HPLC测定撑篙竹竹叶中异牡荆苷的含量

黄秀香，陆俊宇，黄珍（河池学院化学与生物工程学院，广西宜州546300）



HPLC测定撑篙竹竹叶中异牡荆苷的含量

黄秀香，陆俊宇，黄珍
（河池学院化学与生物工程学院，广西宜州546300）

摘要：建立HPLC测定撑篙竹竹叶中异牡荆苷的含量。采用反相高效液相色谱法，色谱柱：Z0RBAX SB-C18（2.1 mm× 100 mm，3.6 μm），甲醇（A）-0.1 %冰醋酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0 min~3 min，85 %~70 % B；3 min~6 min，70 %~55 % B；6 min~9 min，55 %~35 % B；9 min~12 min，35 %~35 % B；12 min~15 min，35 %~70 %B；15 min~18 min，70 %~85 %B），流速0.6 mL/min，检测波长340 nm，柱温30℃。异牡荆苷在1.733 1 μg/mL~10.832 0 μg/mL呈良好的线性关系（r=0.999 6），平均回收率为98.01 %，RSD1.02 %，试验测得异牡荆苷的含量为2.928 5 mg/g。

关键词：撑篙竹；异牡荆苷；高效液相色谱；含量测定

撑篙竹（Bambusa pervariabilis McClure），别名稿竹、油竹、白眉竹、花眉竹等，分布在广西、广东、福建等地的沿河岸或低丘地带，其竹叶被《中华本草》、《广西药用植物名录》收载为传统中药[1]，具有清热、除烦、止呕、止血等功效。竹叶提取物含有黄酮类化合物、生物碱、酚酸类化合物等，其中，以异荭草苷、荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷为代表的黄酮类化合物具有抗自由基、抗氧化、抗疲劳、抗菌、抗病毒等功效[2]。同时，黄酮类化合物还应用于具有调节血脂、降血糖、增强免疫、抗炎等功效的保健食品，液体食品中如保健食品口服液、各种酿造、软饮料、调味品等[3]，竹叶还可用于食品添加剂作为抗氧化物。本文采用HPLC测定撑篙竹竹叶中异牡荆苷的含量，为撑篙竹竹叶的在食品添加剂的开发利用提供理论参考。

1材料与方法

1.1仪器

DXF-4B粉碎机：广州大祥电子机械设备有限公司；KQ2200DE型数控超声波清洗器：昆山市超声波有限公司；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸有限公司；AE240S型电子天平：奥豪斯仪器上海有限公司；Agilent 8453二极管阵列紫外分光光度计、Agilent高效液相色谱：美国安捷伦公司。

1.2试剂与原料

异牡荆苷对照品：贵州迪大生物有限公司；分析甲醇、色谱甲醇、分析纯冰醋酸：河北四友卓越科技有限公司；所用水为超纯水。撑篙竹竹叶：采自河池学院校园龙江河岸，经河池学院覃国乐副教授鉴定为禾本科植物撑篙竹Bambusa pervariabilis McClure的叶子。

1.3方法

1.3.1样品的处理

将撑篙竹竹叶洗涤干净、晒干、粉碎，过60目，备用。

1.3.2样品溶液的提取与配制

准确称取5.000 0 g竹叶粉末，置于100 mL的烧杯中，加入石油醚，刚好浸过粉末，超声30 min，然后减压抽滤，弃掉滤液，脱去色素和蜡质，向滤渣中加入30 mL分析纯甲醇，再超声30 min，减压抽滤，弃掉滤渣，滤液过0.45 μm滤膜，定容于50 mL容量瓶，4℃冰箱中保存，作为待测样品。

1.3.3对照品溶液的配制

准确称取异牡荆苷对照品0.004 3 g，以色谱甲醇作溶剂于50 mL容量瓶中溶解定容，分别取1、1.5、2、2.5 mL体积，且各自定容于10 mL容量瓶中，以色谱甲醇稀释成摩尔浓度为0.020、0.030、0.040、0.050 mmol/L的溶液，4℃冰箱中保存，备用。

1.3.4色谱条件

色谱柱：ZORBAXSB-C18（2.1mm×100mm，3.6μm），流动相甲醇（A）-0.1 %冰醋酸水溶液（B），梯度洗脱（0 min~3 min，85 %~70 % B；3 min~6 min，70 %~55 % B；6 min~9 min，55 %~35 % B；9 min~12 min，35 %~35 % B；12 min~15min，35 %~70 %B；15 min~18min，70 %~ 85 %B），流速0.6 mL/min，检测波长为340 nm，柱温为30℃，进样体积5 μL。

2结果与分析

2.1线性关系考察

将对照品溶液配制成0.004、0.010、0.015、0.020、0.025 mmol/L 5个不同浓度，分别精密吸取不同浓度的异牡荆苷溶液，按1.3.4色谱条件HPLC测定其峰面积，以浓度为横坐标、吸收峰面积为纵坐标制作标准曲线，线性回归方程为：y=11 427x-0.923 3，线性范围为1.733 1 μg/mL~10.832 0 μg/mL，相对系数r=0.999 6。异牡荆苷HPLC测定结果见图1，异牡荆苷的标准曲线图见图2。

