gE抗体阳性仔猪免疫伪狂犬病活疫苗后的抗体变化规律

周远成，王 翱，蔡雨函，李 碧，卓秀萍，牛 婷，钟 颖

（1.畜禽生物制品四川省重点实验室，四川 成都 610299；2.四川省畜牧科学研究院，四川 成都 610065；3.四川华神兽用生物制品有限公司四川省动物生物制品工程技术研究中心，四川 成都 610299）

gE抗体阳性仔猪免疫伪狂犬病活疫苗后的抗体变化规律

周远成1，2，3，王 翱1，3，蔡雨函1，3，李 碧1，3，卓秀萍1，3，牛 婷1，3，钟 颖1，3

（1.畜禽生物制品四川省重点实验室，四川 成都 610299；2.四川省畜牧科学研究院，四川 成都 610065；3.四川华神兽用生物制品有限公司四川省动物生物制品工程技术研究中心，四川 成都 610299）

伪狂犬病（Pseudorabies）最早发生于1813年，1894年瑞士首次使用“伪狂犬病”这个词命名该病。1902年Aujeszky通过研究发现该病病原为病毒，此后研究人员证实该病病原为疱疹病毒，将其命名为猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV），也称猪疱疹病毒1型[1]。在我国，1947年时刘永纯首次在上海分离到PRV，1956年国营宝泉岭农场暴发猪伪狂犬病，1957年四川华阳出现此病，此后PRV一直在我国流行。近年来猪伪狂犬病呈现新的流行趋势，新流行的PRV致病力强于经典流行毒株，通过分子流行病学对其主要致病力和免疫保护相关基因进行分析，结果发现新流行的PRV毒株具有多个新的变异位点[2-5]。变异伪狂犬病病毒的流行给我国生猪养殖业造成巨大的经济损失。

疫苗免疫是防止传染性疾病的最有效手段。目前国内广泛使用的伪狂犬病疫苗主要有弱毒活疫苗SA215株、HB98株、HB2000株、Barha（或Barha K61株）、Bucharest株以及鄂A株和闽A株灭活疫苗。《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）》将猪伪狂犬病列为重点疫病，2020年全国所有的种猪场需要达到净化标准。在此背景下本试验开展了相关研究工作，测试了gE抗体阳性仔猪免疫伪狂犬病活疫苗后的抗体变化趋势，为伪狂犬病病毒免疫、净化和gE阴性仔猪的培育提供了重要的试验数据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

28日龄已断奶仔猪（长白、大约克、杜洛克三元杂种仔猪）30头购于四川某猪场，饲养于畜禽生物制品四川省重点实验室试验动物房（四川省成都市双流区黄甲镇），整个试验期间维持圈舍温度为25℃，自由采食、饮水。试验时间为2016年6—9月。

1.2 抗体检测试剂盒

PRV gE抗体检测试剂盒和PRV gB抗体检测试剂盒均购于IDEXX公司。

1.3 试验用疫苗和稀释液

猪伪狂犬病活疫苗（扑伪优）购于四川华神兽用生物制品有限公司，对照疫苗购于国内某厂商，IM101疫苗稀释液由畜禽生物制品四川省重点实验室制备提供。

1.4 试验方法

1.4.1 试验动物筛选 采集gE抗体阳性的种猪所产断奶仔猪血清，使用gE抗体ELISA检测试剂盒测试所有待检血清的gE抗体，选择gE抗体阳性的仔猪30头，开展本试验。

1.4.2 分组和免疫 将30头仔猪随机分为3组，每组10头，分别标记为1、2、3组，其中第1组为扑伪优组，免疫猪伪狂犬病活疫苗SA215株（使用IM101稀释液稀释该疫苗）；第2组对照疫苗组，免疫对照国产疫苗（使用疫苗配套稀释液稀释该疫苗）；第3组为空白对照组，仅注射IM101稀释液。免疫方式均为肌肉注射，免疫剂量均为2 mL/头。

1.4.3 抗体检测和数据分析 分别在免疫时（4周龄）、免疫后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周采集血清，按照伪狂犬病病毒gE抗体检测试剂盒和gB抗体检测试剂盒说明书进行gB和gE抗体的检测并计算相应的S/N值。如果S/N≤0.6判定为阳性，0.6＜S/N≤0.7判定为可疑，应重新检测，S/N＞0.7判定为阴性。根据判定结果计算不同采血时间点的抗体阳性率。

