UPLC—MS/MS检测烟草中腈菌唑残留

薛原 戴长庚 周勇 胡宁贵 王岑岑 罗远辉 范成平 张权 代飞

摘 要：该文采用QuEChERS方法提取净化烟草样品，建立了超高效液相色谱-串联质谱 （UPLC-MS/MS）检测烟草中腈菌唑的残留分析方法。以1%乙酸乙腈提取溶剂，PSA和GCB作为净化剂，超高效液相色谱分离，电喷雾电离、正离子扫描，三重四级杆串联质谱以多反应监测扫描方式进行检测，以碎片离子对m/z289.116 /70.028进行定性分析、m/z 289.116 /125.041 进行基质匹配标准品的外标法定量。标准曲线线性方程为Y=21295x+156791，R2=0.9991，其线性范围在1～500μg·L-1。结果表明，在0.01～5mg·kg-1添加水平范围内，腈菌唑在烟草中平均回收率在88.3%～93.0%，变异系数在5.2%～7.3%，检出限（LOD）为0.029μg·kg-1，定量限（LOQ）为0.03μg·kg-1。该方法简单、快速，适用于大量烟草样品中腈菌唑的残留检测。

关键词：腈菌唑；超高效液相色谱-串联质谱；烟草

中图分类号 S572 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）02-100-03

Determination of Myclobutanil Residues in Tobacco Using UPLC-MS/MS

Xue Yuan1 et al.

（1Anshun Branch of Guizhou Tobacco，Anshun 561000，China）

Abstract：A rapid and sensitive analytical method for determination of myclobutanil residues in tobacco samples has been established based on QuEChERS and UPLC-MS/MS.The sample was extracted by 1% acetic acid acetonitrile and then purified by primary secondary amine （PSA） and graphitized carbon black （GCB）.The mass spectrometerw as operated with electrospray in the positive ion mode （ ESI+ ） .The myclobutanil were quantified by external standard method and matched standard solution used to compensate for matrix effect.The myclobutanil results were on the intension of the characteristic m/z 289.116/70.028 ion and m/z 289.116/125.041 ion .Under the optimal conditions， the calibration curve showed a good linearity in the range of 1～500μg·L-1 with a correlation coefficient of

0. 9991 Average recoveries of myclobutanil in tobacco at three levels （0.01mg·kg-1，0.5mg·kg-1 and 5mg·kg-1） ranged from 88.3% to 93.0% with relative standard deviations （RSDs） from 5.2% to 7.3% （n = 5）.Limits of detections （LOD） of thifluzamide were 0.029μg·kg-1，while limits of quantifications （LOQ） were 0.03μg·kg-1，respectively.The method is simple，rapid and accurate，and it can meet the requirements of the domestic and international legislation.The method adapts to confirm residues of thifluzamide in rice，corn and potato.

Key words：Myclobutanil；UPLC-MS/MS；Tobacco

腈菌唑（Myclobutanil）是一種內吸性广谱的三唑类杀菌剂，属于表角甾醇类生物合成抑制剂，对白粉病、锈病、黑星病、灰斑病、褐斑病、黑穗病等均具有较好的防治效果。腈菌唑由于药持效期长，对作物安全，被认为是一种前景较好的杀菌剂[1]。我国是世界上最大的烟草生产国，烟草也是我国部分地区的重要的经济作物，烟草税收占到我国财政收入的10%[2]。近年来，随着烟草品种的逐年增加及栽培制度的变化，烟草病虫害如白粉病的发生也不断加重。腈菌唑作为防治烟草白粉病的重要药剂，被长期广泛的使用。

目前，有报道采用气相色谱（ECD）测定黄瓜[3]、柑橘[4]、荔枝[5-6]上的腈菌唑残留量；液相色谱法测定黄瓜[7]和饲料[8]中腈菌唑的残留；气相色谱串联质谱（GC-MS/MS）测定大葱[9]、烟草[10]、西红柿[11]、化妆品[12]上腈菌唑的残留；液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS）检测腈菌唑在蔬菜[13]、草莓[14]及化妆品[15]中的残留。但较气相色谱串联质谱和液相色谱-质谱/质谱而言，气相色谱-ECD和液相色谱法检测易受杂质干扰影响，且检测时间长。在腈菌唑残留分析的前处理中多采用固相萃取技术净化，但其费时长、溶剂消耗量大，对环境造成二次污染。QuEChERS方法是Steven[15]于2003年提出的应用于农产品检测的前处理技术，目前已成为世界多国认可的实验方法，并应用于农药残留分析。本文旨在建立一种简便快捷的检测烟草中腈菌唑残留的分析方法。该方法前处理简单，易操作，准确度高，能够满足烟草中腈菌唑残留量的快速检测和确证的要求。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

1.1.1 试剂 腈菌唑标准溶液（100mg·L-1，北京勤诚亦信有限公司）；乙腈（分析纯）；甲醇（色谱纯）；乙酸（分析纯）；水（屈臣氏纯净水）；GCB（石墨化碳黑，德国CNW Technologies GmbH 公司）；PSA（N-丙基乙二胺，Agela Technologies公司）。

