蜜炙对升麻有机酸类成分的影响

于晓，戴衍朋

(1.山东中医药大学，山东 济南 250355 ; 2.山东省中医药研究院，山东 济南 250014)



蜜炙对升麻有机酸类成分的影响

于晓1，戴衍朋2*

(1.山东中医药大学，山东 济南 250355 ; 2.山东省中医药研究院，山东 济南 250014)

摘要：建立了HPLC法同时测定升麻中咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸3种成分的方法，并考察蜜炙对升麻中有机酸成分的影响。应用Thermo AcclaimTM120 C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)，在流速1 mL/min、柱温为30 ℃及检测波长316 nm的条件下，以乙腈-0.1%磷酸作为流动相进行梯度洗脱。结果表明，咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸分别在0～0.028 μg(R=0.999 5)、0～0.067 μg(R=0.999 4)和0～0.27 μg(R=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,加样回收率分别为99.8%、99.4%和101.6%。该方法简便、可靠且准确，可用于证明蜜炙对升麻中3种有机酸成分具有一定的影响。

关键词：升麻； 蜜炙； 咖啡酸； 阿魏酸； 异阿魏酸

升麻来源于毛茛科植物大三叶升麻(CimicifugaheracleifoliaKom.)、兴安升麻(Cimicifugadahurica(Turcz.) Maxim .)或升麻(CimicifugafoetidaL.)的干燥根茎。其主要功效是清热解毒、发表透疹和升举阳气，临床上主要用于治疗风热头痛、齿痛、口疮、咽喉肿痛、麻疹不透以及阳毒发斑等症[1]。升麻主要有升麻片、蜜升麻和升麻炭3种炮制规格[2]。升麻经蜜炙后减弱了其辛散作用，略带甘补之性，以升举脾阳为主，同时对胃的刺激性减轻，主要用于中气虚弱、短气乏力、倦怠以及中气下陷之久痢、久泻、脱肛、子宫下垂以及崩漏等[3]。现代药理研究发现升麻具有解热、镇痛、镇静、抗炎、抗肿瘤和抗病毒等多种药理活性[4]。曹丽等[5]通过小鼠福尔马林致痛反应、热板法、醋酸扭体实验和小鼠自发活动及举双肢法，发现不同品种的升麻经过蜜炙后镇痛和镇静活性显著增强。Ou等[6]对阿魏酸进行深入研究，发现阿魏酸具有较强的抗肿瘤活性。刘蓓蓓等[7]提到升麻根茎中所含的一类酚酸性物质(如阿魏酸、异阿魏酸)具有较强的抗炎作用。升麻蜜炙后功效的变化与其相应的物质基础变化相关，本文采用HPLC法测定了升麻和蜜升麻中的有效成分咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸的含量，并初步探讨了蜜炙对3种有机酸成分的影响，为升麻蜜炙的炮制原理研究提供数据支撑。

1仪器与试药

1.1仪器

Sartorius R200D十万分之一电子天平(德国赛多利斯集团)，Thermo U3000型高效液相色谱仪(美国赛默飞世尔科技有限公司)。

1.2试药

升麻样品由山东省中医药研究院林慧彬研究员鉴定均为大三叶升麻干燥根茎的加工品。蜜升麻样品由升麻样品采用文献[4]方法炮制加工即得。咖啡酸(K-003-110523)购于四川瑞芬思生物科技有限公司，阿魏酸(110773-201012)和异阿魏酸(11698-200602)对照品均购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯(迪马科技)；甲醇、磷酸均为分析纯(天津富宇)；水为自制超纯水。

2实验方法和结果

2.1色谱条件

色谱柱：Thermo AcclaimTM120 C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。流动相： A为乙腈，B为0.1%磷酸水，梯度洗脱程序为0～15 min，12%～20% A；15～30 min，20%～26% A。流速为0.8 mL/min，柱温为30 ℃，波长为320 nm，进样量为5 μL。按照上述色谱条件进样，对照品和供试品的色谱图如图1～2所示。

A 咖啡酸 B阿魏酸 C异阿魏酸图1　混合对照品色谱图Fig.1　Chromatogram of the compound reference substance

A 咖啡酸 B阿魏酸 C异阿魏酸图2　升麻饮片样品色谱图Fig.2　Chromatogram of Cimicifugae Rhizomas amples

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备

分别取咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸对照品适量，精密称定，加10%甲醇溶解定容，制得含咖啡酸0.356 mg/mL、阿魏酸0.133 mg/mL和异阿魏酸0.133 mg/mL的对照品储备液；分别精密吸取咖啡酸储备液0.4 mL、阿魏酸、异阿魏酸储备液1 mL至10 mL容量瓶中，加10%甲醇定容，得到3种有机酸的混合溶液。

2.2.2供试品溶液的制备

精密称取升麻及蜜升麻饮片粉末(过二号筛)0.2 g，加入20 mL10%的甲醇，称定重量后加热回流提取1.5 h，放冷后再次称定重量，减失的重量用10%甲醇补足，摇匀，过滤，即得[8]。

2.3方法学考察

2.3.1线性关系

取浓度为2.848 、6.650、26.600 μg/mL的咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸对照品溶液，分别进样1、3、5、8、10、12 μL，测定各自峰面积，以进样量(μg)、峰面积分别为横坐标(X)、纵坐标(Y)，进行回归分析，分析结果见表1。