2.2精密度试验

精密吸取0.020 mmol/L异牡荆苷对照品溶液，在1.3.4色谱条件下，HPLC测定其峰面积，重复进样5次，计算RSD。RSD=1.85 %，表明仪器精密度良好。

图1异牡荆苷的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of isovitexin

图2异牡荆苷标准曲线图Fig.2 The standard curve of isovitexin

2.3重复性试验

准确称取5.000 0 g竹叶粉末5份，按照1.3.2提取与配制样品溶液，在1.3.4色谱条件下，HPLC测定异牡荆苷的峰面积，计算RSD。异牡荆苷RSD=0.83 %，表明本方法重复性好。

2.4加样回收率试验

精密吸取已知异牡荆苷含量的样品溶液5份，分别加入已知异牡荆苷含量的对照品，混合均匀，在1.3.4色谱条件下，HPLC测定峰面积，计算平均回收率和RSD。平均回收率=98.01 %，RSD=1.02 %；具有好的回收率。加样回收率试验结果见表1，样品及样品加对照品的HPLC测定结果见图3、图4。

表1加样回收率试验结果（n=5）Table 1 The result of recovery rate of isovitexin（n=5）

2.5撑篙竹竹叶中异牡荆苷的含量测定

准确称量5.000 0 g撑篙竹竹叶放在100 mL烧杯中，按方法1.3.2提取与配制，在1.3.4色谱条件下测定峰面积，5次平行试验，取平均值，异牡荆苷的含量为2.928 5 mg/g。

图3样品的HPLC色谱图Fig.3 HPLC chromatograms of sample

图4样品加对照品的HPLC色谱图Fig.4 HPLC chromatograms of sample spiked with isovitexin standard

3　讨论

将异牡荆苷对照品溶液在190 nm~450 nm进行紫外扫描，根据最大吸收波长和参考文献[4-5]，我们选定了340 nm作为检测波长，在此波长条件下，所测定成分与其它成分能较好的分离，且基线稳定，试验测得异牡荆苷的含量为2.928 5 mg/g。

本文以高效液相色谱法测定撑篙竹竹叶中异牡荆苷的含量，方法简单、快速、稳定性、重复性好，结果较为满意，可用于竹叶黄酮类化合物成分测定和进一步的研究提供一定的参考。

参考文献：

[1]孙嘏.撑篙竹(Bambusa pervariabilis McClure)竹叶化学成分及其生物活性研究[D].北京:中国林业科学研究院,2010:7

[2]陆柏益,张英,吴晓琴.竹叶黄酮的抗氧化性及其心脑血管药理活性研究进展[J].林产化学与工业,2005,25(3):120-124

[3]郭维图,孙福平.微波提取竹叶黄酮及其在食品加工中的应用[J].包装与食品机械,2009,27(5) :113-117

[4]龚金炎,吴晓琴,夏道宗. RP-HPLC法测定竹叶提取物中黄酮类和酚酸类成分[J].中草药,2010,41(1):63-65

[5]袁珂,薛月芹,殷明文. RP-HPLC同时测定淡竹叶中4种黄酮苷的量[J].中国中药杂志,2008,33(19):2215-2218

Determination of Isovitexin in Bambusa Pervariabilis McClure Leaves by HPLC

HUANG Xiu-xiang，LU Jun-yu，HUANG Zhen
（College of Chemistry and Biology Engineering，Hechi University，Yizhou 546300，Guangxi，China）

Abstract：To establish a HPLC method for the determination of isovitexin in Bambusa Pervariabilis McClure Leaves. The method was applied with ZORBAX SB-C18column（2.1 mm×100 mm，3.6 μm），the mobile phase consisted of methanol（A）-（0.1 %）aqueous acetic acid（B），with an optimized gradient program of 0 min-3 min，85 %-70 % B；3 min-6 min，70 %-55 % B；6 min-9 min，55 %-35 % B；9 min-12 min，35 %-35 % B；12 min-15 min，35 %-70 %B；15 min-18 min，70 %-85 %B，the flow rate was 0.6 mL/min，the column temperature was maintained at 30℃and the UV detection wavelength was set at 340 nm. The linear in the rangeof1.733 1 μg/mL-10.832 0 μg/mL（r=0.999 6），theaveragerecoveryofisovitexinwas98.01%，RSD1.02%，the content of isovitexin was 2.928 5 mg/g.

Key words：Bambusa Pervariabilis McClure；isovitexin；HPLC；determination

收稿日期：2014-08-04

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.01.035

作者简介：黄秀香（1969—），女（壮），教授，硕士，研究方向：天然有机化学。

基金项目：广西高校科学技术研究重点项目（ZD2014113）；河池学院科研重点课题（2014ZD-N004）