转化生长因子基因多态性与多发性骨髓瘤的相关性

韩富秋，杨国东，王仕超，董海荣

(呼和浩特市第一医院检验科，内蒙古呼和浩特 010030)



转化生长因子基因多态性与多发性骨髓瘤的相关性

韩富秋，杨国东，王仕超，董海荣△

(呼和浩特市第一医院检验科，内蒙古呼和浩特 010030)

摘要:目的探讨转化生长因子(TGF)基因单核苷酸多态性与多发性骨髓瘤(MM)的关系。方法采用病例对照研究，选取多发性骨髓瘤患者55例和健康对照55例，采用聚合酶链反应(PCR)-连接酶检测反应(LDR)进行基因型、等位基因型检测，并进一步进行测序分型。结果MM患者TGF两位点基因型频率、等位基因频率、联合单倍体分型中各型的频率与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论转化生长因子基因单核苷酸多态性与多发性骨髓瘤的发生以及亚型没有明显的相关性。

关键词:多发性骨髓瘤；单核苷酸多态性；转化生长因子基因

多发性骨髓瘤(MM)是一种B细胞肿瘤，占血液系统恶性肿瘤的15%和总的恶性肿瘤的1%[1]，特点是浆细胞的克隆性增生和分泌，导致单克隆性免疫球蛋白过度产生[2]，从而导致一系列临床症状包括骨病变、贫血和终末器官肾脏疾病[3]。MM的病因是多方面的，包括炎症、氧化应激、遗传变异和单核苷酸多态性等[4]。笔者旨在通过研究转化生长因子与MM的相关性，从遗传学角度阐明MM的发病机制。

1资料与方法

1.1一般资料病例组来源于2013年4月至2014年9月协和医科大学附属医院MM患者,共55例，其中女26例，男29例。健康对照组55例，其中女29例，男26例。

1.2方法采用Kit法对受试对象的外周血进行基因组DNA的抽提，并检测总的DNA浓度、纯度和完整性，采用聚合酶链反应(PCR)扩增SNP位点所在片段，然后取PCR产物进行连接酶检测反应(LDR)，取多重LDR产物进行测序分析。

1.3统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行数据分析，组间均数比较采用t检验，组间频数比较用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1临床指标比较MM患者和健康者的临床资料对比见表1。

表1　　MM患者和正常对照的临床资料对比

续表1　　MM患者和正常对照的临床资料对比

2.2DNA电泳抽提全血基因组DNA，并检测其完整性。样本电泳结果显示样本质量较为均一，样本浓度适中。

图1　　DNA电泳图谱

2.3 多重PCR扩增在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600仪器上设置扩增程序：95 ℃ 15 min变性，94 ℃ 30 s，退火56 ℃ 1 min延伸，共35个循环72 ℃ 1 min延伸72 ℃ 7 min保存。

M:标志物；1:样本；2:样本。

图2多重PCR扩增图谱

2.4PCR产物的连接酶检测反应在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上设置如下程序：95 ℃2 min变性，94 ℃30 s退火，50 ℃2 min连接共35个循环。

2.5测序仪检测应用Genemapper软件进行数据分析和基因分型。

2.6基因型及等位基因频率分布比较见表2。

基因型及等位基因频率分布比较[n(%)]

MT：multiple myeloma;NT：normotensives。

2.7数据分析应用Genemapper软件进行数据分析和基因分型。见图3，列举部分位点的分型截图。(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。

3讨论

最近的研究表明，遗传倾向可能影响肿瘤患者的生存期、与治疗相关的症状以及与健康相关的生活质量[5-6]。炎症是阐明肿瘤相关症状表达的候选机制[7-8]。当前MM的候选基因研究热点有白细胞介素6、肿瘤坏死因子以及生长转化因子等，本研究旨在通过研究生长转化因子与MM的相关性来阐明其发病机制。

生长转化因子(TGF)是一类具有多种生物学活性的细胞因子，参与调节细胞的增殖、分化、发育和凋亡等多种生命活动。TGF对肿瘤的作用是极其复杂的。在空间方面，TGF信号通路对肿瘤细胞自身的作用在肿瘤抑制和肿瘤发展机制中有重要意义，又能通过影响肿瘤的微环境(如成纤维细胞、免疫细胞和细胞外基质)来促进或抑制肿瘤的发展和转移。在时相方面，TGF在肿瘤的进展期可通过多种机制促进肿瘤的侵袭和转移。TGF信号通路的复杂特性对肿瘤机制的研究和肿瘤的靶向治疗提供了全新的机遇和挑战。