表1　3种成分线性关系考察结果

2.3.2精密度实验

精密吸取5μL咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸对照品溶液，连续进样5次，分别测定咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸的峰面积，结果3种成分峰面积的RSD分别为0.55%、0.38%、0.24%，表明本方法精密度符合要求。

2.3.3重复性实验

取5份同一批次的升麻样品，按照2.2.2项下的方法制备供试品溶液，然后按2.1项下的色谱条件进行色谱分析，分别测定3种有机酸的质量分数。结果咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸平均含量分别为0.030%、0.081%和0.430%，平均含量的RSD分别为1.5%、2.3%和2.0%，表明该实验方法的重复性符合HPLC色谱技术要求。

2.3.4稳定性实验

精密吸取同一供试品溶液5μL，分别在0、2、4、8、12、24h进行色谱分析，记录峰面积，结果咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸峰面积的RSD分别为0.79%、1.35%和0.75%，表明在24h内3种有机酸成分稳定性良好。

2.3.5加样回收率实验

取9批已知有机酸含量的升麻样品粉末，分别加入样品含量80%、100%、120%的咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸的对照品溶液，按2.2.2项下的方法制备，测定3种有机酸成分的含量，并计算各自回收率，结果见表2。

2.4样品测定

按2.2.2项下供试品溶液的制备方法和色谱条件对所有升麻饮片及相应的蜜升麻饮片样品进行测定，计算含量，结果见表3。

表2　加样回收率实验结果

表3　测定结果(%，n=3)

3讨论

由于有机酸化合物的极性偏大，本课题组比较了不同体积分数甲醇(O、10%、20%、30%、40%、50%)和不同回流时间(1、1.5、2、2.5、3 h)的提取效果，发现以10%甲醇为溶剂超声提取1.5 h最佳。

异阿魏酸是中国药典2010年版中升麻药材的含量测定指标，在升麻中的含量远高于咖啡酸和阿魏酸；蜜炙后咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸含量均有所升高，这种变化与蜜炙后功效改变的关系尚需进一步结合药效学实验进行深入研究。实验结果可以为升麻蜜炙的原理研究提供数据支持。

本实验建立了升麻中咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸的含量测定方法，实验所确定的方法简便、准确，可用于升麻及升麻饮片的质量控制。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010:68.

[2] 山东省药品监督管理局.山东省中药炮制规范2002年版[M].山东:山东友谊出版社,2003:37.

[3] 叶定江,张世臣,吴皓.中医药学高级丛书中药炮制学[M].2版. 北京:人民卫生出版社，2011:270.

[4] 刘勇,陈迪华,陈雪松.升麻属植物的化学、药理与临床研究[J].国外医药·植物药分册,2001,16(2):55-58.

[5] 曹丽,孙红,李展,等.不同品种的升麻蜜制前后药理活性的比较[J].中药材,2007,30(12):1561-1563.

[6] OU S Y,KWOK K C.Ferulic acid:Pharmaccutical functions,preparation and applications in foods[J]. J Sci Food Agric， 2004,84(11):1261-1269.

[7] 刘蓓蓓,陈胜璜,陈四保.升麻化学成分及其抗肿瘤活性研究进展[J].中南药学,2012,10(1):53-58.

[8] 张慧芳,戴衍朋.正交试验设计优选升麻最佳蜜制工艺[J].中国医院药学杂志,2014,34(7):520-523.

【中药与天然活性产物】

Impact of honey-fired processing on organic acid

components in Cimicifugae Rhizoma

YU Xiao1,DAI Yan-peng2

(1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250355,China;

2.Shandong Academy of Chinese Medicine,Jinan 250014,China)

Abstract∶We develop a determination method for cafeic acid,ferulic acid, isoferulic acid in Cimicifugae Rhizoma with HPLC and address the impact of honey-fired processing on organic acid in Cimicifugae Rhizoma.We employed Thermo AcclaimTM120 C18column(4.6 mm×250 mm,5 μm)to perform gradient elution with acetonitrile-0.1%phos-phoric acid as mobile phase, flow rate of 1.0 mL/min, column temperature of 25 ℃, and detection wavelength of 316 nm.Results show that better linear relationship exists in 0～0.028 μg for cafeic acid(R=0.999 5), 0～0.067 μg for ferulic acid(R=0.999 4)and 0～0.27 μg for isoferulic acid(R=0.999 9).Their recovery rates are 99.8%,99.4% and 101.6%.The method is simple,reliable and accurate and can be used for proving some influences of honey-fired processing on the three organic acid in Cimicifugae Rhizoma.

Key words∶Cimicifugae Rhizoma; honey-fired processing;cafeic acid;ferulic acid;isoferulic acid

DOI:10.3976/j.issn.1002-4026.2015.04.006

中图分类号：R284.1

文献标识码：A

文章编号：1002-4026(2015)04-0025-05

通讯作者*，戴衍朋，男，硕士，助理研究员，研究方向为中药炮制及分析。Email：daiyanpeng@gmail.com

作者简介：于晓(1989-)，女，硕士研究生，研究方向为中药炮制及中药化学。Email：545787679@qq.com

基金项目：山东省中医药科技发展计划(2011-180)；中医药行业科研专项(201207004-9)

收稿日期：2015-05-14