瑶药暖骨风薄层色谱检测方法研究

瑶药暖骨风薄层色谱检测方法研究

刘元1,2，文志云1,2，梁威1,2

(1.广西中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022)

摘要：目的建立瑶药暖骨风的薄层色谱鉴别。方法瑶药暖骨风经甲醇提取后，以冰乙酸∶水(4∶6)为展开剂，对瑶药暖骨风进行薄层鉴别。结果在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，色谱清晰，无杂质斑点干扰。结论本方法专属性强，可更好地控制药材质量。

关键词：瑶药；暖骨风；薄层色谱鉴别

基金项目：广西科技攻关项目(No.桂科攻1346008-7)；广西卫医疗卫生适宜技术研究与开发课题(No.S201308-06);广西瑶族习用药材质量评价与标准研究项目(No.MZY2012025)

作者简介：刘元，女，主任药师，研究方向：中药药理学研究与新药开发，E-mail:Liuyuan0821@vip.163.com

中图分类号：R927.1文献标识码：A

Experimental research on TLC identification of Yao medicine Nuangufeng

LIUYuan1,2，WENZhi-yun1,2，LIANGWei1,2

(1.GuangxiKeyLaboratoryofTraditionalChineseMedicineQualityStandards,Nanning530022，China;

2.GuangxiInstituteforChineseMedicine&PharmaceuticalScience,Nanning530022，China)

Abstract：ObjectiveTo establish a TLC method for the identification of Nuangufeng.MethodsExtraction with methanol from Nuangufeng,glacial acetic acid-water (4∶6)as developing solvent and identified by TLC.ResultsWith the control medicinal chromatography corresponding in position on the same color spots,chromatography was clear,and had no interference.ConclusionThis method was specific,can preferably control the quality of medicinal materials.

Key words:Yao medicine;Nuangufeng;TLC

瑶药暖骨风系瑞香科瑞香属植物毛瑞香[DaphnekiusianaMiq.var.atrocaulis(Rehd.)F.Maekawa]的全株，别名一身保暖，具有祛风除湿、调经止痛、解毒之功效，民间主要用于风湿骨痛、手足麻木、月经不调、闭经、产后风湿、跌打损伤、骨折、脱臼[1,2]。本品历代本草未见记载，现时散见于我国一些中草药专著和南方地区中草药手册或植物学专著中，如《广西药用植物名录》、《贵州中草药名录》、《全国中草药汇编》等。目前国内对瑶药暖骨风的药材标准研究基本空白，为了保护我区特色药材资源，建立可控瑶药暖骨风质量标准，在瑶药质量评估、监管等方面，为大众用药安全提供技术标准，本试验建立了瑶药暖骨风的薄层色谱鉴别(TLC)方法。

研究表明瑞香属植物中发现的60多种物质具有不同作用的生物活性。相关的药理学和毒理学研究表明 ，这些活性物质具有抗HIV、白血病、血栓形成和动脉粥样硬化、抑制铜绿假单孢菌、细菌和疟原虫感染等作用。说明这是一个具有开发前途的植物类群[3]。而根据文献报道[4,5]，暖骨风的全草中含有降香萜醇乙酸酯、β-谷甾醇、胡萝卜苷、伞型花内酯、7-甲氧基-8-羟基香豆素、西瑞香素、芹菜素、木犀草素、对羟基苯甲酸乙酯等。其中西瑞香素为双香豆素类衍生物，在抗肿瘤、抗炎、抗真菌、抗病毒、抗焦虑等诸多方面均有显著的药理作用[6]。因此选择西瑞香素作为毛瑞香质量控制是比较可行的。

1仪器与材料

1.1仪器YOKO-ZS紫外分析摄影仪；武汉药科YOKO-BD薄层电动点样仪；硅胶G薄层预制板；浙江台州聚酰胺薄膜。

1.2材料暖骨风对照药材(批号:130206，产地：金秀，由本院中药所黄云峰同志采集，植物腊叶标本经广西壮族自治区食品药品检验所鉴定)；西瑞香素对照品(批号:111758-201101)；瑶药暖骨风样品(批号：080405、100812、120725、121220，由本课题组在金秀、平南采集)。

2方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1供试品溶液取暖骨风药材粉末1 g，加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.1.2对照药材溶液取暖骨风对照药材1 g，加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。

2.1.3对照品溶液取西瑞香素对照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2薄层条件的优化

2.2.1薄层板的选择及展开剂的考察和比较考察了不同的薄层板：硅胶G薄层板、聚酰胺薄膜，结果采用硅胶G薄层板可以把暖骨风药材中的西瑞香素进行分离，而采用聚酰胺薄膜，不仅可以把暖骨风药材中的西瑞香进行分离，而且还可以把暖骨风药材中的其他斑点进行分离，从而可提高暖骨风药材定性鉴别的专属性和可控性；不同的展开剂：三氯甲烷-甲醇(20∶1)、环己烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶20∶1)、冰醋酸-水(5∶5)、冰醋酸-水(4∶6)，结果采用环己烷-乙酸乙酯为展开系统，仅显现一排斑点，采用三氯甲烷-甲醇、冰醋酸-水为展开系统，显现两排斑点，但是冰醋酸-水毒性较小，因此采用冰醋酸-水为展开系统，考察不同比例，以4∶6较为合适。所以暖骨风药材的鉴别我们采用分别点于同一聚酰胺薄膜上，以冰醋酸-水(4∶6)为展开剂，展开，取出，晾干。

