′-CCACGCTCATGCGCAG-3′；GAPDH，F:GGTGAAGGTCGGTGTGAACG；R:CTCGCTCCTGGAAGATGGTG。合成于Invitrogen,USA。称取等量组织，采用Trizol法提取RNA，RNA略干后加入20 μL DEPC水。待RNA充分溶解后测量RNA含量和纯度。用TaKaRa公司的逆转录试剂盒逆转录成cDNA。

1.2.2免疫组化脱蜡：按照常规脱蜡方法，在二甲苯、无水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、85%乙醇、80乙醇脱蜡，大约每次时间为10 min。抗原修复：PBS洗后，加入3%H2O2，37 ℃浸泡10 min，从而除去内源性的过氧化氢酶，PBS洗，再加入柠檬酸缓冲液，高温高压修复5 min，冷却至室温。血清封闭： PBS洗，5 min，洗3次，擦干组织周围的PBS液，然后10%BSA封闭，放入37 ℃温箱中1 h。加一抗：将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，加一抗，加完一抗(CK19，购自于santa)后于4 ℃冰箱中保存过夜。加二抗：将载玻片从冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5 min，擦干组织周围的PBS后加上二抗，然后置于37 ℃温箱中1 h。加显色剂：将片子从温箱中取出,放入PBS中洗3次，每次5 min，擦干组织周围的PBS后加上DAB显色剂。

1.3统计学处理

应用SPSS 11.0统计软件包处理，统计学方法采用t检验，Pearson相关分析，χ2检验。

2结果

2.1CK19在前哨淋巴结中的表达

在提取组织RNA经由逆转录试剂盒逆转成cDNA后进行RT-PCR分析，在检测的82个淋巴结中，我们发现11个淋巴结CK19高表达，71个淋巴结CK19低表达，见图1。

2.2免疫组化检测CK19在组织中的表达情况

82个前哨淋巴结免疫组化染色结果显示：11个CK19高表达淋巴结免疫组化染色阳性，71个CK19低表达淋巴结免疫组化染色阴性。

1为高表达，2为低表达。

2.3多因素分析结果

多因素分析结果表明CK19高表达与前哨淋巴结转移呈正相关(P<0.05)，见表1。

表1　多因素分析结果

3讨论

宫颈癌是人类疾病中恶性程度较高的一类疾病，其主要是易发生转移，特别是淋巴结的转移是导致其难治愈的一个主要原因。转移的肿瘤通过血液，淋巴管，进而形成多种其他肿瘤，淋巴管的转移包括一系列的复杂过程，包括，①原位癌恶性肿瘤细胞扩散至旁边淋巴管；②肿瘤细胞通过淋巴管转运至邻近的淋巴结；③肿瘤细胞在淋巴结中的着落；④转移性的肿瘤在淋巴结中的扩散[8]。

CK19最近研究较为广泛，在最近的研究多集中在CK19家族在乳腺瘤和肝癌及肠癌中的作用[9-10]。CK19是细胞角蛋白家族中的一员，其包绕着上皮细胞，在早期的胚胎发育过程中内分泌细胞在胰腺中高表达CK19，这些表达会随着妊娠期的到来表达减弱甚至消失，但是所有的管腔和腺上皮细胞均表达CK19[11-13]。特别是在在淋巴结管腔中的表达具有非常重要的研究意义。

基于此本研究展开在宫颈癌前哨淋巴结中进行CK19的研究，在我们的研究中我们首先对宫颈癌患者转移淋巴结组织进行mRNA的检测，在我们的检测中有患者高表达也存在低表达患者，进而利用免疫组化表达检测，在两项检测均为高表达患者中进行归类，然后进行临床数据的整理，在我们统计后发现CK19高表达的患者，发生淋巴结转移也较多，表达低的患者多数未发生转移或发生转移较少，且具有统计学比较意义(P=0.046)。所以我们初步的出结论在宫颈癌转移患者体中CK19表达与淋巴结转移呈正相关。

通过本研究其很多同仁的研究必将更加证实CK19与宫颈癌转移的关系，认为在今后研究愈加深入后CK19极有可能称为宫颈癌转移的分子标记物。

参考文献

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sted prior to OSNA analysis of sentinel lymph nodes in breast cancer〔J〕.Virchows Arch,2013,462(1):121.

(编辑：吴小红)

Relationship between the Expression of CK19 and Sentinel Lymph Node Metastasis of Cervical Cancer

LILin,XINGHui,QINXiaomin,etal.

XiangyangCentralHospital,Xiangyang,441021

【Abstract】ObjectiveTo detect the relationship between the expression of CK19 and sentinel lymph node metastasis of cervical cancer.MethodsThe clinical data of 46 patients with cervical cancer treated by radical resection were retrospectively analyzed.The expression of CK19 in sentinel lymph node metastasis of cervical cancer was detected by mRNA and immunohistochemistry.ResultsRT-PCR analysis showed that in 82 lymph nodes,there were 11 lymph nodes with high expression of CK19,71 lymph nodes with low expression of CK19.Immunohistochemical staining showed that 11 CK19 high expression lymph nodes were positive for immunohistochemical staining,71 CK19 low expression lymph nodes were negative for immunohistochemical staining.Multivariate analysis showed that CK19 expression was positively correlated with sentinel lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionCK19 expression is positively correlated with lymph node metastasis in patients with cervical cancer.CK19 may be a molecular marker for cervical cancer metastasis.

【Key words】CK19;Cervical cancer;Sentinel lymph node;Metastasis

(收稿日期2015-06-09修回日期 2016-01-25)

中图分类号：R737.33

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)03-0387-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.03.012

通讯作者：周敏