脑梗塞再灌注患者血清NSE及S-100β蛋白变化及丁苯酞的干预作用

程奎山，戴益斌，谢军朋，吴国荣，何丛馨，李桂峰，李宝峰，陈波，张亦维

(1.东莞市同济医学院附属东莞医院内二科，广东 东莞 523416；2.东莞市同济医学院附属东莞医院检验科，广东 东莞 523416；3.重庆两江新区第一人民医院儿科，重庆 401121)

脑梗塞再灌注患者血清NSE及S-100β蛋白变化及丁苯酞的干预作用

程奎山1，戴益斌1，谢军朋1，吴国荣1，何丛馨1，李桂峰1，李宝峰2，陈波2，张亦维3

(1.东莞市同济医学院附属东莞医院内二科，广东 东莞 523416；2.东莞市同济医学院附属东莞医院检验科，广东 东莞 523416；3.重庆两江新区第一人民医院儿科，重庆 401121)

目的 探讨脑梗塞再灌注患者血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)及S-100β蛋白变化及丁苯酞治疗脑梗塞再灌注的干预作用。方法选取2013年10月至2016年3月期间同济医学院附属东莞医院内二科收治的超早期脑梗塞患者100例，以尿激酶作为再灌注手段。根据随机数表法分为观察组49例和对照组51例。所有患者均给予尿激酶100万～150万U静脉溶栓，对照组患者接受包括溶栓在内的常规治疗，而观察组联合静脉溶栓治疗和丁苯肽注射液100 mL静脉滴注，2次/d，7 d为一个疗程，比较两组患者治疗期间的血清NSE及S-100 β蛋白变化和神经功能缺损情况。结果观察组患者溶栓前、溶栓后1 d和7 d的NSE分别为(21.7±6.8)U/mL、(24.6±11.5)U/mL、(12.3±7.6)U/mL，对照组分别为(22.0±6.7)U/mL、(27.9±12.1)U/mL、(16.2±8.8)U/mL，观察组患者溶栓前、溶栓后1 d和7 d的S-100β分别为(1.2±0.5)μg/L、(1.3±0.4)μg/L、(0.6±0.3)μg/L，对照组分别为(1.1±0.5)μg/L、(1.4±0.6)μg/L、(0.9±0.3)μg/L，组内比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01)，组间比较溶栓前差异无统计学意义(P＞0.05)，溶栓后差异均有统计学意义(P＜0.05)；观察组的再灌注损伤率明显低于对照组[4.1%(2/49)vs 17.6%(9/51)]，再通率明显高于对照组[40.1%(20/49)vs 29.4%(15/51)]，差异均有统计学意义(P＜0.05)；观察组患者溶栓7 d后神经功能缺损评分为(4.5±1.6)分，明显低于对照组的(9.3±1.7)分，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论丁苯酞可显著改善超早期脑梗塞再灌注患者血清NSE及S-100β蛋白水平，降低再灌注损伤发生率，对降低神经功能缺损评分有积极意义，可有效预防急性脑梗塞溶栓后再灌注损伤。