2 试验结果

2.1 免疫后gB抗体变化规律

本次试验选择的均为gE阳性仔猪，免疫前测定所有试验猪gB抗体也均为阳性。4周龄时免疫，然后每周采集血清使用ELISA检测试剂盒测定所有仔猪的血清抗体。结果发现，在免疫后1～4周对照疫苗组和空白对照组S/N轻微升高，免疫4周以后迅速升高，在免疫后7周时全部升高至0.7以上，此时对照疫苗组和空白对照组所有猪gB抗体均变为阴性。随着S/N的升高，对照疫苗组和空白对照组gB抗体阳性率持续下降，在免疫后7周（10周龄）时，对照疫苗组gB抗体阳性率下降至60%，空白对照组下降至50%。对照疫苗组于免疫后8周gB抗体阳性率变为0，而空白对照组则在免疫后9周时降至0。而扑伪优组gB抗体S/N值在整个免疫后10周内无较大波动，S/N值平均值均＜0.2，一直维持在较低水平，gB抗体阳性率一直维持为100%阳性。gB抗体测定结果见图1、图2。

图1 仔猪免疫后gB ELISA S/N值变化趋势

图2 仔猪免疫后gB抗体阳性率变化趋势

2.2 免疫后gE抗体变化规律

本试验中所选择的gE抗体阳性仔猪在4周龄时免疫伪狂犬病病毒活疫苗，免疫后不同时间点测定gE抗体，结果发现，所有试验组免疫后gE抗体的S/N值均随着时间的增加逐渐增大。扑伪优组和空白对照组在免疫后3周时S/N值平均值上升至0.6以上，而对照疫苗组则在免疫后5周上升至0.6以上。gE抗体阳性率随着仔猪日龄的增加逐渐下降，对照疫苗组在免疫后5周gE阳性率变为0，所有仔猪gE抗体转阴，而扑伪优组和空白对照组则在免疫后6周全部转阴。3个试验组中gE抗体S/N值和gE抗体阳性率虽然在转阴时间点上有细微差异，但是其变化趋势一致。gE抗体测定分析结果见图3、图4。

图3 仔猪免疫后gE抗体S/N值变化趋势

图4 仔猪免疫后gE抗体阳性率变化趋势

3 讨论

2011年前后全国各地均有伪狂犬病暴发的报道，不同猪场由于猪群群体免疫力的差异，呈现不同的临床症状，但所有猪场均出现种猪群或肥育猪群gE抗体阳性率突然升高。基于当前我国伪狂犬病病毒的流行特征和流行趋势，为了解猪狂犬病病毒gE抗体阳性母猪所产仔猪的免疫情况，本试验使用gE抗体阳性种猪所产仔猪进行疫苗免疫试验，测定了gE抗体阳性仔猪免疫伪狂犬病活疫苗后的抗体变化趋势。结果表明，伪狂犬病病毒gE抗体阳性母猪分娩的仔猪可以通过初乳获得母源的gE抗体，但随着日龄的增加gE抗体阳性率会逐步下降，在一定条件下gE抗体可以完全转阴。该试验同时也间接证实，gE抗体阳性母猪在分娩期和哺乳期不会排毒感染初生仔猪（不同猪群的不同感染状态下可能存在差异），初生仔猪的gE抗体完全来源于母乳。

在本试验中，除了测定gE抗体的变化趋势外，还进行了gB抗体的测定。已有数据表明，gE抗体阳性猪群中种猪的中和抗体效价显著高于gE阴性仔猪，因此在哺乳期，gE抗体阳性母猪所产仔猪的母源抗体会高于gE阴性仔猪。如果免疫时间选择不合理或者选择的疫苗不能避免母源抗体的干扰，使用肌肉注射免疫后进入仔猪体内的病毒会完全被母源抗体中和而不能发挥作用。本试验测试结果表明，该猪场仔猪首次肌肉注射免疫应在10周龄时进行。但不同猪场由于种猪的免疫差异存在着不同的规律，养猪从业者需要根据猪场的实际情况调整具体的免疫程序方能达到有效免疫，防止伪狂犬病的暴发。

[1]Barbara E Straw,Jeffery J Zimmerman,Sylvie D'Allaire,等主编.猪病学[M].第9版.赵德明，张仲秋，沈建忠，译.北京：中国农业大学出版社，2008：465-476.

[2]An T Q,Peng J M,Tian Z J,et al.EmergInfectDis[J],2013,19(11): 1749-1755.

[3]Yu X,Zhou Z,Hu D,et al.Emerg Infect Dis[J],2013,19(11): 1749-1755.

[4]Luo Y,Li N,Cong X,et al.Vet Microbiol[J],2014,174(1-2): 107-115.

[5]Wang Y,Qiao S,Li X,et al.Virus Genes[J],2015,50(3):401-409.

[6]陈陆，郭万柱，徐志文，等.动物医学进展[J],2005（5）：52-56.

（编辑：郭玉翠）

S858.28

A

1002-1957(2016)06-0093-02

2016-09-20收稿，2016-10-08修回

四川省科技支撑计划（2015NZ0105，2016RZ0081）；科技成果转化项目（专项）（2014CC0056）

周远成（1984-），男，四川金堂人，博士，主要从事动物传染病和动物生物制品研究工作.E-mail：abtczyc＠163.com