蜜炙桑白皮对经方泻白散止咳平喘作用的影响

蜜炙桑白皮对经方泻白散止咳平喘作用的影响

徐霞1，隋在云2，王爱洁2

(1.山东省胸科医院，山东 济南 250014；2.山东省中医药研究院，山东 济南 250014)

摘要：目的蜜炙前后桑白皮对经方泻白散止咳平喘作用的影响。方法KM小鼠随机分为模型对照组、可待因(4.68 mg·kg-1)组、泻白散生品和蜜炙0.57、1.14、2.28、4.55、9.10、18.20 g·kg-1剂量组,连续10 d灌胃给药，采用浓氨水引咳实验检测引咳潜伏期、2 min内咳嗽次数；Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、地塞米松(0.000 4 g·kg-1)组、泻白散生品和蜜炙3.15、9.45 g·kg-1剂量组，造模大鼠于第1、7天腹腔注射卵蛋白混悬液1 mL致敏。第15天起，每天激发造模，共5 d。第20天，记录大鼠10 min内出现Ⅱ级哮喘的潜伏期，采用酶联免疫吸附法测定血清中脂质过氧化物(LPO)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)的含量。结果泻白散含生品桑白皮4.55、9.10、18.20 g·kg-1剂量组、含蜜炙桑白皮各剂量组均可显著延长咳嗽潜伏期，减少咳嗽次数。泻白散生品、蜜炙高剂量组均显著降低哮喘大鼠血清脂质过氧化物(LPO)、白细胞介素-4(IL-4)含量，升高了血清干扰素-γ(IFN-γ)。结论蜜炙组较生品组作用效果更好。提示清除细胞毒性过氧化物，调节免疫，增强抗病毒能力可能是泻白散平喘作用的药理学机理。

关键词：桑白皮；泻白散；炮制；止咳平喘

基金项目：山东省中医药科技发展计划项目(No.2013-223)

作者简介：徐霞，女，副主任药师，研究方向：中药制剂及鉴定，E-mail:15020017677@163.com

通讯作者:隋在云，女，硕士研究生，研究员，研究方向：中药药理毒理的物质基础研究，Tel:13793131156，E-mail：zy_505@163.com

中图分类号：文献标识码：A

Effect ofCortexMoriwith hwey processing on relieving cough and asthma activities

of classical prescriptions Xiebaisan

XUXia1,SUIZai-yun2,WANGAi-jie2

(1.ShandongChestHospital,Jinan250014,China；2.ShandongAcademy

ofChineseMedicine,Jinan250014,China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the relieving cough and asthma activities of Cortex Mori before and after hwey processing.MethodsKM mice were randomly divided into model control group,positive control group,codeine(4.68 mg·kg-1)group,the crude and hwey processed Cortex Mori 0.39,0.78,1.56,3.12,6.24 g·kg-1group,giving drugs 10 days.The model of cough induced by concentrated ammonia water was used to observe the cough latent phase and times in 2 min.Wistar rats were randomly divided into blank group,model control group,dexamethasone(0.000 4 g·kg-1)group,the crude and hwey processed Cortex Mori 3.15，9.45 g·kg-1 group.Model rats were allergized by injecting egg albumin for intraperitoneal injection at 1st and 7th day.From 15th day,to stimulate making model,all 5 days.The incubation periods of Ⅱgrade asthmatic within 10 min in rats were recorded.The contents of LPO,IL-4 and IFN-γ in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay.ResultsCompared with the model group,the latent phase was significantly longer and the cough times per two minutes was significantly reduced in Xiebaisan with crude Cortex Mori 4.55,9.10,18.20 g·kg-1 and hwey processed Cortex Mori groups.The contents of LPO,IL-4 in serum of crude Xiebaisan and hwey processed Cortex Mori high dose groups were significantly reduced,and the contents of IFN-γ were increased.ConclusionThe results of hwey processed groups were better than crude groups.The results prompted that cleaning cytotoxicity peroxides,adjusting immunization and reinforcing anti-virus capabilities may be the pharmacology mechanism of relieving cough and asthma activities.

Key words:CortexMori;Xiebaisan;Processing;Relieving cough and asthma

泻白散出自《小儿药证直诀》，由地骨皮、桑白皮、甘草三味药组成，具有清泻肺热，止咳平喘之功，主治以咳嗽、甚则气急欲喘、舌红苔黄等为表现的肺有伏火之咳喘，现代主要用于支气管炎、肺炎初期、百日咳等证属肺有伏火者。现代研究也表明其有解热、抗炎、镇咳等作用。方中桑白皮为桑科植物桑MorusalbaL.的干燥根皮[1，2]。蜜炙桑白皮是桑白皮的蜜炙加工炮制品，方法是取炼蜜，加适量开水稀释，淋入桑白皮丝中拌匀，闷润，置炒制容器内，用文火加热，炒制深黄色、不黏手，取出晾凉。每100 kg桑白皮丝，用炼蜜25 kg[3]。两者均是临床常用中药且应用广泛，生品长于利尿，蜜炙之后止咳平喘作用增强之说也是从古流传至今，但其理论依据还未十分清晰，蜜炙前后的桑白皮纳入成方中应用的药效比较也是鲜有研究。本文对经方泻白散中分别加入生品桑白皮或蜜炙桑白皮后的止咳化痰作用进行了量效研究,并进行比较分析,以期为桑白皮和泻白散的临床应用提供科学的理论依据。

