GC法同步测定桉薄溶液中桉油精、薄荷脑的含量

GC法同步测定桉薄溶液中桉油精、薄荷脑的含量

董宏伟，吕淑荣，刘哲林

(烟台绿叶动物保健品有限公司，山东 烟台 264003)

摘要：目的建立中药制剂中桉油精、薄荷脑的含量测定方法。方法采用气相色谱法，ZB-WAX弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；环己酮为内标。结果桉油精和薄荷脑的线性范围分别为0.146～2.555 mg·mL-1(R2=0.999 9)、0.198～3.465 mg·mL-1(R2=0.999 8)；平均加样回收率分别为99.8%、99.5%(n=9)，桉油精与薄荷脑的最低定量限浓度分别为6.27、9.90 μg·mL-1；最低检测限浓度分别为1.044、1.65 μg·mL-1。结论方法简便、快速、准确、分离度好、其他成分无干扰，适用于复方制剂中多成分的质量控制。

关键词：气相色谱；桉薄溶液；桉油精；薄荷脑

基金项目：国家星火计划项目(No.2013GA740037)；烟台市科技发展计划(No.2012055)

作者简介：董宏伟，男，研究方向：药物分析，E-mail：weid8848@163.com

中图分类号：R927.2文献标识码：A

Determination of eucalyptol and menthol in eucalyptol and menthol solution by GC

DONGHong-wei,LVShu-rong,LIUZhe-lin

(YantaiLvyeAnimalHealthProductsLimitedCompany,Yantai264003,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method for the derermination of eucalyptol and menthol in Chinese medicine preparations.MethodsGas chromatography,the ZB-WAX elastic quartz capillary column(30 m×0.25 mm,0.25 μm);Cyclohexanone as internal standard.ResultsThe linear range of eucalyptol and menthol was 0.146～2.555 mg·mL-1 (R2=0.999 9),0.198～3.465 mg·mL-1 (R2=0.999 8);The average sample recovery rates were 99.8%,99.5%,respectively (n=9),the minimum quantitative limit concentrations of eucalyptol and of menthol were 6.27,9.90 μg·mL-1;The minimum detection limit concentrations were 1.044,1.65 μg·mL-1.ConclusionThe method was simple,rapid,accurate,good separating degree,no interfere with other ingredients and was applicable to many ingredients in the compound preparation of quality control.

Key words:GC;Eucalyptol and menthol solution;Eucalyptol;Menthol

桉油为桃金娘种植物蓝桉和樟科植物或上述两科同属其他植物经蒸馏得到的挥发油，桉油中主要含桉油精，还含有柠檬烯、α-蒎烯等成分。桉油[1，2]具有抗菌消炎、平喘镇痛、止咳祛痰、减轻水肿等作用。薄荷脑为唇形科植物薄荷的新鲜茎和叶经水蒸气蒸馏、冷冻、重结晶得到的一种饱和的环状醇。其味辛，性凉，能疏风、清热，可治外感风热、头痛、咽喉肿痛、牙痛、皮肤风痒、口疮[3，4]。桉薄溶液包含桉油与薄荷脑2种成分能用于改善和治疗由病毒感染或免疫应激等引发的鸡的呼吸道症状，疗效确切。《中国药典》2000年版(一部)采用复合柱对桉油精进行测定[9]，方法实用性低，本方法采用ZB-WAX柱对2种成分同时进行分离与检测，方法快速、灵敏，分离度好、专属性好，能有效地控制药品质量。

1仪器与试药

Agilent 7890N气相色谱仪：FID检测器，A.01.12.1色谱工作站；SGH-300高纯氢气发生器(北京东方精华科技苑科技有限公司)；色谱柱弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；梅特勒-托利多十万分之一电子分析天平；桉油精对照品(批号：110788-201105，含量99.9%，中国食品药品检定研究院)；薄荷脑对照品(批号：110728-200506，含量99.9%，中国食品药品检定研究院)；桉薄溶液(烟台绿叶动物保健品有限公司)，试剂：环己酮，无水乙醇均为色谱纯。

2色谱条件

色谱柱：ZB-WAX弹性石英毛细管柱 (30 m×0.25 mm，0.25 μm)；载气：N2，1.0 mL·mL-1；氢气，40 mL·mL-1；空气，400 mL·min-1；分流比：10∶1；进样口温度：250 ℃，检测器温度300 ℃；程序升温：初始80 ℃，每分钟5 ℃升至120 ℃，每分钟10 ℃升至180 ℃，保持3.5 min；内标法。

3试验方法与结果

3.1内标溶液的制备取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1 mL含12.5 mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。

3.2供试品溶液的制备精密量取本品1.0 mL，置10 mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0 mL，置10 mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0 mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

3.3对照品储备溶液的制备 精密称取桉油精对照品、薄荷脑对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含桉油精7.301 mg·mL-1及薄荷脑9.901 mg·mL-1的对照品储备液，备用。

