十八味党参丸抗炎镇痛作用的实验研究

吴　穹，寇毅英，李瑞莲

(青海大学医学院，青海 西宁 810001)

吴穹(1977~)，男，满族，副教授，硕士

十八味党参丸抗炎镇痛作用的实验研究

吴穹，寇毅英，李瑞莲

(青海大学医学院，青海 西宁 810001)

摘要目的实验观察十八味党参丸抗炎及镇痛的药理效应。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性增加、蛋清致大鼠足趾肿胀急性炎症动物模型观察十八味党参丸的抗炎效应，通过小鼠热板试验、小鼠醋酸扭体试验评估十八味党参丸的镇痛作用。结果十八味党参丸中、高剂量组能抑制二甲苯致小鼠的耳廓肿胀程度、抑制蛋清引起的大鼠踝关节的肿胀度、降低醋酸致小鼠毛细血管通透性的增加(P<0.05)，中、高剂量组的十八味党参丸对醋酸致小鼠疼痛的扭体抑制率达53.9%和69.2%，高剂量组对热板所致的小鼠痛阈值显著延长(P<0.05)。结论十八味党参丸具有明显的抗炎、镇痛效应。

*：教育部“春晖计划”合作科研项目(No.Z2012079)

关键词十八味党参丸镇痛抗炎

中图分类号R285.5

文献标识码识码A

DOI：10.13452/j.cnki.jqmc.2015.02.013

AbstractObjectiveTo study the anti-inflammatory and analgesic effect of Eighteen Flavor Dang Sen pill(EFDSP)in mice and rats.Methods Three classical inflammation and two analgesic animal models were established.The ear swelling was induced by dimethyl benzene；Murine capillary permeability increase was induced by acetic acid and the rat′s paw inflammation was induced by egg white injection.And then，by means of hot plates and writhing test，the anti-inflammatory and analgesic effect of EFDS in mice were explored.Results the EFDSP groups treated with higher dose of EFDSP(1.0，1.5g/kg，ig)showed that the ear edema aroused by dimethyl benzene and the capillary permeability increase induced by acetic acid in mice were alleviated and ankle swelling induced by egg white injection in rats inhibited as well(P<0.05).Treatment with EFDSP(1.0、1.5g/kg，ig)to release the pain induced by acetic acid in mice showed that the inhibition rate of writhing reaction was 53.9% and 69.2%，respectively.the pain threshold of hot plate in mice treated with EFDSP(1.5g/kg，ig)was significantly prolonged(P<0.05).Conclusion Eighteen Flavor Dang Shen pill(EFDSP)shows significant anti-inflammatory and analgesic effect in mice or rats.

KeywordsEighteenFlavorDangShen pill(EFDSP)Anti-inflammatoryAnalgesiceffect

收稿日期2015-01-04

THE EXPERIMENTAL STUDY ON THE ANTI-INFLAMMATORY

AND ANALGESIC EFFECTS OF EIGHTEEN

FLAVOR DANGSHEN PILL(EFDSP)

Wu Qiong，Kou Yiying，Li Rui Lian

(Qinghai University Medical college，Xining，Qinghai 810001)

十八味党参丸是由藏党参、川贝、决明子、高山紫堇、渣驯膏、藏菖蒲、宽筋藤、诃子、手参，毛诃子、人工麝香、乳香、黄葵子、安息香、儿茶、巴夏嘎余甘子、木香等18味传统藏药组成，具有愈疮疡、除黄水的功能，[1、2]是藏医临床治疗风湿、类风湿及痛风性关节炎的主要药物。但在临床中我们发现，十八味党参丸具有良好的抗炎镇痛作用。为明确其抗炎镇痛作用，本课题拟通过动物实验，观察藏药十八味党参丸抗炎、镇痛的药理效应。

1材料与方法

1.1　材料

1.1.1实验动物

清洁级昆明种小鼠，体质量(24±2)g；SD大鼠，雄性，体质量(180±20)g，购自兰州大学动物实验中心，动物合格证号：SCXK(甘)2009-0004。动物于实验前适应环境1周，自由摄食和饮水，自然光照，室温(20±2)℃。

