淮安市2013-2015年致泻大肠埃希氏菌的检测和流行特征分析

李双姝，刘纯成，李兵兵，刘晗，朱叶飞

(1.南京医科大学公共卫生学院，江苏 南京 210009；2.淮安市疾病预防控制中心，江苏 淮安 223001；3.南京医科大学第二附属医院检验医学中心，江苏 南京 210011)

淮安市2013-2015年致泻大肠埃希氏菌的检测和流行特征分析

李双姝1，2，刘纯成2，李兵兵2，刘晗2，朱叶飞1，3

(1.南京医科大学公共卫生学院，江苏 南京 210009；2.淮安市疾病预防控制中心，江苏 淮安 223001；3.南京医科大学第二附属医院检验医学中心，江苏 南京 210011)

目的 了解2013-2015年淮安市致泻大肠埃希氏菌的检出情况和流行特征，为疾病的防治提供依据。方法于2013-2015年从淮安市各哨点医院和社区医院腹泻门诊患者的795份粪便标本中分离大肠埃希氏菌，使用多重PCR方法筛查致泻大肠埃希氏菌，再结合生化实验验证。结果在795份腹泻标本中共检出致泻大肠埃希氏菌80株，检出率为10.06%。其中ETEC 34株，检出最高，其余依次为EAEC 18株、EPEC 16株、EIEC 7株和EHEC 5株。按季节分布统计，差异有统计学意义(P＜0.05)，夏秋两季为主要流行时段。城市和农村的地域分布则差异无统计学意义(P＞0.05)；从人群分布分析，不同性别阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但不同年龄组之间比较则差异有统计学意义(P＜0.05)。结论淮安市致泻大肠埃希氏菌主要流行型别为ETEC，夏秋两季为主要流行时段，≤5岁和6～18岁为易感人群，今后应加强对重点时段和人群的监测。

淮安；腹泻；致泻大肠埃希氏菌；流行特征

致泻大肠埃希氏菌(diarrheogenic Escherichia coli，DEC)是引发感染性腹泻疾病的重要病原菌之一，依其致病机制、临床表现、流行病学特征和血清学分型，可分为5类[1]：肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和肠出血性大肠埃希菌(EHEC)[2]。随着PCR检测技术的不断改善，PCR检测技术已经在DEC检测中广泛应用，DEC检测的准确率和检出率都有很大提高[3]。

为了解淮安市腹泻标本中致泻大肠埃希氏菌的流行状况，笔者于2013年3月至2015年12月从淮安市各哨点医院和社区医院采集腹泻患者粪便标本795份，开展了目标菌的分离、鉴定和分型检测，并对其流行病学特征进行了分析。

1 材料与方法

1.1 标本来源 于2013-2015年收集哨点医院(淮安市第一人民医院，淮安市第二人民医院，淮安市清河区社区医院)腹泻门诊病例服用抗生素前的粪便标本，置于Cary-Blair培养基，24 h内低温送至实验室检测。其中腹泻病例定义为24 h内大便次数≥3次、大便性状有改变(呈稀便、水样便或脓血便等)的门诊患者。

1.2 仪器与试剂 实验所用Cary-Blair培养基、大肠杆菌显色培养基、营养琼脂均购自北京陆桥生物制品有限公司；诊断血清购自兰州生物制品研究所；ABT五种致泻性大肠埃希氏菌多重检测试剂盒购自北京ABT公司；API 32E试剂条购自梅里埃公司，VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪及GN鉴定卡购自bioMerieux公司；琼脂糖购于西班牙Biowest公司；普通PCR和凝胶成像系统均购自美国Bio-Rad公司。

