5种洗剂类医疗机构制剂微生物限度检查方法验证

5种洗剂类医疗机构制剂微生物限度检查方法验证

刘广桢，张冕，胡文红，国明

(山东省食品药品检验研究院，山东 济南 250101)

摘要：目的建立5种洗剂类医疗机构制剂微生物限度检查法。方法细菌、真菌和酵母菌计数方法的验证分别采用平皿法、培养基稀释法和薄膜过滤法；控制菌检查法的验证分别采用直接接种法、培养基稀释法和薄膜过滤法。结果1种洗剂的细菌、真菌和酵母菌计数可采用培养基稀释法，控制菌检查可采用直接接种法。另4种洗剂的细菌、真菌和酵母菌计数和控制菌检查均需采用薄膜过滤法。结论5种洗剂类医疗机构制剂微生物限度检查法均通过验证。

关键词：医疗机构制剂；洗剂；微生物限度检查；方法验证

作者简介：刘广桢，男，主管药师，研究方向：药品检验，E-mail：l_guangzhen@sina.com

中图分类号：R927.1文献标识码：A

Validation of microbial limit test for 5 kinds of hospital preparation with lotions

LIUGuang-zhen,ZHANGMian,HUWen-hong,GUOMing

(ShandongInstituteforFoodandDrugControl,Jinan250101,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method of microbial limit test for 5 kinds of hospital preparation with lotions.MethodsThe validation on plate count method,culture medium diluting method and membrane filtration method was conducted in accordance with bacterium count,total combined molds and yeasts count.The validation on routine method,culture medium diluting method and membrane filtration method was conducted in accordance with absence of specified microorganisms.ResultsThe one kind can be tested with culture medium diluting method on bacterium count,total combined molds and yeasts count,and can be tested with routine method on absence of specified microorganisms.The other 4 kinds can be tested with membrane filtration method on bacterium count,total combined molds and yeasts count,and absence of specified microorganisms.ConclusionThe validation results of microbial limit tests of 5 kinds of hospital preparation with lotions met the requirement.

Key words:Hospital preparation;Lotions;Microbial limit test;Validation of method

医疗机构制剂指医疗机构临床需要而市场上没有供应的品种，具有用量小、贮存期短、市场供应缺乏、临床必需等特性。医疗机构制剂须经药品监督管理部门批准后方可配制，并须按照规定进行质量检验，包括有效性和安全性指标的检验。其中微生物限度检查是医疗机构制剂一项重要的安全性指标。

由于医疗机构制剂种类比较复杂，药效成分经常具有抑菌作用，其中溶液型制剂中又经常添加抑菌剂防止微生物污染。所以常用的微生物限度检查方法(平皿法)不完全适用于医疗机构制剂的微生物限度检查，有必要对医疗机构制剂中的每个品种的微生物限度检查方法进行验证，确保其采用的方法适合于微生物限度检查的要求。本文选取了5种常用的溶液型洗剂类医疗机构制剂，包括1种中药制剂和4种化学药制剂，参照有关文献[1～3]，分别对其不同的微生物限度检查法进行了验证，确定了最佳的微生物限度检查方法。

1仪器与材料

1.1仪器HFsafe-1200型生物安全柜(上海力申科学仪器有限公司)；Equinox集菌仪(默克化工技术有限公司)；CH-4103型恒温培养箱(伊孚森生物技术有限公司)。

1.2样品复方伸筋洗剂、苯酚樟脑洗剂、复方酮康唑洗剂、止痒洗剂和复方间苯二酚洗剂均为山东省内各家医疗机构提供。

1.3培养基营养肉汤培养基(批号：130717)和营养琼脂培养基(批号：140514)均购于北京三药科技开发公司；改良马丁培养基(批号：3102637)、玫瑰红钠琼脂培养基(批号：3102345)、胆盐乳糖培养基(批号：3102534)和pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(批号：3103696)均购于广东环凯微生物科技有限公司。

1.4菌种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、白色念珠菌、铜绿假单胞菌0代冻干菌种均购于中国食品药品检定研究院。

2方法[1～3]

2.1菌液的制备按照《中国药典》2010年版附录要求制备。

2.2供试液的制备取本品10 mL，加pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 mL，振摇，制成1∶10的供试液。

