肺癌组织中Kiss-1蛋白的表达变化及意义

王嘉，孙佳玮，韩双双，孙武装，王鹏羽，王丽红

(河北医科大学第一医院，石家庄050031)



肺癌组织中Kiss-1蛋白的表达变化及意义

王嘉，孙佳玮，韩双双，孙武装，王鹏羽，王丽红

(河北医科大学第一医院，石家庄050031)

摘要：目的 探讨Kiss-1蛋白在肺癌组织中的表达变化及意义。方法 选取肺癌患者60例,其中肺鳞癌3例(鳞癌组)、腺癌27例(腺癌组)，另择肺癌同侧距肿瘤边缘5 cm以上的肺泡(25例)(肺泡组)及支气管正常组织(29例)(支管组)。采用免疫组化SP法检测Kiss-1蛋白的表达，并分析其与临床病理参数的关系。结果Kiss-1蛋白在肺鳞癌和肺腺癌组中的表达均显著低于肺泡组或支气管组(P均<0.01)；Kiss-1蛋白表达与肺癌淋巴结转移、TNM分期明显相关(P均<0.05),与肺癌患者性别、年龄及肿瘤大小、分化程度、组织学类型无明显相关(P均>0.05)。结论 Kiss-1蛋白在肺癌组织中表达降低，其在肺癌的发生和转移过程中发挥抑癌作用。

关键词：肺肿瘤；Kiss-1蛋白；免疫组织化学

肺癌是人类常见的呼吸系统恶性肿瘤，其发病率和病死率均居恶性肿瘤首位[1,2]，严重威胁人类生命健康。肺癌的病理组织学分型主要包括鳞癌、腺癌、腺鳞癌、未分化癌等，其中以鳞癌和腺癌常见，约占全部上皮来源肺恶性肿瘤的70%左右[3]。其发病机制未明，目前认为是由癌基因和抑癌基因共同参与调节的复杂过程。研究表明，Kiss-1基因作为肿瘤转移抑制基因与多种恶性肿瘤相关，其蛋白产物对肿瘤的浸润和转移发挥抑制作用[4]。2010年6月～2013年6月，本研究观察了Kiss-1蛋白在肺鳞癌、肺腺癌及正常支气管和肺泡组织中的表达情况，分析其与临床病理参数的关系，探讨其在肺癌发病过程中的作用。

1资料与方法

1.1临床资料肺癌患者60例(肺癌组)，均符合2004版WHO肺肿瘤分类诊断标准，经病理检查确诊。男41 例、女19 例，年龄42～81(63.57±9.06)岁。肺鳞癌33例(鳞癌组)，腺癌27例(腺癌组)；低分化17例，中高分化43例；伴有周围淋巴结转移26例，无周围淋巴结转移34例。对照组标本选取肺癌同侧距肿瘤边缘5 cm以上的肺泡(25例)(肺泡组)及支气管正常组织(29例)(支气管组)。入选者术前均未进行化疗或放疗。各组年龄、性别有可比性。本研究获得河北医科大学第一医院伦理委员会的批准。

1.2组织Kiss-1蛋白的检测采用免疫组化SP法。所有标本均经甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片，将待检测切片放入恒温烤箱，60~65 ℃过夜，柠檬酸缓冲液煮沸修复，严格按照免疫组化试剂盒说明书步骤进行，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片，显微镜下观察结果。以已知Kiss-1蛋白阳性切片作阳性对照，以PBS液代替一抗作阴性对照。兔抗人Kiss-1蛋白(FL-145)sc-15400单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，免疫组化试剂盒、浓缩型DAB试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

结果判定：采用双盲法显微镜下观察结果，Kiss-1蛋白为细胞质染色，胞质棕黄色为阳性，不着色为阴性。以阳性细胞数及染色强度综合判定[5]。按视野内阳性细胞所占总细胞数的比例计分，≤5%为0分，6%~25%为1分，26%~50%为2分，≥51%为3分；染色强度:不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。每张切片随机取5个400倍视野，二者相加，≤4分为阴性，>4分为阳性。

1.3统计学方法采用SPSS16.0统计软件，计数资料以频数或百分比表示，比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1各组Kiss-1蛋白的表达Kiss-1蛋白在肺癌细胞质呈淡黄色，弱阳性表达；肺泡细胞及支气管黏膜上皮细胞质呈棕黄色，强阳性表达。Kiss-1蛋白阳性表达率在肺癌组为30.00%(18/60)，鳞癌组为30.30%(10/33)，腺癌组为29.63%(8/27)，肺泡组为80.00%(20/25)，支气管组为89.66%(26/29)，Kiss-1蛋白阳性表达率在肺癌组、鳞癌组和腺癌组中均显著低于肺泡组和支气管组(χ2分别为35.660、27.445、25.563,P均<0.01)。Kiss-1蛋白表达在肺泡组与支气管组之间比较差异无统计学意义(χ2=0.374，P=0.541)。

