HPLC法测定复方土牛膝咽喉合剂中表告依春的含量

傅玉新，陈　莉，王伟坚，何晓辉

HPLC法测定复方土牛膝咽喉合剂中表告依春的含量

傅玉新1，陈莉1，王伟坚1，何晓辉2

[摘要]目的建立高效液相色谱法测定复方土牛膝咽喉合剂中表告依春含量的方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(10∶90)，流速为1 mL/min，检测波长为245 nm，柱温为30 ℃。结果表告依春含量测定的线性范围2~30 μg/mL，r2=0.999 4，平均加样回收率为97.39%，RSD为2.03% (n=6)。结论建立测定复方土牛膝咽喉合剂中表告依春含量的高效液相色谱法，该方法准确、可靠，可用于复方土牛膝咽喉合剂的质量控制。

[关键词]土牛膝；合剂；表告依春；高效液相色谱法

[Abstract]ObjectiveTo establish a method for the content determination of epigoitrin in compound radix eupatorii chinensis mixture by HPLC.MethodsHPLC was developed to determine the epigoitrin with UV absorptions at 245 nm.The analysis was performed on a Kromasil C18column (250 mm×4.6 mm，5 μm) with a solvent system of methanol and 0.1% aqueous phosphoric acid (10∶90,v/v) at a flow rate of 1.0 mL/min.ResultsThere was a good linear relationship (r2=0.999 4) in the range of 2~30 μg/mL.The mean recovery rate was 97.39%,RSD was 2.03% (n=6).ConclusionThis method is simple,sensitive and accurate,and it can be used for the quality control of compound radix eupatorii chinensis mixture.

收稿日期：2015-03-03

基金项目：军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题

通信作者*

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201510026

Determination of epigoitrin in compound radix eupatorii chinensis mixture by HPLCFU Yu-xin1，CHEN Li1,WANG Wei-jian1,HE Xiao-hui2(1.Dongguan People′s Hospital,Dongguan 523059,China；2.East Jie People′s Hospital,Jieyang 515500,China)

Key words：Radix eupatorii chinensis;Mixture;Epigoitrin;HPLC

0引言

复方土牛膝咽喉合剂为我院医院制剂(批准文号：粤药制字Z20070718)，已生产多年，是由土牛膝、板蓝根及岗梅药材加水煎煮、浓缩等制成的液体口服制剂，具有清热解毒、利咽化痰之功效，主要用于治疗咽喉炎，急、慢性扁桃体炎，因感冒引起的喉部不适等，在临床已使用多年，具有较为明显的临床效果[1-2]，为了进一步控制其质量，本文采用高效液相色谱法(HPLC)测定其中表告依春的含量，报道如下。

1试药与仪器

复方土牛膝咽喉合剂(东莞市人民医院，规格：100 mL/瓶，批号：20140801)，表告依春对照品(上海源叶生物科技有限公司，规格：HPLC≥98%，批号：YS0810YA14)，南板蓝根(东莞市广济中药饮片有限公司，产地：广东)，广东土牛膝(东莞市广济中药饮片有限公司，产地：广东)，岗梅(东莞市广济中药饮片有限公司，产地：广西)，甲醇(Oceanpak公司，规格：色谱纯，批号：Me-11840506)，水为超纯水，其他均为分析纯规格。

套式恒温器(海宁市新华医疗器械厂，型号：TC-15)，超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司，型号：KQ3200B)，电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司，型号：AL204]，Agilent 1100型高效液相色谱仪(G1311型四元泵，G1316A型柱温箱，G1314A型检测器，Agilent Chemstation色谱工作站)。

2实验方法与实验结果

2.1色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(10∶90)，检测波长245 nm，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，进样量 20 μL。