1.3 实验室检测

1.3.1 病原分离与鉴定 采样拭子直接划线接种大肠杆菌显色培养基，筛选出蓝色、突起、光滑、湿润的可疑菌落，转种营养琼脂培养后分别作鉴定。

1.3.2 多重PCR 本实验使用北京ABT公司生产的五种致泻大肠多重检测PCR试剂盒进行检测，该试剂盒可以对bfpB、escV、stx1、stx2、elt、estIa、estIb、invE、astA、aggR、pic 11种毒力基因进行检测。PCR反应条件为：预变性95℃4 min；变性95℃30 s，复性62℃30 s，延伸72℃90 s，30个循环；最后72℃延伸5 min。PCR扩增产物进行电泳分析，选用浓度为2%的琼脂糖凝胶，应用Bio-RAD平板电泳仪进行电泳，电压设置为92 V，时间50 min，选用条带大小间隔100 bp DNAMarker进行对照，见图1。

1.3.3 5种DEC的判定标准 所有DEC均有一条uidA扩增条带，在uidA条带基础上，若有毒力基因条带的扩增，根据基因种类的组合判断为何种致泻大肠埃希氏菌，见表1。

表1 5种致泻大肠埃希氏菌阳性判定毒力基因组合

图1 致泻大肠埃希氏菌多重PCR电泳图谱

1.3.4 生化鉴定 采用API 32E试剂条对PCR阳性菌株进行生化鉴定。

1.3.5 血清鉴定 采用相应致泻大肠血清的O多价、单价和H诊断血清进行血清凝集试验。

1.4 统计学方法 应用SPSS19.0统计软件进行统数据分析，率的比较采用χ2检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 致泻大肠埃希氏菌检出情况 795份样品中检测出致泻大肠埃希氏菌80株，检出率为10.06%。其中ETEC检出数量最多为34株，占所有检出DEC的42.00%，其次是EAEC 18株、EPEC 16株、EIEC 7株和EHEC 5株，分别占检出DEC的22.50%、20.00%、8.75%和6.25%，可见，ETEC是淮安市致泻大肠埃希氏菌的主要感染类型，其次为EAEC和EPEC。5种致泻大肠埃希氏菌详细分布表2。

表2 淮安市2013-2015年5种致泻大肠埃希氏菌分布(株)

2.2 不同季节分布情况 按季节分布分析，淮安市致泻大肠埃希氏菌的检出主要集中在8、9、10三个月，这符合细菌感染多发生在夏、秋两季的特性。淮安市致泻大肠埃希氏菌所致腹泻各季节发病率差异有统计学意义(χ2=18.774，P＜0.05)，见表3。

表3 淮安市2013-2015年致泻大肠埃希氏菌监测结果季节分布

2.3 不同人群和地域分布情况 淮安市致泻大肠埃希氏菌的发病率从性别上分析，差异无统计学意义(P＞0.05)；在年龄上，不同年龄组之间比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，其中≤5年龄组和6～18年龄组是淮安市致泻大肠埃希氏菌主要发病人群；城市和乡村的发病率比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，见表4。

表4 淮安市2013-2015年致泻大肠埃希氏菌监测结果人群分布

3 讨 论

致泻大肠埃希氏菌是引起感染性腹泻的主要病原菌。有研究表明，致泻大肠埃希氏菌感染在细菌性感染腹泻中居首位[4]。致泻大肠埃希氏菌血清型众多，交叉凝结现象明显，本文运用多重PCR毒力筛查、结合生化鉴定验证的方法进行检测，提高了阳性检出率，减少了错诊、误诊[3]。

我国DEC感染类型主要以EPEC和ETEC为主，从各地DEC监测结果看，北京地区2014年DEC检出率为4.00%，感染类型以EPEC和ETEC为主[5]；江苏泰州2013年检出率为10.23%，EPEC为主要感染类型[6]；贵阳2010年检出率高达34.65%，EAEC为主要感染类型[7]；沈阳地区2012-2014年DEC检出率为6.65%，EAEC为主要感染类型[8]；福建省2010-2012年检出率为6.65%，EPEC为主要感染类型[9]。不同地区DEC的检出率与优势菌群各不相同[10]。