3.4阴性对照溶液的制备取按处方中未加桉油精与薄荷脑的空白溶液，按“3.2”项下制备方法，制成阴性对照溶液。

3.5 线性关系的考察 分别精密移取0.2、0.5、1.0、1.5、3.5 mL对照品储备液于10 mL容量瓶中，加内标溶液1.0 mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，分别取1 μL进样，记录色谱图，以桉油精、薄荷脑与内标的峰面积比值为纵坐标(Y)，浓度(C)为横坐标(X)，分别绘制标准曲线，得回归方程分别为：Y桉油精=1.114 8X-0.001 6，R2=0.999 9，桉油精浓度在0.146～2.555 mg·mL-1范围内，线性关系良好；Y薄荷脑=1.134 7X+0.003 5，R2=0.999 8，薄荷脑浓度在0.198～3.465 mg·mL-1范围内，线性关系良好。

3.6精密度试验取桉油精浓度为0.730 mg·mL-1和薄荷脑浓度为0.990 mg·mL-1的对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积，分别计算2种成分与内标的峰面积比值(A/A内标)，桉油精、薄荷脑的RSD分别为0.24%和1.2%(n=6)。

3.7重复性试验取同一批样品，按样品测定项下的方法重复测定6次，结果桉油精、薄荷脑的RSD分别为0.36%、1.8%(n=6)。

3.8稳定性试验取同一批样品溶液，分别在室温下放置0、2、4、6、8、12 h后测定，结果按桉油精、薄荷脑的RSD分别为0.38%、1.7%，说明样品溶液在12 h内测定，结果稳定。

3.9加样回收率试验取已知含量的样品溶液9份，并加入适当的低、中、高对照品溶液，按样品测定法测定桉油精、薄荷脑含量，分别计算回收率，结果见表1。

表1　回收率测定结果( n=9，%)

结果表明，本方法的回收率较好，桉油精的回收率分别在99.4%～100.2%，薄荷脑的回收率在98.1%～100.7%之间，相对标准偏差分别为0.28%与0.86%，本测定方法能满足桉薄溶液中桉油精与薄荷脑的含量测定。

3.10定量限与检测限 采用 “信噪比法”来确定本研究的定量限和检测限，取线性标准溶液适量，采用加无水乙醇逐步稀释法进行稀释，当进样浓度为6.27、9.90 μg·mL-1时，取1 μL进样，连续进样3次，得到桉油精、内标、薄荷脑信噪比平均值分别接近10.0，可以以此浓度为定量限；继续稀释进样，当进样浓度为1.044、1.65 μg·mL-1，连续进样3次，得到桉油精、内标、薄荷脑信噪比平均值接近3.0，可以以此浓度为检测限。

3.11耐用性试验经不同色谱柱考察和溶液稳定性考察，以及柱温，进样口温度和检测器温度考察，表明本方法耐用性良好，适用于桉薄溶液中两组分的含量测定。

3.11.1色谱柱的影响 选用3根不同商品规格的色谱柱，测定同一批样品的含量，计算含量值的RSD%分别为1.3、1.7、1.6。结果表明，样品用不同的PEG色谱柱测定含量，桉油精、薄荷脑与内标均可有效分离，说明方法耐用性良好。

3.11.2柱温的影响[5，6]柱温对分离的影响主要为影响主峰的出峰时间，温度越高，主峰出峰时间越短，在第一阶段为80 ℃时，桉油精主峰桉油精与杂质峰能保证基线分离，第二阶段120 ℃时薄荷脑主峰与杂质峰能保证基线分离，且各温度下含量的RSD小于2.0%。

3.11.3进样口温度的影响[7，8]进样口温度高于柱温时，桉油主峰桉油精与杂质峰能够保证基线分离，薄荷脑与杂质分离良好，且各温度下含量的RSD小于2.0%。

3.11.4检测器温度的影响[10]检测器温度高于进样口温度时，桉油主峰桉油精与杂质峰能够保证基线分离，薄荷脑与杂质分离良好，且各温度下含量的RSD小于2.0%。

3.12样品含量测定结果 经过方法学验证，本含量测定方法操作简便、准确度高、重现性好，能更有效地控制产品质量。因此应用该方法对10批样品(批号：110701～110715)，按照前述方法采用内标法进行含量测定，结果见表2。

表2　样品含量测定结果

4讨论

4.1系统适应性试验在本试验气相色谱系统下，分别吸取样品测定用混合对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各1 μL，记录色谱图(见图1)。可见2种组分与内标物均能够较好地分离，阴性无干扰。该系统适应性结果见表3。

A

B 图3　空白对照色谱图 A.混合对照品溶液；B.供试品溶液

名称保留时间(min)柱效分离度桉油精4.2831098322.65环己酮5.5351489118.67薄荷脑11.5155223636.59

4.2内标物的选择曾试用过环己酮、萘、联苯、水杨酸甲酯等，因样品挥发性成分多，结果以环己酮的保留时间及分离效果最合适。

4.3柱温的选择 桉油精、环己酮和薄荷脑的沸点相差比较大，柱温低时，薄荷脑的保留时间过长，柱温高时，桉油精与杂质不能有效分离，经采用两段程序升温方式能满足两种成分的同时分析。

4.4由10批次产品测定结果，暂定本品的含量限度为：本品每1 mL含桉油以桉油精(C10H18O)计，不得少于84.0 mg，含薄荷脑(C10H20O)不得少于88.0 mg。

参考文献：

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