2.3细菌计数、真菌和酵母菌计数

2.3.1检查方法

2.3.1.1平皿法取1∶10的供试液1 mL，注入平皿中，加入培养基，按规定进行培养，计数。

2.3.1.2培养基稀释法取1∶10的供试液1 mL，分别注入5个平皿中，每皿中0.2 mL，加入培养基，按规定进行培养，计数。

2.3.1.3薄膜过滤法取1∶10的供试液1 mL，用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每次100 mL/膜，共3次，取出滤膜，菌面朝上贴于培养基平板上，按规定进行培养，计数。

2.3.2方法验证按《中国药典》2010年版采用平皿法、培养基稀释法和薄膜过滤法，用规定的5株菌逐一进行验证，每个供试品均进行3次独立的平行试验，各菌回收率均应大于70%。

2.4控制菌检查

2.4.1检查方法

2.4.1.1直接接种法取1∶10的供试液10 mL，加至增菌培养基100 mL中，按规定进行培养，观察结果。

2.4.1.2培养基稀释法取1∶10的供试液10 mL，加至增菌培养基200 mL中，按规定进行培养，观察结果。

2.4.1.3薄膜过滤法取1∶10的供试液10 mL，用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每次100 mL/膜，共3次，加入增菌培养基100 mL，按规定进行培养，观察结果。

2.4.2方法验证按《中国药典》2010年版采用直接接种法、培养基稀释法和薄膜过滤法，用规定的2株菌分别进行验证，验证组应检出相应控制菌。

3结果

细菌计数、真菌和酵母菌计数验证结果见表1。控制菌检查验证结果见表2。

4讨论

由于医疗机构制剂经常具有抑菌作用，因此需要采用适宜的方法消除或降低其抑菌作用，使其对供试品中污染菌的生长无抑制作用或其抑制作用可以忽略不计，从而保证微生物限度检查的准确性。建立验证的方法时，应在科学性的基础上，坚持简便易行的原则，避免不必要的浪费。微生物限度检查法由简到繁的顺序为平皿法或直接接种法、培养基稀释法和薄膜过滤法。

本次试验中复方伸筋洗剂含有地黄、川芎、红花和荆芥等中药材，有一定的抑菌作用，细菌计数采用平皿法有干扰，但其抑菌作用较弱可采用培养基稀释法就可消除抑菌活性。本次试验中樟脑苯酚洗剂(含樟脑和苯酚)、复方酮康唑洗剂(含酮康唑、苯甲酸、水杨酸)、止痒洗剂(含水杨酸、薄荷脑和苯酚)、复方间苯二酚洗剂(含间苯二酚、硼酸和苯酚)为抑菌作用较强的品种，细菌计数、真菌和酵母菌计数采用平皿法和培养基稀释法均有干扰，需要采用薄膜过滤法才能消除抑菌活性[4～6]。

表1　细菌计数、真菌和酵母菌计数验证的回收率(%)

表2　控制菌验证的结果

控制菌检查中因有增菌培养，很多在细菌计数时有抑菌的品种(如复方伸筋洗剂)，在控制菌检查中采用直接接种法就能检出试验菌。对抑菌活性较强的品种(如樟脑苯酚洗剂、复方酮康唑洗剂、止痒洗剂、复方间苯二酚洗剂)，采用直接接种法和培养基稀释法均有干扰，需要采用薄膜过滤法才能取得好的效果[7～10]。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010 年版(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录79-88．

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010 年版(二部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录107-116．

[3] 中国药品生物制品检定所，中国药品检验总所．中国药品检验标准操作规范(2010年版)[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：351-407．

[4] 刘广桢，胡文红，徐晓洁，等.复方黄连素片微生物限度检查法的建立及检验结果分析[J]．药物分析杂志，2014，34(1)：64-70.

[5] 王似锦，刘文杰，牛振东，等.金匮肾气丸微生物限度检查法的建立及检验结果分析[J]．药物分析杂志，2012，32(2)：360-364.

[6] 万进，马永贵，王文清，等.3种外用医院制剂微生物限度检查方法的建立[J]．中国医院药学杂志，2011，31(22)：1899-1901.

[7] 李湘平，李汶，徐文敏，等.十种外用医院制剂的微生物限度检查法验证[J]．中国药品标准，2012，13(4)：290-292.

[8] 孙莺，郭朝辉，宋京都.8种医院制剂微生物限度检查方法验证[J]．中国药事，2014，28(8)：839-842.

[9] 宾驰，颜栋林.4种医院制剂微生物限度检查方法验证[J]．中国医药指南，2011，9(22)：226-227.

[10] 杨育林，吉莹洁.莫匹罗星软膏微生物限度检查的方法学验证[J]．药学研究，2014，33(10)：592-593，606.