脑梗塞再灌注；神经元特异性烯醇化酶；S-100β蛋白；丁苯酞；干预作用

脑梗塞是多发于中老年人的常见的脑血管疾病，静脉溶栓治疗是目前治疗超早期脑梗塞最有效而简易方法之一[1]。但实际溶栓后患者脑血管完全再通率只有30%～40%，而这部分患者中又有5%～10%短时间内再次梗塞[2]，患者再次梗塞后疗效差，往往会留下瘫痪、失语、吞咽困难、智残等严重残疾，给家庭及社会带来极大负担，如何预防溶栓/再灌注后再梗塞，已经成为神经科专业工作者需要攻克的难题[3-4]。丁苯酞为人工合成的消旋正丁基苯酞，临床常用于急性缺血性脑卒中患者的治疗，对中枢神经功能的损伤有明显改善作用。脑梗塞后，血管内皮细胞坏死导致血脑屏障遭到破坏，同时使损伤部位的某些物质逸出到血液循环中。因此，检测血清中与脑损伤有关的生物学物质可以用来监测脑梗塞的严重程度。本研究尝试将丁苯酞应用于超早期脑梗死患者的治疗，在常规溶栓治疗(再灌注)基础上，早期联合使用丁苯酞静脉滴注，通过观察超早期脑梗塞再灌注患者溶栓前后血清神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase，NSE)及S-100β蛋白水平、神经缺损评分以及再通率等指标，探讨丁苯酞在减轻脑梗死患者溶栓后再灌注损伤及改善神经功能损伤等方面的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年10月至2016年3月期间同济医学院附属东莞医院内二科收治的超早期脑梗死且签字同意溶栓治疗住院的患者100例，按随机数表法分为观察组49例和对照组51例。观察组中，男性26例，女性23例，平均年龄(59±8)岁；对照组中，男性27例，女性24例，平均年龄(60±7)岁。排除标准按《急性缺血性脑卒中诊治指南(2014)》尿激酶溶栓禁忌证执行[5]。此外，对正在使用肝素、双香豆素等抗凝剂，或溶栓治疗之前临床表现已明显改善者，亦不考虑静脉溶栓。两组患者性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治疗方法 两组患者均使用尿激酶作为再灌注手段，溶栓前均给予20%甘露醇125 mL静脉点滴，然后将尿激酶100万～150万U溶于150 mL生理盐水中静脉滴注，30 min滴完；辛伐他丁20～40 mg口服，1次/d；24 h后口服阿司匹林300 mg，1次/d，共3 d，以后改为100 mg，长期服用；治疗前及治疗后24 h各做一次头部CT扫描，如治疗途中患者偏瘫症状加重或头痛，随时加查头颅CT。观察组行静脉溶栓治疗后，立即给予丁苯肽注射液100 mL静滴，2次/d，共7 d。其他治疗：如降血糖、控制血压，维持水、电解质平衡和对症治疗等常规处理。

1.3 观察指标

1.3.1 血清NSE、S-100β蛋白测定 取患者静脉血标本4 mL，立即离心取上清液置于-20℃冰箱中保存待测。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清NSE和、S-100β在溶栓前、溶栓后24 h，7 d的水平。步骤方法严格按试剂盒说明书进行。

1.3.2 神经功能缺损评分 患者将在溶栓前、溶栓后24 h，7 d按照美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)进行神经功能缺损评分的测定。NIHSS评分从意识、凝视、视野、面瘫、上肢运动、下肢运动、共济失调、感觉、语言、构音障碍、忽视等方面进行检查。＜8分为轻度神经功能缺损；8～14分为中度神经功能缺损；＞14分为重度神经功能缺损。根据神经功能缺损评分，达痊愈的患者即为再通成功。

1.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间两两比较采用配对t检验，组内重复测量数据比较采用单位因素方差分析，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组患者治疗期间的NSE、S-100β蛋白比较 脑梗塞脑梗塞患者血清中的NSE含量明显升高，溶栓完成且血管再通(再灌注)后NSE随后逐渐下降，且观察组的NSE水平明显低于对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。同样两组患者在溶栓前，在溶栓后第一天由于再灌注的影响，血清中的S-100β含量升高，随后逐渐下降，而观察组的S-100β水平明显低于对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组患者治疗期间NSE和S-100β的变化(±s)

表1 两组患者治疗期间NSE和S-100β的变化(±s)

组别 例数NSE(U/mL)F值P值S-100β(μg/L)F值P值对照组观察组t值P值51 49溶栓前22.0±6.7 21.7±6.8 0.27 0.99溶栓后1 d 27.9±12.1 24.6±11.5 2.41 0.049溶栓后7 d 16.2±8.8 12.3±7.6 3.24 0.004 53.1 38.71＜0.01＜0.01溶栓前1.1±0.5 1.2±0.5 1.27 0.500溶栓后1 d 1.4±0.6 1.3±0.4 2.41 0.048溶栓后7 d 0.9±0.3 0.6±0.3 4.07 0.0002 23.1 58.09＜0.01 0.01

2.2 两组患者溶栓后的神经功能缺损评分及疗效评定 对照组中有9例患者溶栓后出现再灌注损伤，发生率为17.6%，观察组中出现2例，发生率为4.1%，两组比较差异有统计学意义(χ2=4.22，P＜0.05)。两组患者溶栓前神经功能评分差异无统计学意义(P＞0.05)，但两组患者溶栓后神经功能缺损评分均明显下降，且观察组神经功能缺损评分明显低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 两组患者溶栓后神经功能缺损评分的变化(±s)