1材料与仪器

1.1药物与试剂泻白散生品(含生品桑白皮)、泻白散蜜炙(含蜜炙桑白皮)均由山东省中医药研究院中药炮制室提供。原药浓度：1 g·mL-1(桑白皮临床用量按成人12 g·d-1计换算为小鼠的等效剂量)。0.9%氯化钠注射液(山东齐都药业有限公司，批号：1A11102903)；氨水(莱阳市康德化工有限公司，批号：20080620)；复方磷酸可待因溶液(南昌立健药业有限公司，批号：K1111026)；卵清白蛋白(Sigma公司进口分装，批号：A5253)；地塞米松(辰欣药业股份有限公司，批号：1205166412)；大鼠脂质过氧化物(LPO)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)ELISA试剂盒(IBL公司，批号：HG35084、HG01036、HG01683)。

1.2动物昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半；Wistar大鼠70只，150～200 g，雄性，均购于山东大学实验动物中心，许可证号：SCXK(鲁)20090001。

1.3仪器GB303电子天平(Mettler-Totado公司)；UV-2100紫外分光光度计(上海合利仪器有限公司)；YLS-8A多功能诱咳引喘仪(山东省医学科学院设备站)；xMark 微孔板分光光度计(美国Bio-Rad公司)。

2实验方法与结果

2.1炮制对经方泻白散止咳作用的影响

2.1.1动物分组与给药昆明小鼠140只，SPF级，体重18～22 g，雌雄各半,随机分为模型对照组、可待因(4.68 mg·kg-1)组(在前期预实验基础上，为了探讨桑白皮止咳作用的最低起效量和量效关系，以1为等效剂量，按倍比递减递增关系设计了6个剂量)、泻白散生品1/8、1/4、1/2、1、2、4剂量(0.57、1.14、2.28、4.55、9.10、18.20 g·kg-1)组、泻白散蜜炙1/8、1/4、1/2、1、2、4剂量(0.57、1.14、2.28、4.55、9.10、18.20 g·kg-1)组，共14组,每组10只。各给药组灌胃给予受试样品，给药体积为20 mL·kg-1，模型对照组口服同体积生理盐水，每天1次,连续10 d。

2.1.2实验方法末次给药1 h后，将小鼠按组交替逐只放入YLS-8A 多功能诱咳引喘仪的动物箱内，喷入25%氨水，激发小鼠咳嗽，以小鼠同时出现腹肌收缩、缩胸、张大嘴(咳声有无均可)作为咳嗽标准，记录引咳潜伏期(喷雾开始至出现咳嗽的时间)和2 min内小鼠咳嗽的次数[4]。

2.1.4实验结果结果见表1和图1、2。

表1　炮制对经方泻白散止咳作用的影响 ± s， n=10)

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001

图1　引咳潜伏期

图2　2 min内小鼠咳嗽次数

表1结果显示，与模型对照组比较，阳性药(可待因)组可以明显延长浓氨水致咳小鼠的咳嗽潜伏期，并明显减少咳嗽次数。泻白散含生品桑白皮1、2、4倍剂量，含蜜炙桑白皮各剂量组都可以延长咳嗽潜伏期，减少咳嗽小鼠的咳嗽次数，与模型对照组相比，结果有显著性差异。图1、2表明用含桑白皮蜜炙品的泻白散止咳药效强于用生品的。实验表明泻白散含生品、蜜炙桑白皮都有较为显著的止咳作用，且蜜炙效果更好。

2.2炮制对经方泻白散平喘作用的影响

2.2.1动物分组与给药将70只大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照(地塞米松0.000 4 g·kg-1)组、泻白散生品(3.15 g·kg-1)组、泻白散生品(9.45 g·kg-1)组、泻白散蜜炙(3.15 g·kg-1)组、泻白散蜜炙(9.45 g·kg-1)，共7组,每组10只。各给药组灌胃给予受试样品，给药体积为20 mL·kg-1，空白、模型对照组口服同体积生理盐水。

2.2.2实验方法造模大鼠于第1、7天腹腔注射卵蛋白混悬液1 mL (卵蛋白100 mg、氢氧化铝100 mg)致敏。第15天起，各组在给药1 h后开始激发造模，将大鼠按组交替逐只放入多功能诱咳引喘仪的动物箱内，喷入1%卵蛋白生理盐水，超声雾化吸入激发哮喘。每天1次，共5 d。每次数秒至数分钟，到大鼠开始出现呼吸困难、呛咳、点头呼吸、甚至腹肌痉挛等症状为止。第20天，同激发时方法，记录大鼠10 min内出现Ⅱ级哮喘(呼吸困难和咳嗽反应)的潜伏期作为统计指标。