笔者研究了北方地区人群TGF基因位点rs8105161与rs4803455多态性与MM的相关性，发现病例组与对照组间没有统计学意义(P>0.05)，所以在研究人群中，TGF基因多态性与MM没有相关性。这与王皓等[9]的研究结论相符，TGF可能在MM发生中起到一定的作用，但该因子基因编码区多态性并不会影响血浆TGF-β1的浓度，也与MM的发生以及亚型没有明确的相关性。本研究MM患者CD4+CD25+CD127低、CD4+CD25高、CD127低T细胞与TGF-β的表达水平无明显相关性，说明TGF-β或许不是导致MM患者体内调节性T细胞增加的重要或唯一因素。

综上所述，有许多因素如年龄、放射线、种族等都可能影响MM的发生、发展，单一的基因多态性并不足以导致MM的发病，所以有必要进行多因素的联合研究来进一步明确MM的发病机制。

参考文献

[1]Angtuaco EJ,Fassas AB,Walker R,et al.Multiple myeloma:clinical review and diagnostic imaging[J].Radiology,2004,231(1):11-23.

[2]Kyle RA,Rajkumar SV.Multiple myeloma[J].N Engl J Med,2004,351(18):1860-1873.

[3]Maclennan I,Drayson M,Dunn J.Multiple myeloma[J].BMJ,1994(308):1033-1036.

[4]Stellrecht CM,Gandhi V.Myeloma antioxidant status:the good,the bad and the reactive[J].Leuk Lymphoma,2009,50(5):691-693.

[5] Sprangers MA,Sloan JA,Barsevick A,et al.Scientific imperatives,clinical implications and theoretical underpinnings for the investigation of the relationship between genetic variables and patientreported quality-of-life outcomes[J].Qual Life Res，2010，19(1):1395-1403.

[6] Sprangers MA,Thong MS,Bartels M,et al.Biological pathways,candidate genes,and molecular markers associated with quality-oflife domains:an update[J].Qual Life Res,2014,23(3):1997-2013.

[7] Cleeland CS,Bennett GJ,Dantzer R,et al.Are the symptoms of cancer and cancer treatment due to a shared biologic mechanism? A cytokine-immunologic model of cancer symptoms[J].Cancer,2003,97(1):2919-2925.

[8]Maier SF,Watkins LR.Immune-to-central nervous system communicationand its role in modulating pain and cognition:implicationsfor cancer and cancer treatment[J].Brain Behav Immun,2003,17(1):125-131.

[9]王皓，杨再兴，高春芳，等．转化生长因子-β1及其基因多态性与多发性骨髓瘤的关系研究[J]．中国免疫学杂志，2006，22(7)：650-653．

·论著·

Correlation between TGF gene polymorphism and multiple myeloma

HanFuqiu,YangGuodong,WangShichao,DongHairong△

(DepartmentofClinicalLaboratory,HuhehaoteMunicipalFirstHospital,Huhehaote,Neimenggu010030,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the relationship between transforming growth factor gene (TGF) single nucleotide polymorphism (SNP) and multiple myeloma (MM).MethodsThe case control study was performed,55 patients with MM and 55 healthy controls were selected.The genotype and allele detections were performed by adopting the polymerase chain reaction (PCR) and the ligase detection reaction (LDR) respectively.Then the sequencing based typing was further conducted.ResultsThere were no statistically significant differences in the two loci genotype frequencies,allele frequencies and genotype frequencies in joint haploid typing between the MM group and the control group(P>0.05).ConclusionSNP of TGF gene has no obvious correlation with the occurrence of MM and subtypes.

Key words:multiple myeloma;single nucleotide polymorphism;transforming growth factor gene

作者简介：龙国文，男，主任检验技师，主要从事检验质量控制工作。

收稿日期：(2015-06-08)

文献标识码：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.019A

文章编号：1673-4130(2015)24-3554-02