淮安市在2013-2015年于795份腹泻标本中共检出DEC 80株，检出率达10.06%，与泰州检出率相当，高于北京、沈阳等地区，低于贵阳。贵阳地区在检测方法上采用的荧光PCR方法[7]，而其他地区[11]的检测方法主要是普通多重PCR方法，荧光PCR方法是不是可以大幅度提高检出率，是否可以逐步替代普通PCR方法还需进一步实验验证。本文所使用的多重PCR方法，检测的毒力基因与沈阳、泰州相似[6，12]，其中ETEC是淮安市DEC感染主要优势菌株，和新疆乌鲁木齐[13]监测结果相似，有明显地方特点。

ETEC的感染多发于幼童，发病率和病死率较高，同时也是引起游客腹泻的主要原因[14]。据报道每年ETEC感染发病有2.8亿～4.0亿例，造成30万～50万死亡[15]。多年来，对人源产肠毒素的大肠杆菌疫苗的研发一直是科研研究中的重点[16]。预防ETEC感染所致腹泻对于控制淮安市DEC的发病率，减少腹泻的发生起至关重要的作用。

淮安DEC所致腹泻发病率从季节上比较，差异有统计学意义，符合细菌感染性腹泻的发病特征，淮安市夏秋季节温度较高，空气比较潮湿，温暖潮湿的环境更适合病原菌存活，从而加大易感人群的感染率。此外，不同年龄段的发病率比较，差异有统计学意义，≤5岁和6～18岁两个年龄段的发病率明显高于其他年龄段，符合感染性腹泻的发病特征，也提示了淮安市的腹泻监测对象应主要以这两个年龄段的人群为主。

总之，本文通过对淮安市DEC所致腹泻病例信息的收集、汇总、分析及病原学检验，了解了淮安市DEC的流行趋势，为淮安市DEC感染预防方案的制定和控制措施的提出提供了可靠依据。

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Detection and analysis on epidemic characteristics of diarrheogenic Escherichia coli in Huaian,2013-2015.

LI Shuang-shu1,2,LIU Chun-cheng2,LI Bing-bing2,LIU Han2,ZHU Ye-fei1,3.1.School of Public Health,Nanjing Medical University,Nanjing 210029,Jiangsu,CHINA;2.Huaian Center For Disease Control and Prevention,Huaian 223001, Jiangsu,CHINA;3.Medical Center Inspection,the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210011,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo understand the detection situation and epidemiological characteristics of diarrheogenic Escherichia coli(DEC)in Huaian from 2013 to 2015,so as to provide evidence basis for prevention and treatment of disease.MethodsAtotal of 795 stool specimens were isolated from patients in sentinel hospitals and community hospitals of Huaian from 2013 to 2015 for detection of Escherichia coli.Diarrheogenic E.coli strains were screened by multiple PCR and verified by biochemical identification.ResultsA total of 80 diarrheogenic Escherichia coli strains were isolated,with a detection rate of 10.06%,including 34 strains of enterotoxigenic E.coli(ETEC),18 strains of enteroaggregative E.coli(EAEC),16 strains of enteropathogenic E.coli(EPEC),7 strains of enteroinvasive E.coli(EIEC)and 5 strains of enterohemorrhage E.coli(EHEC).There were statistical differences(P＜0.05)between seasons,and the positive detection rate in autumn and summer were higher.There was no significant difference between urban and rural areas (P＞0.05).There was no significant difference in the positive detection rates between different genders from the population distribution analysis(P＞0.05),but there were significant differences between the different age groups(P＜0.05).ConclusionETEC is the predominant type of diarrheogenil E.coli in Huaian.The detection rates are higher in summer and autumn,and also in patients aged≤5 years and 6～18 years.Monitoring of key periods and population should be strengthened in the future.

Huaian;Diarrhea;Diarrheogenic Escherichia coli;Epidemic characteristics

R378.2+1

A

1003—6350（2016）19—3137—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.19.014

2016-03-14)

朱叶飞。E-mail：zhu_yefei@163.com