表2 两组患者溶栓后神经功能缺损评分的变化(±s)

组别对照组观察组例数51 49溶栓前10.5±1.4 10.7±1.3溶栓7 d后9.3±1.7 4.5±1.6 t值2.733 17.4 P值＜0.05＜0.01 t值P值0.375＞0.05 9.387＜0.01

2.3 两组患者的再通率比较 观察组患者再通20例，发生率为40.1%。而对照组再通15例，发生率为29.4%，两组比较差异有统计学意义(χ2=4.27，P＜0.05)。

3 讨 论

2013年公布的我国居民死因抽样调查显示，脑卒中已经成为我国居民死亡仅次于肿瘤的头号杀手。据统计，我国现有脑血管病患者近800万人，每年新增150万人以上，每年因脑血管病死亡人数超过100万，且患病率及死亡人数逐年递增[6]。急性脑血管病以缺血性脑卒中占了近87%。如何监测脑卒中的损伤程度并判断患者预后对于治疗脑梗塞或其再灌注损伤，减轻患者痛苦、并减少脑卒中的死亡率具有重要意义。

目前广泛认为再灌注损伤的机理是由于缺血再灌注时，突然增加灌注氧，产生大量氧自由基、从而造成细胞膜及蛋白质损伤，最后导致细胞坏死[7]。丁苯酞注射液是我国近年开发的Ⅰ类新药，可选择性增加缺血区的血流量及毛细血管数量，另通过保护线粒体功能、抑制氧自由基、提高抗氧化酶活性、抑制钙离子超载、减轻脑水肿等作用减轻再灌注损伤[2，4-5，7]。研究表明，丁苯酞能够有效改善急性脑梗塞的中枢神经功能的损伤和促进神经功能的恢复[3,8-9]。NSE是糖酵解途径中的关键酶，特异地存在于神经元和神经内分泌细胞。S-100β蛋白是S-100家族中在脑内最具有活性的成员，主要由星形胶质细胞和少突胶质细胞合成和分泌的神经营养因子，主要存在于脑中，生理浓度下可发挥多种重要的生理功能，过量则诱导细胞凋亡、坏死；其次S-100β对神经细胞有营养作用，可调节细胞的可塑性，有助于星形胶质细胞的钙处理能力，参与信息传递、炎症反应等。脑细胞损伤后，NSE和S-100β大量产生并可透过损伤的血脑屏障渗入脑脊液和外周血液中。血清NSE、S-100β蛋白水平被认为是脑内反映神经胶质细胞损伤的特异性标志物，对于颅脑损伤疗效观察及预后的早期判断具有重要价值。本研究探讨超早期脑梗塞再灌注过程中血清NSE和S-100β水平会出现先升高后降低的变化情况，结果显示，在溶栓后第一天由于再灌注的影响，两组血清中的NSE含量及S-100β水平升高，随后逐渐下降。丁苯酞干预的观察组的NSE和S-100β水平明显低于对照组，表明NSE和S-100β血清浓度对于脑缺血的时间反应有一定延迟，在脑梗塞溶栓治疗过程中给予丁苯酞干预，能够显著降低NSE和S-100β含量，降低再灌注损伤发生率，提高再通率而降低神经功能缺损评分，提示丁苯酞可显著改善脑梗塞再灌注患者神经功能缺损伤减轻再灌注损伤。结合两组患者的再通率比较，可见丁苯酞的干预对于预防再灌注后再梗塞有明显作用。

综上所述，丁苯酞联合溶栓治疗能有效降低脑梗塞患者再灌注损伤发生率，对预防再灌注后再栓塞及改善患者预后具有积极作用，可在临床推广应用。

[1]王天仁.舒血宁联合丁苯酞治疗脑梗塞的临床疗效观察[J].医学信息,2010,23(10):95-96.

[2]施晓耕,黄如训,刘春岭,等,丁苯酞对高血压性脑卒中预防作用的实验研究[J].中国神经精神疾病杂志,2007,33(8):486-489.

[3]路文军.丁苯酞软胶囊治疗皮层下动脉硬化性脑病临床观察[J].临床和实验医学杂志,2011,10(10):769-770.