1.1.2 仪器 HR 1727/06/BC 飞利浦粉碎机（珠海飞利浦家庭电器有限公司）；SK-1漩涡混合器（江苏中大仪器厂）；TG16台式离心机（长沙迈佳森仪器设备有限公司）；Filter Unit滤膜（0.22μm，Agela Technologies公司）；超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS，TSQ-Vantage，Thermo公司）；Hypersil GOLD色谱柱（100mm×2.1mm，1.9μm，Thermos公司）。

1.2 标样溶液的配置 准确移取适量腈菌唑标准溶液，分别用乙腈稀释成0.5mg·L-1、0.1mg·L-1、0.05mg·L-1、0.01mg·L-1、0.001mg·L-1的系列标准溶液。

1.3 样品前处理

1.3.1 提取 准确称取2.5g粉碎的烟草样品于50mL具塞离心管中，加入5mL纯净水和10mL1%乙酸乙腈，涡旋提取5min，超声30min，静置30min，再加入3g氯化钠和4g无水硫酸镁，涡旋1min，5 000r离心5min。

1.3.2 净化 取1.0mL上清液到盛有150mg无水MgSO4、50mgPSA和20mgGCB的2mL离心管中，涡旋1min，以5 000r离心5min，上清液过0.22μm有机膜，取200μL滤液，用纯净水定容到1mL，备用。

1.4 检测方法

1.4.1 色谱条件 C18色谱柱，柱温：40℃，流动相A：甲醇，流动相B：0.1%甲酸水，梯度洗脱程序（见表1）。流速：0.2mL·min-1；进样量：5μL。

1.4.2 质谱条件 扫描方式：大气压化学电离ESI（+）；定性离子对m/z289.116/70.028、m/z 289.116/125.041，定量离子对m/z 289.116 /125.041，碰撞能量分别为12V和13V，射频电压 82V。电喷雾电压3 500V；碰撞气为氩气，鞘气及辅助气是氮气，鞘气流速30arb，辅助气流速 10arb。腈菌唑的保留时间为6.04min。采用外标法定量。

2 结果与分析

2.1 测试条件优化 为了获得最佳的灵敏度和分离效果，首先用直接进样方式，扫描范围m/z为100～500，选择合适的离子源。实验结果表明，电喷雾离子化、正离子扫描模式可使腈菌唑具有较好的电离效果并获得特征离子峰[M+H]。在此基础上，进一步选择最适的监测离子、射频电压及碰撞能量。通过实验证明，乙腈和0.1%甲酸水作为流动相能取得最高灵敏度，但甲醇和0.1%甲酸水为流动相时，峰型是最好的。在灵敏度足够高的前提下，选择了甲醇和0.1%甲酸水为流动相。当进样溶剂为乙腈+水（V∶V=20∶80）时，峰形比纯乙腈要好。

2.2 前处理条件的选择 对检测腈菌唑，有采用甲醇或乙腈做提取溶剂的报道，本方法采取甲醇和0.1%乙酸乙腈为提取溶剂，取得的回收率较甲醇或乙腈作为提取溶剂的回收率好。本方法分別选取PSA、弗罗里硅土、石墨化炭黑（GCB）和C18分别作为净化剂，发现用PSA+GCB作为净化剂既能在去除基质中的杂质的同时还能取得理想的回收率。

2.3 方法的灵敏度、线性相关性、准确度及精密度 本实验灵敏度以最低添加浓度0.01mg/kg的色谱图的噪音信号的3倍和10倍确定，腈菌唑在烟草中的最低检测限（LOD）（S/N=3）分别为0.029μg·kg-1，定量限（LOQ）（S/N=10）分别为0.09μg·kg-1。把500μg·L-1、100μg·L-1、50μg·L-1、10μg·L-1、1μg·L-1标准溶液和烟草基质标准溶液进样，以峰面积（Y）对浓度（μg·L-1）（X）作图，得到腈菌唑的标准溶液曲线：Y=21295x+156791（R2=0.999 1）（图1）；烟草基质标准溶液曲线：Y=2103.8x+14802（R2=0.99 9）（图2）。本方法用添加回收率和变异系数衡量准确度及精密度。在空白的烟草添加3个浓度腈菌唑标液，每个浓度重复5次，计算添加回收率和变异系数。腈菌唑在烟草中平均回收率为88.3%～93.0%，变异系数为5.2%～7.3%（表1）。本方法的准确性、精密度均满足农药残留分析的要求[17]。色谱图见图3。

本实验中，用0.001mg/L标准溶液在相同色谱条件下，1h进样1次，连续进样5次，所测得峰面积的变异系数为7.6%，表明仪器具有很好的稳定性。在烟草局抽查的烟草样品中检测得腈菌唑的残留量均小于0.001mg·kg-1。

3 结论

本文采用1%乙酸乙腈提取、PSA加GCB净化，建立了烟草样品的UPLC-MS/MS快速检测腈菌唑残留量的方法。腈菌唑在烟草中平均回收率为89.1%～105.9%，变异系数为4.9%～8.5%。该方法简单快速、准确可靠，可用于大量样品的快速检测。

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（责编：张宏民）