软性角膜接触镜中盐酸左氧氟沙星饱和吸附量的测定

李　洁，李　翔

软性角膜接触镜中盐酸左氧氟沙星饱和吸附量的测定

李洁1*，李翔2

[摘要]目的建立高效液相色谱法测定软性角膜接触镜中盐酸左氧氟沙星的饱和吸附量。方法色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相：三乙胺溶液-甲醇(75∶25)；流速：1.0 mL/min；检测波长：294 nm；柱温：25 ℃。结果盐酸左氧氟沙星的线性范围为1.200~24.00 μg/mL，回收率为100.30%，RSD为1.02% (n=6)。结论该方法操作简单、快速准确，可用于评价软性角膜接触镜中盐酸左氧氟沙星的饱和吸附量。

[关键词]盐酸左氧氟沙星；含量测定；饱和吸附量；高效液相色谱法

[Abstract]ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of saturated adsorption of levofloxacin hydrochloride eye drops in hydrogel contact lenses.MethodsAgilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm) chromatographic column was used and the column temperature was 25 ℃,the mobile phase consisted of triethylamine solution-water (75∶25) and the flow rate was 1.0 mL/min,the detective wavelength was 294 nm.ResultsThe liner range of levofloxacin hydrochloride was at 1.200~24.00 μg/mL,and the average recovery rate was 100.30% with RSD was 1.02% (n=6).ConclusionThe method was simple,accurate and reliable,and it can be used to evaluate the saturated adsorption of levofloxacin hydrochloride eye drops in hydrogel contact lenses.

收稿日期：2014-12-27

基金项目：东莞市科技计划医疗卫生类科研一般项目

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201510025

Determination of saturated adsorption of levofloxacin hydrochloride eye drops in hydrogel contact lenses by HPLCLI Jie1*,LI Xiang2(1.Medical Devices Technical Review Center,China Food and Drug Administration,Beijing 100044,China;2.Department of Pharmacy,First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Key words：Levofloxacin hydrochloride;Content determination;Saturated adsorption;HPLC

0引言

盐酸左氧氟沙星滴眼液是一种新型的喹诺酮类药物，主要成分为盐酸左氧氟沙星，是氧氟沙星的左旋体，其抗菌活性约为氧氟沙星的2倍，具有抗菌谱广、抗菌作用强的特点，对大多数肠杆菌科细菌，如大肠埃希菌、克雷伯菌属、沙雷氏菌属、变形杆菌属、志贺菌属、沙门氏菌属、枸橼酸杆菌、不动杆菌属以及铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、淋球菌等革兰阴性细菌有较强的抗菌活性。临床适用于细菌性结膜炎、角膜炎、角膜溃疡、泪囊炎、术后感染等眼部感染[1]。现在主要作为治疗由流感嗜血杆菌和金葡菌感染所致的细菌性结膜炎的首选药，可有效改善患者眼部异物感、灼烧感、刺痛、流泪等症状。

目前，尚未见滴眼液或软性角膜接触镜生产企业给出在配戴软性角膜接触镜时滴眼液的使用方法和饱和吸附量数据。本试验中将滴入足量盐酸左氧氟沙星滴眼液的软性角膜接触镜与义眼接触，以模拟软性角膜接触镜的配戴过程，可以较科学地考察水凝胶软性角膜接触镜中盐酸左氧氟沙星滴眼液的饱和吸附量，期望可以为药物的合理使用提供依据。

1仪器与试药

1.1仪器Agilent 1200型高效液相色谱仪(包括四元泵、VWD检测器、自动进样器、ChemStation化学工作站)；Mettler AE240电子天平(梅特勒公司)。

1.2试药盐酸左氧氟沙星对照品(中国食品药品检定研究院，批号：130455-201106，含量100%)；盐酸左氧氟沙星滴眼液(山东博士伦福瑞达制药有限公司，批号：13060202，规格：5 mL∶15 mg)；软性角膜接触镜(舒日，强生视力健商贸有限公司)。甲醇为色谱纯，三乙胺、磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相：三乙胺溶液(取三乙胺7.5 mL，加水稀释至1 000 mL，用磷酸调节pH至3.5)-甲醇(75∶25)；流速：1.0 mL/min；检测波长：294 nm；柱温：25 ℃。

2.2对照品溶液制备精密称取盐酸左氧氟沙星对照品60.00 mg，置于50 mL量瓶中，用0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备溶液。取上述溶液1 mL，置于100 mL量瓶中，用0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得12.00 μg/mL对照品溶液。

