前列腺癌组织中ERG蛋白的表达变化及意义

景志亮 ，陈永华，曹军，赵颖海，柳建军

(1广东医学院附属医院，广东湛江 524001；2广东医学院病理学教研室)



前列腺癌组织中ERG蛋白的表达变化及意义

景志亮1，陈永华1，曹军1，赵颖海2，柳建军1

(1广东医学院附属医院，广东湛江 524001；2广东医学院病理学教研室)

摘要：目的观察前列腺癌(PCa)组织中ERG 蛋白的表达变化并探讨意义。方法 选择144例PCa和100例良性前列腺增生(BPH)患者，取其前列腺组织，采用免疫组化MaxVision法检测ERG 蛋白，并分析其与相关临床病理特征的关系。结果PCa及BPH组织中ERG蛋白的阳性表达率分别为25.0%和0，两者比较，P<0.01；PCa组织中ERG蛋白表达与患者的年龄、术前前列腺特异性抗原值及远处转移无关(P均>0.05)，与Gleason 评分呈负相关(r=-0.175,P<0.05)，Gleason 评分≤7分组ERG蛋白表达率高于Gleason 评分>7分组(P<0. 05)。结论 PCa患者前列腺癌组织中ERG蛋白表达升高，ERG蛋白的检测可能有助于PCa患者的鉴别诊断及病理分级。

关键词：前列腺肿瘤；ERG蛋白；前列腺增生；Gleason 评分

前列腺癌(PCa)是欧美国家最常见的男性恶性肿瘤[1]。早期诊断和早期治疗PCa可改善临床预后，降低病死率。传统早期诊断是通过检测血清中前列腺特异性抗原(PSA)来实现，但该检测方法的特异性不强。Tomlins等[2]发现受雄激素调节的跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)可与多个ETS转录因子融合，进而诱导后者在蛋白质水平上的过度表达。TMPRSS2在前列腺原发癌及转移癌中高表达，且与肿瘤细胞的分化程度相关[3]。ETS基因是一系列拥有与鸟类白血病病毒E26高度保守的同源序列的转录因子，通过参与调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡、侵袭和转移，对肿瘤的发生、发展、转化和转移产生影响[4]。人类ETS转录因子家族共有27种基因，根据结构不同分为11个亚型，包括ETS、ERG、ELG、ELF等。在全部ETS 基因融合中，TMPRSS2-ERG最常见[5]。而ERG蛋白的表达与TMPRSS2-ERG融合基因的状态有显著相关性，可以精确反映TMPRSS2-ERG的状态[6]。本实验旨在通过研究PCa组织中ERG 蛋白的表达情况及其与相关临床病理特征的关系，初步评估其临床应用价值。

1资料与方法

1.1临床资料144份PCa穿刺活检标本及100份良性前列腺增生(BPH)标本取自广东医学院附属医院病理科2010年10月~2014年7月存档蜡块，均经两名以上资深病理医师确诊。患者均为男性，年龄50～92岁；术前血PSA水平1.11～4 164 μg/L；Gleason评分4～10分；有远处转移灶者11例。

1.2组织中ERG蛋白的检测标本均经10%中性甲醛固定,常规石蜡包埋, 5 μm厚度切片。采用免疫组化MaxVision法检测, 按试剂盒操作说明进行。兔抗人ERG 单克隆抗体为北京中杉金桥公司产品。即用型快速免疫组化MaxVisionTM检测试剂盒(兔)为福州迈新生物技术开发有限公司产品。DAB显色试剂盒为北京中杉公司产品。每一批实验均设置阳性和阴性对照, 以血管内皮细胞为阳性内对照, 阴性对照用PBS代替一抗。

1.3免疫组化结果判定标准ERG蛋白表达定位于细胞核，为淡黄色至棕褐色颗粒状。综合染色强度和阳性细胞数量积分，每张切片随机选取至少5个高倍视野，采用半定量计分方法。①按着色深浅评分: 未着色为0 分，浅黄色为1分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分；②按显色细胞比例评分：阳性细胞数≤5%为0分，6%～25% 为1分， 26%～50% 为2 分，51%～75% 为3 分，>75%为4 分; 根据两项指标的积分数进行最终判定:0分为-，1～ 4分为+，5～8分为++，9～12分为+++。将+和++定义为低表达，+++定义为高表达。对实验结果进行双盲法评估。

1.4统计学方法采用SPSS17.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1PCa及BPH组织中ERG蛋白的表达144份PCa组织与100份BPH组织中ERG蛋白阳性表达率分别为25.0%(36/144)和0(0/100)，两种组织比较差异有统计学意义(χ2=29.327，P=0.000)。

