高效液相色谱－电喷雾检测器法测定贞芪扶正颗粒中黄芪甲苷含量

梁慧敏，欧 妮

（广西壮族自治区梧州食品药品检验所，广西 梧州 543002）

高效液相色谱－电喷雾检测器法测定贞芪扶正颗粒中黄芪甲苷含量

梁慧敏，欧 妮

（广西壮族自治区梧州食品药品检验所，广西 梧州 543002）

目的建立测定贞芪扶正颗粒中黄芪甲苷含量的高效液相色谱－电喷雾检测器(HPLC－CAD)法。方法采用ZORBAX Eclipse Plus C18柱（100 mm×4．6 mm，3．5 m），检测器为电喷雾检测器，雾化温度为35℃，载气N2，压力63．6 psi，柱温40℃。结果黄芪甲苷进样量在0．286～2．86 g范围内与峰面积对数值线性关系良好（r＝0．999 8），平均回收率为99．14%，RSD为0．42%（n＝9)，阴性对照无干扰。结论该方法操作简便，灵敏度高，方法可靠，结果准确，重复性好，可作为贞芪扶正颗粒质量控制的方法。

贞芪扶正颗粒；黄芪甲苷；高效液相色谱－电喷雾检测器法

贞芪扶正颗粒的主要成分为黄芪、女贞子，药理作用是提高人体免疫功能，保护骨髓和肾上腺皮质功能，可用于各种疾病引起的虚损，配合手术、放射、化学治疗时促进正常功能的恢复。卫生部颁药品标准中对贞芪扶正颗粒的质量控制以黄芪甲苷为指标，采用薄层扫描法测定含量，其前处理步骤繁杂，方法耗时，重复性差，可行性不佳。为了更好地控制其质量，保证该品种的临床疗效，本研究中采用高效液相色谱－电喷雾检测器(HPLC－CAD)法同时对制剂中黄芪甲苷进行了含量测定，简化了提取条件，方法准确、简便、快速。

1 仪器与试药

液相双三元Thermo－U3000，BP211D型电子分析天平。黄芪甲苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110781－200613，含量为95．8%）；贞芪扶正颗粒(通化神源药业有限公司，批号为20140220，规格为每袋5 g)；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18柱（100 mm× 4．6 mm，3．5 μm）；流动相：乙腈－水（32∶68）[1]；流速：1．0 mL／min；检测器为电喷雾检测器，雾化温度为35℃；载气：N2，压力63．6 psi；柱温：40℃。在此条件下，黄芪甲苷峰与邻峰基线分离良好，理论板数不低于8 000[2]。在对照品溶液色谱主峰位置上，供试品溶液具有保留时间相同的色谱峰，阴性对照品溶液则无此峰，表明样品中其他成分对黄芪甲苷的测定无干扰。色谱图见图1。

2．2 溶液制备

称取黄芪甲苷对照品18．66 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成黄芪甲苷对照品贮备溶液（质量浓度为1．787 6 g／L）；再精密量取2 mL，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，制成对照品溶液（质量浓度为0．143 0 g／L）。

取贞芪扶正颗粒10袋，研成细粉，称取样品约5 g，加水40 mL溶解，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇溶液振摇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次20 mL，弃去氨试液，正丁醇液蒸干[3－5]，残渣加甲醇溶解，转移至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0．22 μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

按处方工艺制得不含黄芪的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察：精密量取黄芪甲苷对照品溶液（质量浓度为0．143 0 g／L）2，5，10，15，20 μL进样，以进样量对数值（X）为横坐标、对照品平均峰面积对数值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y＝1．505 21 X＋5．586 95，r＝0．999 8（n＝5）。结果表明，黄芪甲苷进样量在0．286～2．86 μg范围内与峰面积对数值呈良好线性关系。

图1 高效液相色谱图

精密度试验：精密量取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次依法测定。结果的 RSD为1．1%（n＝5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，于配制后0，2，4，6，8 h时分别量取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。结果的 RSD分别为1．1%，0．95%（n＝5），表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验：称取贞芪扶正颗粒细粉，照2．2项下方法共制备6份供试品溶液，分别取10 μL注入液相色谱仪，以峰面积外标法测定含量。结果黄芪甲苷平均含量为0．444 mg／g，RSD为1．5%（n＝6）。

加样回收试验：精密称取已知含量的贞芪扶正颗粒细粉(黄芪甲苷含量为0．444 mg／g)共6份，加入黄芪甲苷对照品溶液（质量浓度为0．143 0 g／L）7．5 mL，照2．2项下方法处理后，各取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积外标法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收试验结果（n＝9）

2．4 样品含量测定

取3批样品，依法测定含量。结果批号为20140220，20140322，20140510的样品中黄芪甲苷含量分别为每袋2．3，2．2，2．1 mg。

3 讨论

本试验中提取方法所用到的氨试液，主要是去除到颗粒剂中的极性成分如糖类等，减少基质干扰，增加了系统分离能力。关于正丁醇提取次数的选择，供试品在其他相同条件下，用水饱和的正丁醇振摇提取2，3，4次，结果表明，用供试品提取2次与3，4次有较大差异，而3，4次时黄芪甲苷含量无明显差异，故选择用水饱和的正丁醇溶液振摇提取3次。

关于流动相的选择，参考2010年版《中国药典（一部）》黄芪中黄芪甲苷项下的溶剂，经过试验不同流动相的比例(30∶70，32∶68，35∶65)，结果流动相为乙腈 －水（32∶68）可同时将黄芪甲苷峰和其他杂质峰分离，且分离效果较好，无干扰，故选用该流动相。

本试验中采用的电喷雾式检测器（CAD）是一款通用检测器，可检测任何非挥发性和部分半挥发性物质，重复性好，回收率高，结果可靠，可作为黄芪制剂的质量控制方法[6－9]。

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Content Determination of Stachydrine Hydrochloride in Zhengqifuzheng Granules by HPLC－CAD

Liang Huimin,Ou Ni
(Guangxi Wuzhou Institute for Food and Drug Control,Wuzhou,Guangxi,China 543002)

Objective To establish an HPLC－CAD method for the determination of Stachydrine Hydrochloride in Zhengqifuzheng Granules．M ethods A ZORBAX Eclipse Plus C18Column(100 mm×4．6 mm,3．5 μm)was used．Detector was CAD,with evaporation temperature at 35℃,N2as Carrier gas,pressure at 63．6 psi,Column temperature at 40℃．Results Stachydrine Hydrochloride showed good linear range within 0．286－2．86 μg(r＝0．999 8)．The average recovery was 99．14%,RSD＝0．42%(n＝9)．The negative sample had no interference．Conclusion s This method is simple,feasible and reproducible．The result was reliable and accurate．It can be used for the quality control of Zhengqifuzheng Granules．

Zhengqifuzheng Granules;stachydrine hydrochloride;HPLC－CAD

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)05－0055－03

梁慧敏（1981－），大学本科，主管药师，主要从事药品检验工作，（电话）0774－3823896（电子信箱）13637823＠qq．com。

2015－10－14；

2015－11－20)