2.2Kiss-1蛋白表达与肺癌临床病理参数的关系见表1。

表1　肺癌Kiss-1蛋白表达与临床病理参数之间的关系

3讨论

Kiss-1是最早在黑色素瘤中发现的肿瘤转移抑制基因，基因定位于1号染色体短臂3区2带，编码一个由145个氨基酸组成的亲水性蛋白质。研究发现，Kiss-1基因在多种恶性肿瘤的发病过程中起抑癌作用。Masui等[6]通过检测30份胰腺癌组织及癌旁胰腺组织中Kiss-1 mRNA表达情况，发现Kiss-1在胰腺癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织。Mitchell等[7]通过研究Kiss-1在胃癌和癌旁组织中的表达情况及与临床病理参数的关系，提出Kiss-1的低表达在胃癌的浸润、淋巴结转移、远处转移过程中发挥着重要作用。张洪兰等[8]研究发现，Kiss-1蛋白表达在非小细胞肺癌组明显低于正常对照组，参与非小细胞肺癌的发生发展过程。Mooez等[9]采用半定量逆转录聚合酶链反应检测乳腺癌及正常乳腺组织中Kiss-1 mRNA的表达，发现Kiss-1在乳腺癌组织中表达明显低于乳腺正常组织。严宝国等[10]检测食管鳞癌及癌旁正常组织中Kiss-1的表达，提示Kiss-1表达缺失参与了食管鳞癌的发生。这些研究结果进一步提示，Kiss-1在多种组织类型的恶性肿瘤中发挥抑癌作用。本文重点探讨Kiss-1在肺鳞癌和肺腺癌发生发展过程中的作用。

通常将原发于支气管-肺的癌统称为肺癌，是指主要发生于支气管黏膜上皮细胞、少数发生于肺泡上皮细胞的恶性肿瘤。本组研究对象包括肺鳞癌33例和肺腺癌27例，是肺癌中最常见的两种病理组织类型。由于不同的起源，肺鳞癌和腺癌可能存在着不同的癌变机制。为了减少偏倚，本研究特设立支气管和肺泡双正常对照组，分析Kiss-1蛋白在组间的表达情况，以提高研究数据的可靠性。研究结果显示，Kiss-1蛋白在肺癌组中表达显著低于支气管组和肺泡组，提示Kiss-1发挥类抑癌基因作用，通过蛋白表达下调参与肺癌发病过程。Kiss-1蛋白表达在肺鳞癌组、腺癌组中均显著低于肺泡组或支气管组，其在双对照组间比较差异无统计学意义，进一步提示Kiss-1蛋白作为抑癌因子，在两种组织类型肺癌的发病中可能存在相同或相似的作用机制，需进一步研究。

本研究中，将60例肺癌患者按照临床病理特征(性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、组织学类型)进行分组，比较各组间Kiss-1蛋白表达情况，差异无统计学意义，说明Kiss-1蛋白表达与肺癌患者的性别、年龄及肿瘤大小、分化程度、组织学类型均无关。Kiss-1蛋白表达在早期(Ⅰ期+Ⅱ期)肺癌组明显高于晚期(Ⅲ期+Ⅳ期)肺癌组，表明Kiss-1蛋白表达与肺癌的病程进展密切相关；Kiss-1蛋白表达在肺癌无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移组，提示Kiss-1蛋白表达下调或缺失可作为肺癌发生淋巴结转移的一个指标，有潜力成为判断肺癌预后的预警指标。以上结果与Zheng等[11]研究结果相一致。目前认为，Kiss-1可能的作用机制是通过与其受体GPR54结合激活细胞内磷脂酶C促进钙离子释放，抑制肿瘤细胞趋化、增殖及转移等[12,13]。

综上，Kiss-1在肺鳞癌和肺腺癌的发生与进展过程中发挥相似的抑癌和抑制肿瘤转移作用，有潜力成为判断肺癌预后的生物学指标。进一步深入研究，可为制订肺癌个体化治疗方案和选择基因治疗靶点提供新思路。

参考文献：

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[7] Mitchell DC, Abdelrahim M, Weng J, et al. Regulation of KiSS-1 metastasis suppressor gene expression in breast cancer cells by direct interaction of transcription factors activator protein-2alpha and specificity protein-1[J]. J Biol Chem, 2006,281(1):51-58.

[8] 张洪兰,舒红,赵晓东,等.非小细胞肺癌组织中KiSS-1的表达及意义[J].山东医药,2009,49(43):37-38.

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[10] 严宝国,董小川,向正凯.食管鳞状细胞癌组织中KiSS-1的表达及其临床意义[J].肿瘤防治研究,2014,41(9):990-992.

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Expression changes of Kiss-1 protein in lung cancer and the clinical significance

WANGJia,SUNJiawei,HANShuangshuang,SUNWuzhuang,WANGPengyu,WANGLihong

(TheFirstHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050031,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression changes of Kiss-1 protein in the lung cancer tissues and its clinical significance. MethodsThe expression of Kiss-1 in 60 cases of patients with lung cancer including 33 cases of patients with lung squamous cell carcinoma (squamous cancer group) and 27 cases of patients with lung adenocarcinoma (adenocarcinoma group), 25 cases of normal alveolar tissues which were taken from 5 cm above the edge of the lung cancer tissues (alveolar group) and 29 cases of normal bronchial tissues (bronchial group) was measured by immunohistochemistry and we analyzed their relationships with the clinical and pathological data. ResultsThe expression of Kiss-1 protein in the squamous carcinoma group and adenocarcinoma group was both significantly lower than that in the alveolar group and bronchial group (all P<0.01). The expression of Kiss-1 protein of lung cancer was significantly related with lymph node metastasis and TNM stage (all P<0.05). The expression of Kiss-1 protein of lung cancer was not significantly related with gender, age, tumor size, the degree of differentiation and histological type (all P>0.05). ConclusionKiss-1 expression was decreased in the lung cancer tissues, which played a tumor suppressor role in the occurrence and metastasis of lung cancer.

Key words:lung neoplasms; bronchi; Kiss-1 protein; immunohistochemistry

(收稿日期：2015-09-20)

中图分类号：R734.2

文献标志码：A

文章编号：1002-266X(2016)01-0018-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.01.006

作者简介：第一王嘉(1971-)，女，副教授，主要研究方向为呼吸系统疾病诊治。E-mail:Tim32@126.com

基金项目：河北省医学科学研究重点课题计划(20090333)。