图1　暖骨风TLC摸索1 1.暖骨风(批号:120725，金秀)；2.暖骨风(批号:121220，金秀)；3.暖骨风(批号:130206，金秀，对照药材)；4.西瑞香素对照品(批号:111758-201101) 色谱条件：①硅胶G薄层预制板(青岛海洋化工厂，规格：10 cm×10 cm)；②圆点状点样，点样量：2 μL；③温度：27 ℃；相对湿度：75%；④展开剂：三氯甲烷-甲醇(20∶1)；⑤ 定位：在紫外灯(365 nm)下检视

图2　暖骨风TLC摸索2 1.暖骨风(批号:120725，金秀)；2.暖骨风(批号:121220，金秀)；3.暖骨风(批号:130206，金秀，对照药材)；4.西瑞香素对照品(批号:111758-201101) 色谱条件：① 硅胶G薄层预制板(青岛海洋化工厂，规格：10 cm×10 cm)；② 圆点状点样，点样量：2 μL；③ 温度：27 ℃；相对湿度：75%； ④ 展开剂：环己烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶20∶1)；⑤ 定位：在紫外灯(365 nm)下检视

图3　暖骨风TLC摸索3 1.暖骨风(批号:120725，金秀)；2.暖骨风(批号:121220，金秀)；3.暖骨风(批号:130206，金秀，对照药材)；4.西瑞香素对照品(批号:111758-201101) 色谱条件：①聚酰胺薄层板(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂，规格：10 cm×10 cm)；②圆点状点样，点样量：2 μL；③温度：27 ℃；相对湿度：75%；④展开剂：冰醋酸-水(5∶5)；⑤定位：在紫外灯(365 nm)下检视

图4　暖骨风TLC摸索4 1.暖骨风(批号:120725，金秀)；2.暖骨风(批号:121220，金秀)；3.暖骨风(批号:130206，金秀，对照药材)；4.西瑞香素对照品(批号:111758-201101) 色谱条件：①聚酰胺薄层板(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂，规格：10 cm×10 cm)；②圆点状点样，点样量：2 μL；③温度：27 ℃；相对湿度：75%；④展开剂：冰醋酸-水(4∶6)；⑤定位：在紫外灯(365 nm)下检视

2.2.2点样量的比较供试品溶液及对照药材溶液在点样量为1 μL时，斑点有时不清晰，超过3 μL时，斑点拖尾，分离效果差，1～3 μL斑点均清晰，分离较好；西瑞香素溶液的点样量1 μL，结果分离效果明显，斑点清晰。故确定供试品溶液及对照药材溶液在点样量为1～3 μL，西瑞香素溶液的点样量为1 μL。

2.2.3检视条件的选择在日光条件下检视：供试品溶液、对照药材溶液及对照品溶液均无展开斑点，喷以2%三氯化铝甲醇溶液，只显示一排与西瑞香素相对应的斑点；在紫外条件下，254 nm处也均无展开斑点，365 nm处供试品溶液与对照药材溶液、西瑞香素对照品溶液对应的位置上显相同颜色的斑点，且斑点清晰，故选择紫外光源365 nm处作为检视条件。

2.2.4层析条件的验证薄层板：聚酰胺薄膜；点样：点状点样，供试品溶液及对照药材溶液点样量为1～3 μL，西瑞香素溶液的点样量为1 μL；展开剂：冰醋酸-水(4∶6)为展开剂。上行展开8 cm。检视光源：紫外光365 nm。结果如图l。供试品色谱中，在与对照药材色谱和西瑞香素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝色荧光斑点(Rf值分别为0.38、0.72)。

图5　暖骨风TLC鉴别 1.暖骨风(批号:080405，金秀)；2.暖骨风(批号:090311，金秀)；3.暖骨风(批号:100812，平南)；4.暖骨风(批号:120725，金秀)；5.暖骨风(批号:121220，金秀)；6.暖骨风(批号:130206，金秀，对照药材)；7.西瑞香素对照品(批号:111758-201101)

2.2.5系统适应性试验取供试品溶液及对照药材溶液1～3 μL，西瑞香素溶液1 μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以冰醋酸-水(4:6)为展开剂，放置于不同温度(10、25、35 ℃)、湿度(30%、70%、90%)展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。结果展开温度为10、25、35 ℃时，供试品色谱中，在与对照药材色谱和西瑞香素对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点；展开湿度为30%、70%、90%时展开结果亦同。表明不同温度、湿度展开条件对本试验建立的方法无明显影响。

3讨论

瑞香属部分种类的俗名多，异种同名，同种异名现象严重，这阻碍了瑞香属植物的种质资源研究和开发利用。据戴斌及罗金裕的报道[7～9]，本品瑶药俗称“暖骨风”，来源为瑞香科瑞香属植物毛瑞香，其拉丁名为DaphneodoraThunb.var.atrocaulisRehd.，方鼎老师认为其拉丁名为一个异名(不正确的名称)，应按《中国植物志》52卷第1分册380页修订毛瑞香拉丁名为DaphnekiusianaMiq.var.atrocaulis(Rehd.)F.Maekawa[10]。因此本试验人员首次对俗称 “暖骨风”的药材为毛瑞香(瑞香科瑞香属植物毛瑞香DaphneodoraThunb.var.atrocaulisRehd.)药材拉丁学名提出修订，应为Daphnekiusianavar.atrocaulis(Rehd.)F.Maekawa.，确保了用药安全有效。

本试验建立的瑶药暖骨风薄层色谱检测方法，在与西瑞香素对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(Rf值分别为0.38、0.72)，而且经过系统适应性试验，不同温度、湿度展开条件对本试验建立的方法无明显影响。本方法专属性强，可更好地控制药材质量。

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