2.2PCa组织中ERG蛋白表达与临床病理特征的关系见表1。

2.3相关性分析Gleason 评分与ERG蛋白表达呈负相关(P<0. 05)见表2。

表1　PCa组织中ERG蛋白表达与临床病理

表2　PCa组织中ERG蛋白表达与Gleason 评分的

3讨论

本研究选用较大样本量PCa患者(n>100)，并设置BPH组作为对照，采用高灵敏度的免疫组化MaxVision法检测ERG蛋白在中国PCa人群中发生的频率和临床病理特征。结果显示，ERG蛋白在PCa组织中特异性表达，但在BPH标本中却未发现该蛋白，提示ERG可能是一种高度特异的PCa标志物，与Tomlins等[2]的研究结果一致。目前病理穿刺活检诊断PCa主要依据组织学形态。当一些PCa与非癌的穿刺活检标本鉴别困难时，除了应用基底细胞标记抗体如CK5/6、p63等，还可联合 ERG抗体进行辅助鉴别诊断。

虽然ERG蛋白诊断PCa的特异性很高, 但灵敏度偏低，本实验中检出率只有25%。戚美等[7]的研究也发现ERG融合在PCa人群中发生率仅为23%。许多研究[5,8，9]表明，约50%PCa患者癌组织过度表达ERG蛋白，TMPRSS2基因与ERG 基因融合的发生率为46%～56%。对比发现，TMPRSS2-ERG 基因融合在我国PCa患者中的发生频率较西方国家低。Farrell等[10]的研究发现，与白种美国男性相比，非洲裔美国PCa患者中ERG 融合基因的检测率显著低下，白人中的检出率约为黑人的3倍。最新研究表明，马来西亚印度裔PCa患者中ERG蛋白检出率与华裔患者相比，翻了一番[11]。虽然造成 ERG融合基因阳性率差异的机制还没有阐明，但目前的研究揭示可能与种族和地域性的差异有关。

TMPRSS2和ERG 基因均位于21 号染色体长臂上，相距3 Mb 碱基单位，通过易位或基因间片段的缺失而发生融合[2]。目前对于ERG 基因融合的临床意义尚有争论。 Hägglöf 等[12]研究表明，ERG的表达与高临床分期、高Gleason评分及转移的出现有关。Qi等[13]使用多重变量分析发现 ERG基因融合是一项独立的预后因素，ERG融合状态有助于识别那些预后不良的患者。与之相反，Winnes等[14]的研究显示，ERG蛋白阳性PCa患者比阴性的患者Gleason 评分低且有更高的生存率。Steurer等[15]研究表明，ERG融合基因的活化与PCa患者的年龄轻和级别低密切相关。本实验研究了PCa组织中ERG蛋白表达与相关临床病理参数的关系，包括患者的年龄、术前PSA值、有无远处转移及Gleason 评分(组织学分级)。结果显示PCa组织中ERG蛋白表达与患者的年龄、术前PSA值及远处转移无关，Gleason 评分≤7分(低-中级别)组ERG蛋白表达率明显高于Gleason 评分>7分(高级别)组，并且ERG蛋白表达与Gleason 评分呈负相关。提示ERG蛋白可能是一种高度特异的PCa标志物，ERG蛋白的检测可能为PCa患者的鉴别诊断及病理分级提供参考。

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Expression changes and significance of ERG protein in prostate cancer

JINGZhiliang1,CHENYonghua,CAOJun,ZHAOYinghai,LIUJianjun

(1TheAffiliatedHospitalofGuangdongMedicalCollege,Zhanjiang524001,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression changes and significance of ERG protein in the prostate cancer (PCa) tissues. MethodsThe prostate tissues from 144 patients with PCa and 100 patients with benign prostatic hyperplasia (BPH) were selected. The expression of ERG protein was detected by immunohistochemical MaxVision method, and their relationships with clinicopathological parameters were analyzed. ResultsThe positive expression rates of ERG protein in the PCa and BPH tissues were 25.0% and 0, respectively (P<0. 01). The ERG protein expression in the PCa tissues was not related with age of patient, preoperative PSA value and distant metastasis (all P>0. 05), and was negatively correlated with Gleason score (r=-0.175, P<0. 05). The ERG protein expression rate in the Gleason score≤7 group was significantly higher than that of the Gleason score >7 group (P<0. 05). ConclusionThe expression of ERG protein in the prostate cancer tissues of PCa patients is increased, and the ERG protein detection may provide a reference for the differential diagnosis and pathological grading.

Key words:prostatic neoplasms; ERG protein; prostatic hyperplasia; Gleason score

(收稿日期：2015-09-20)

中图分类号：R737.25

文献标志码：A

文章编号：1002-266X(2016)01-0012-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.01.004

通信作者简介：柳建军(1961-)，男，教授，主任医师，主要研究方向为泌尿及男性生殖系统肿瘤。E-mail:zj-liujj@163.com

作者简介：第一景志亮(1981-)，男，硕士，主治医师，主要研究方向为肿瘤病理。E-mail:150079294@qq.com

基金项目：国家自然科学基金面上项目(81272833)；广东医学院青年基金项目(XQ1326)。