高效液相色谱概述及其在药品检验中的应用

曲学伟

摘 要：高效液相色谱技术以其高效、快速、准确度高的特点，使其在药品的主成分含量及杂质检测中得到广泛应用，随着该技术的不断探索与发展，高效液相色谱法的作用将越来越重要。

关键词：高效液相色谱；药品检验；主成分含量

高效液相色谱法是20世纪70年代开始发展起来的高效、快速、准确度高、适用范围广的一项化学分析及分离的技术，高效液相色谱具有高压、高速、高效、高灵敏度、应用范围广、柱子可反复使用以及样品量少、容易回收等特点，受到人们广泛的关注及重视[1-3]。该检测方法也越来越成熟，得到各行业的认可及利用，已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用[4-6]。高效液相色谱技术在药品检验中也被广泛的应用，其对于药品中的主成分含量、药品中的杂质检测等药物分析中有着快速、准确、高效的检测优点及效果[7-9]。

1 概述

1.1高效液相色谱定义

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析[10，11]。

高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相） 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。高效液相色谱应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。

1.2 特点：

高相液相色谱具有高压的特点，流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压；高速的特点，分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时；高效的特点，分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍；高灵敏度的特点，紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级；应用范围广的特点，百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势；柱子可反复使用的特点，用一根柱子可分离不同化合物；样品量少、容易回收的特点。样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备[12]。此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。

2在药品检验中的应用

高效液相色谱技术与很多先进的检测仪器融合在一起，在药品检验中的应用越来越广泛。目前采用液质联用技术相结合的方式去检验药品的主成分含量及相关杂质等，大大提高了药品检验的效率和准确性。

2.1 药品主成分含量的测定

药品的主成分含量可以通过高效液相色谱法得到高效准确的检测。原理为该物质（的官能团）在某一特定波长下有吸收，并且，该物质浓度和峰面积成正比。利用高效液相色谱法可以避免药品辅料对主成分检测的干扰，使检测结果更准确。

例如：使用高效液相色谱技术对米诺磷酸片中主成分米诺膦酸含量进行检测，测定方法简便，测定结果准确、可靠。主要方法为将片剂研碎，取一定量用相应试剂进行溶解、过滤、上样检测。使用流动相为焦磷酸钠-四丁基溴化铵-甲醇，检测波长为226nm，结果显示在0.104～31.283μg/ml范围内线性良好，样品检测中重复性好，结果稳定。

2.2 药品中杂质的测定

高效液相色谱法要求要正确地选择色谱分离方法，首先必须尽可能多的了解样品的有关性质，其次必须熟悉各种色谱方法的主要特点及其应用范围[13]。选择色谱分离方法的主要根据是样品的相对分子质量的大小，在水中和有机溶剂中的溶解度，极性和稳定程度以及化学结构等物理、化学性质。

利用高效液相色谱技术对药品中的杂质进行检测，由于灵敏度高，相对比较小的可能一般检测方法难以检测出的杂质，高效液相色谱可以定性及定量的检测，检测结果更准确，更接近真实值，简便、可靠、重复性高、线性关系良好、回收率理想，对药品中的杂质可以更好的反馈，对药品的药代及药效动力学的后续研究奠定基础。进而更好的保证药品的使用安全，保证人民的生命安全[14]。

3结束语

高效液相色谱技术具有很大的应用空间及发展前景，在药品检验的领域有着广泛的应用，它以其独特的优势，大大提高了检测的时效性及准确性。高效液相色谱技术在药品检验中起着越来越重要的作用，尤其是在药品主成分含量检测、及药品杂质检测[15，16]。高效液相色谱技术应用于多个领域，具有很大的发展潜力，随着该技术的不断改进与发展，高效液相色谱法的作用将越来越重要。

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