2.2.3血清中LPO、IL-4和 IFN-γ的含量检测末次激发24 h后，以10%水合氯醛(10 mL·kg-1)腹腔注射麻醉动物，固定，打开并暴露胸腔，心脏取血4 mL，低温下离心，取血清。按照试剂盒说明书，采用酶联免疫吸附法测定血清中LPO、IL-4和 IFN-γ的含量。

2.2.5实验结果泻白散(含生熟桑白皮)对哮喘大鼠血清LPO、IL-4和 IFN-γ含量的影响，结果见表2。

由表2结果可知，与空白组相比，模型组大鼠各项指标均有显著变化。与模型组相比，阳性药、泻白散生品、蜜炙高剂量组均显著降低了血清LPO、IL-4含量，升高了血清IFN-γ，并具有统计学差异。与相同剂量的泻白散生品相比，泻白散蜜炙组大鼠血清IL-4含量显著降低(P<0.05)，血清IFN-γ含量显著升高增长(P<0.05)。提示清除细胞毒性过氧化物，调节免疫，增强抗病毒能力可能是泻白散平喘作用的药理机理，且蜜炙组较生品组作用效果更好。

表2　泻白散(含生熟桑白皮)对哮喘大鼠血清LPO、IL-4

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；与同剂量泻白散生品组比较，△P<0.05

3讨论

桑白皮和蜜炙桑白皮均是临床常用中药且应用广泛。明朝《医学入门》首次记载了桑白皮生熟异用理论，“利水生用，咳嗽蜜蒸或炒”[5]，此后的很多医籍对生熟异用及炮炙前后的作用也有明确记载，《中药临床生用与制用》归纳指出“桑白皮饮片分为生、炒、蜜炙3种：生药味甘性寒，以泻肺平喘力胜，多用于水肿溲少，如五皮散；炒药味甘，性寒偏平，以降气平喘力胜，多用于水饮停肺，如桑白皮散；蜜炙药味甘，性寒偏润，以润肺清热，止咳平喘力强，多用于肺热咳喘，如泻白散”[6]。目前，关于桑白皮药理作用的研究日益增多，但对于桑白皮蜜炙前后药理作用变化的研究报道较少，纳入复方研究的更少。

LPO是机体不饱和脂肪酸在氧自由基作用下形成的细胞毒性过氧化物。IL-4由Th0细胞产生，可诱发Th0细胞向Th2细胞转化。IL-4是B细胞的生长因子，其作用在B淋巴细胞上，刺激B淋巴细胞产生IgE；IL-4还可通过B细胞对T细胞的抗原提呈作用，促进IgE介导体液免疫应答，也就是由IgM转变为IgE，从而诱导支气管哮喘反应发生[7,8]。IFN-γ由特异性抗原刺激T淋巴细胞产生，为机体主要的巨噬细胞刺激因子，

对机体的免疫反应有多方面的调节作用，可在mRNA的转录水平遏制IL-4的表达，参与诱导Th0细胞向Th1细胞的分化过程、抑制IL-4生成间接拮抗Th2细胞的功能[9，10]。过多的IL-4或缺乏IFN-γ可以引起IgE反应，相反，增加IFN-γ或降低IL-4水平可抑制上述过程。因此，检测 IL-4 和 IFN-γ 的含量，可知道活化的肥大细胞和免疫调节的活力。

本实验以含桑白皮或蜜炙桑白皮的经方泻白散为研究对象，采用小鼠浓氨水引咳和大鼠哮喘模型平喘实验，研究了两者止咳平喘方面的量效关系并比较两者的作用强弱。实验结果表明含桑白皮生品或蜜炙品的泻白散都有较为显著的止咳作用，均能减轻气道炎症反应，改善哮喘症状，含蜜炙品的泻白散效果更显著。实验还提示清除细胞毒性过氧化物，调节免疫，增强抗病毒能力可能是其平喘作用的药理机理。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:280.

[2] 王瑾，张会敏，石俊英.桑白皮黄酮类化学成分研究进展[J].齐鲁药事，2012，31(7)：420-422.

[3] 龚千峰.中药炮制学[M].北京:中国中医药出版社,2007:243.

[4] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海:上海科学技术出版社,2006:428-448.

[5] 李梴.医学入门[M].北京:人民卫生出版社,2006:188.

[6] 陆拯.中药临床生用与制用[M].北京:人民卫生出版社,1983:149-150.

[7] 雷永红.支气管哮喘发病机制中细胞因子作用的研究[J].九江学院学报(自然科学版)，2013,28(1)：72-74.

[8] Lloyd CM,Hessel EM.Functions of T cells in asthma:more than just T(H)2 cells [J].Nat Rev Immunol,2010,10(12):838-848.

[9] 吕慧,刘建忠.哮喘儿童血清变应原特异性IgE检测与分布特征[J].中国妇幼保健,2011,26(5):686-687.

[10] Poon AH,Eidelman DH,Martin JG,et al.Pathogenesis of severe asthma[J].Clin Exp Allergy,2012,42(5):625-637.