[4]刘首峰,尉辉杰,王晓静,等.丁苯酞对血管性痴呆大鼠认知功能及海马区核因子-κB表达的影响[J].中国现代医学杂志,2012,22 (29):49-52.

[5]中华医学会神经病学分会脑血管病学组.急性缺血性脑卒中诊治指南(2014)[J].中华神经科杂志,2015,48(4):250-251

[6]陈竺.全国第三次死因回顾抽样调查报告[M].北京:中国协和医科大学出版社,2008.

[7]姬文慧,陈阿敏,陈冬冬,等.急性脑梗塞治疗进展[J].中外健康文摘,2010,7(13):336-338.

[8]张培蕾,鲁海涛,朱悦奇,等.丁苯酞对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用[J].介入放射学杂志,2012,21(3):239-242.

[9]李嘉,顾承志,秦婧,等.丁苯酞预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的干预研究[J].现代中西医结合杂志,2011,20(17): 2104-2106.

Effect of butylphthalide pretreatment on serum NSE and S-100β levels and brain injury in patients after cerebral ischemia/reperfusion.

CHENG Kui-shan1,DAI Yi-bin1,XIE Jun-peng1,WU Guo-rong1,HE Cong-xin1,LI Gui-feng1, LI Bao-feng2,CHEN Bo2,ZHANG Yi-wei3.1.Department of Internal Medicine NO.2,Dongguan Hospital Affiliated to Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology,Dongguan 523416,Guangdong,CHINA;2. Department of Clinical Laboratory,Dongguan Hospital Affiliated to Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology,Dongguan 523416,Guangdong,CHINA;3.Department of Pediatrics,the First People's Hospital of Liangjiang New District of Chongqing,Chongqing 401121,CHINA

ObjectiveTo investigate the changes of serum NSE and S-100β levels in patients after cerebral ischemia/reperfusion and verify whether butylphthalide protects against brain ischemia-reperfusion injury.MethodsAtotal of 100 patients with acute cerebral infarction at ultra-early or acute stage,who adminted to our hospital from October 2013 to March 2016,were selected and randomly divided into the butylphthalide group(49 cases)and the control group(51 cases). Patients in the control group received standard intravenous thrombolytic therapy with 1 000 000～1 500 000 U urokinase, while patients in the butylphthalide group were additionally treated with butylphthalide injection at the dosage of 100 mL twice a day,wth 7 days as one therapeutic course.The serum NSE and S-100β levels as well as neurological functional impairment of the two groups were compared.ResultsThe NSE levels in the butylphthalide group were(21.7±6.8)U/mL, (24.6±11.5)U/mL,(12.3±7.6)U/mL on day 0,1 and 7 after thrombolytic therapy,whereas the NSE levels in the control group were(22.0±6.7)U/mL,(27.9±12.1)U/mL,(16.2±8.8)U/mL.The S-100β levels were(1.2±0.5)μg/L,(1.3±0.4)μg/L, (0.6±0.3)μg/L in the butylphthalide group and(1.1±0.5)μg/L,(1.4±0.6)μg/L,(0.9±0.3)μg/L in the control group after thrombolytic therapy on day 0,1,7.There were significant differences in NSE and S-100β levels either in the same group at all time points(P＜0.01).There were significant differences between butylphthalide group and control group on day 1 and day 7 after thrombolytic therapy in NSE and S-100β levels(P＜0.05),but not on day 0(P＞0.05).The incidence of ischemia/reperfusion injury was markedly reduced from 17.6%(9/51)in the control group to 4.1%(2/49)in the butylphthalide group,accompanied with increased recanalization rate(29.4%(15/51)vs 40.1%(20/49),P＜0.05)and decreased Rankin scale score((9.3±1.7)vs(4.5±1.6),P＜0.05).ConclusionOur study demonstrated that butylphthalide combined with thrombolytic therapy can significantly attenuate the increases of serum NSE and S-100β levels induced by cerebral ischemia-reperfusion,and effectively protect patients against brain ischemia-reperfusion injury.

Cerebral ischemia/reperfusion;Neuronspecific enolase(NSE);S-100β;Butylphthalide;Intervention

R743.33

A

1003—6350（2016）19—3102—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.19.002

2016-04-08)

广东省东莞市科技计划医疗卫生类科研项目(编号：201510515000422)

张亦维。E-mail：309144629@qq.com