2.3供试品溶液制备取软性角膜接触镜，滴入盐酸左氧氟沙星滴眼液2滴，浸润饱和1 min后，将软性角膜接触镜轻轻靠近义眼，与义眼充分接触30 s后，取下软性角膜接触镜，分数次用0.1 mol/L盐酸溶液洗涤软性角膜接触镜，洗涤液置于10 mL量瓶中，用0.1 mol/L盐酸溶液定容至刻度，摇匀，0.22 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。精密吸取10 μL注入液相色谱仪，测定，即得液相色谱图，见图1。

图1　盐酸左氧氟沙星HPLC色谱图

2.4线性关系考察精密量取混合对照品储备液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得不同浓度的对照品溶液。按“2.1”项下色谱条件分别进样，测定峰面积。以盐酸左氧氟沙星(μg/mL)为横坐标(X)、峰面积积分值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。回归方程:Y=47.34 X+3.265 (r=0.999 9，n=6)。结果表明，盐酸左氧氟沙星在1.200~24.00 μg/mL范围内与其各自的峰面积线性关系良好。

2.5精密度试验精密吸取12.00 μg/mL对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，测定峰面积。结果盐酸左氧氟沙星峰面积RSD为0.66%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.6稳定性试验按“2.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、8、12、24 h取供试品溶液各进样1次，测定峰面积。结果盐酸左氧氟沙星峰面积的RSD为1.35% (n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7回收率试验按“2.3”项下方法，以生理盐水替换盐酸左氧氟沙星滴眼液，将洗涤液置于10 mL量瓶后，加入24.00 μg/mL盐酸左氧氟沙星对照品溶液1.3、1.4、1.5 mL，用0.1 mol/L盐酸溶液定容至刻度，每个浓度分别制备3份供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积，计算盐酸左氧氟沙星的含量回收率，结果见表1。

表1　加样回收率试验结果(n=6)

2.8样品测定按“2.3”项下方法制备供试品溶液3份，按“2.1”项下色谱条件，分别进样测定，结果软性角膜接触镜中盐酸左氧氟沙星的饱和吸附量分别为34.77、35.28、32.69 μg，RSD分别为0.37%、1.05%和0.95%。

3讨论

通过比较醋酸铵高氯酸钠溶液-乙腈、三乙胺溶液-甲醇、磷酸盐溶液-甲醇等流动相体系对盐酸左氧氟沙星在高效液相色谱中的分离效果，可以发现采用三乙胺溶液-甲醇体系进行测定时，系统基线较为平稳，且色谱峰型对称，系统适应性良好，可以保证含量测定结果的准确可靠[2-5]。

对比20 ℃、25 ℃和30 ℃等温度对盐酸左氧氟沙星分离的影响，可以发现在不同的温度下，盐酸左氧氟沙星均可以达到令人满意的系统适应性，故选择25 ℃作为色谱运行的温度[6-8]。

在临床诊疗的过程中，由于病情需要，患者常需在配戴软性角膜接触镜的情况下滴入抗菌药物滴眼液。本试验选用盐酸左氧氟沙星旨在研究水凝胶材料类软性角膜接触镜的饱和吸附量，初步评价配戴软性角膜接触镜的患者使用盐酸左氧氟沙星滴眼液的安全性。但由于药物在软性角膜接触镜的吸收和释放是一个比较复杂的过程，需要考虑临床滴眼液在常规剂量、用法下，软性角膜接触镜中的药物含量及释放量能否达到临床常规使用的含量。研究水凝胶材料的饱和吸附量仅是其中的一个环节，在临床实践中应当权衡患者的风险及收益，慎重使用。

参考文献：

[1]陈新谦,金有豫,汤光.新编药物学[M].第17版.北京:人民卫生出版社,2011:97.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2010:651.

[3]刘世萍,马妍妍,郭美华,等.HPLC法测定复方盐酸左氧氟沙星滴眼液中3组分的含量[J].中国药师,2013,16(11):1708-1710.

[4]洪丽萍,蔡亚兰,黄加秀,等.RP-HPLC法测定盐酸左氧氟沙星片的含量[J].中国实用医药,2013,8(32):256-257.

[5]李文仕.RP-HPLC法测定氧氟沙星栓中氧氟沙星的含量[J].西北药学杂志,2011,26(6):421-422.

[6]王熙平,唐新,钟文.HPLC测定氧氟沙星栓的含量[J].中国卫生产业,2011,8(21):28-29.

[7]李士敏,俞松林,李宝新,等.高效液相色谱法测定氧氟沙星含量的方法改进[J].广州化工,2011,39(24):104-105.

[8]张春雨,杨丽杰,郭美华.高效液相色谱法测定复方口腔扁平苔癣涂膜剂中左氧氟沙星含量[J].中国药业,2012,21(10):43-44.

作者单位：1.东莞市人民医院，广东 东莞 523059；2.揭阳市揭东区人民医院,广东 揭阳 515500

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