2.2溶液的配制

2.2.1对照品溶液的配制精密称取2.0 mg表告依春对照品，置于10 mL的量瓶中，用流动相配制成浓度为0.2 mg/mL的表告依春对照品溶液，备用。

2.2.2供试品溶液的配制精密吸取1 mL复方土牛膝咽喉合剂，用流动相稀释至100 mL，过0.45 μm的微孔滤膜，供液相检测。

2.2.3阴性对照品溶液的配制取广东土牛膝75 g，岗梅根75 g，加900 mL水煎煮60 min后，分离药渣与药液，药液保存，药渣加800 mL水煎煮45 min，分离药渣与药液，药渣弃去，合并药液，浓缩至150 mL，过滤，精密吸取1 mL，用流动相稀释至100 mL，过0.45 μm的微孔滤膜，供液相检测。

2.3专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各20 μL，按“2.1”项下色谱条件进样。见图1。

图1　表告依春液相色谱图

从图1可知，供试品溶液的色谱图中，在与对照品色谱图相同的保留时间上有相同色谱峰，而阴性样品溶液在此保留时间上无吸收峰。

2.4线性关系考察分别精密吸取表告依春对照品溶液0.1、0.5、0.8、1.0、1.3、1.5 mL，用流动相分别定容至10 mL，制成浓度为2、10、16、20、26、30 μg/mL的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液20 μL，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积(Y)，以峰面积(Y)为纵坐标、对照品的浓度(X)为横坐标进行回归，得回归方程：Y=154.37 X+33.985，r2=0.999 4，结果表明，表告依春在2~30 μg/mL的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5精密度试验精密吸取表告依春对照品溶液，用流动相稀释10倍，连续进样6次，每次20 μL，按“2.1”项下色谱条件，测定峰面积。结果表告依春对照品溶液的10倍稀释液的平均峰面积值为3 147.4，RSD为0.8%，说明精密度良好。

2.6稳定性实验取供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h进样，按“2.1”项下色谱条件，测定峰面积。结果供试品溶液的峰面积平均值为3 095.1，RSD为1.2%，说明供试品在24 h内稳定性良好。

2.7加样回收率取已知表告依春含量的复方土牛膝咽喉合剂供试品溶液6份，约2.0 mL/份，向其中加入适量的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，测定其峰面积，计算表告依春的含量，并计算回收率、RSD值，结果见表1。

2.8样品含量测定随机取复方土牛膝咽喉合剂样品5份，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定表告依春峰面积，计算样品中表告依春的含量。结果5批样品的平均含量为0.019 53。见表2。

表1　表告依春加样回收率试验结果

表2　5批复方土牛膝咽喉合剂样品中表告依春

3讨论

复方土牛膝咽喉合剂处方中板蓝根为十字花科植物菘蓝的干燥根，性苦、寒，具有清热解毒、凉血利咽之功效[3]，为复方土牛膝咽喉合剂处方中的君药。板蓝根的化学成分复杂，主要含有生物碱类、有机酸类、多糖类、氨基酸类、核苷类等组分[4]。随着研究的不断深入，发现板蓝根中表告依春为代表成分的生物碱类是其抗病毒的有效成分[5]。现代药理研究也表明，表告依春为板蓝根抗流感的主要成分之一，板蓝根抗流感病毒作用的强弱与体内表告依春含量的高低密切相关[6]。药典[7]中也选用表告依春作为板蓝根的质量控制指标。因此，检测表告依春含量，对控制复方土牛膝咽喉合剂的质量很有意义。文献报道，采用HPLC法测定表告依春含量的流动相有很多种，包括甲醇-水(10∶90)、乙腈-水-磷酸-三乙胺(8.5∶90.72∶0.73∶0.05)、乙腈-0.5%磷酸水溶液(29∶71)以及甲醇-水梯度洗脱和乙腈-水梯度洗脱等[8-10]，本试验选用乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)，发现采用此流动相条件下，表告依春峰的分离度好，且保留时间短，可用于复方土牛膝咽喉合剂的质量控制。

参考文献：

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作者单位：解放军第102医院，江苏 常州 213003

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