1.1.2药品与试剂

十八味党参丸(青海省格拉丹东药业有限公司提供，批号：014000167475)，吲哚美辛(山西云鹏药业有限公司，批号A110903)。以上药物碾粉，用蒸馏水配置成所需浓度的混悬液，使用时漩涡振荡混匀。伊文思兰(Evans blue，E8010，Sigma E2129)。

1.1.3仪器

YLS-6B智能热板仪(淮北正华生物仪器设备有限公司，中国)，PV-200足趾容积测量仪(成都泰盟科技有限公司，中国)，DU800分光光度计(Beckman公司，美国)，BP110S型电子天平(Sartorius公司，德国)。

1.2　方法

1.2.1二甲苯致小鼠耳廓肿胀[3]

取雄性昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别为模型组，阳性药物吲哚美辛组，十八味党参丸低、中、高剂量组。模型组灌胃以生理盐水(15mL/kg)，吲哚美辛组灌胃以吲哚美辛(3mg/kg)，十八味党参丸低、中、高剂量组灌胃以0.5、1.0、1.5 g/kg十八味党参丸混悬液(分别按照成人每公斤体重用量的10、20、30倍，成人的推荐剂量为每日3.0g/60kg)，每日1次，连续7 d。末次给药后1 h后于小鼠右耳前后两面均匀涂抹二甲苯0.05 mL，左耳作对照，1.5 h后将小鼠脱颈处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9 mm的打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳片重量之差计算肿胀度。

1.2.2醋酸致小鼠毛细血管通透性增加[3]

取雄性昆明种小鼠50只，动物分组及给药剂量与方法同1.2.1。连续灌胃7 d，末次给药后1 h，尾静脉注射0.5% Evans blue溶液(0.1mL/10g)，随即腹腔注射0.6%醋酸(0.1mL/10g)，30 min后脱颈椎处死，腹腔注射5 mL生理盐水，轻揉腹部，剪开腹腔，用吸管吸出洗涤液，300 g离心5 min，取上清液于590 nm波长处测吸光度A值。

1.2.3蛋清致大鼠足趾肿胀[4]

取雄性SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别为模型组，吲哚美辛组(3mg/kg )，十八味党参丸低、中、高剂量组(0.5、1.0、1.5g/kg)。各组灌胃给药，每日1次，连续7 d。末次给药后用足趾容积测定仪先测定致炎前大鼠右后足趾容积，并于末次给药后1 h于大鼠右后足趾皮下注射10%鸡蛋清溶液0.1 mL致炎，分别测定致炎后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 h大鼠足趾容积，以各鼠致炎前后足趾容积的差值计算肿胀度。

1.2.4小鼠热板试验[3]

取雌性昆明种小鼠，将其放置在预先恒温在(55±0.5)℃的热板上筛选痛阈合格小鼠，以痛阈潜伏期在5～30 s的为合格动物(即小鼠接触热板至舔后足的时间)。筛选合格小鼠50只，随机分成5组，每组10只，分别为模型组，吲哚美辛组(3mg/kg)，十八味党参丸低、中、高剂量组(0.5、1.0、1.5g/kg)。各组小鼠给药前测2次基础痛阈值，取平均值，然后分别灌胃以相应药物，每天1次，连续7 d。并于末次给药后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 h分别测定小鼠痛阈值。

1.2.5小鼠醋酸扭体试验[3]

取昆明种小鼠50只，动物分组及给药剂量与方法同1.2.4。末次给药后1 h，每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL，计数15 min内小鼠出现的扭体反应(伸展后肢、腹部内凹和臀部抬高)次数，计算镇痛率。

1.2.6统计学处理

2结果

2.1　十八味党参丸对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(表1)

表1 十八味党参丸对小鼠耳廓肿胀的影响(±s)

Table 1 The effect on ear swelling in mice treated with Eighteen Flavor Dang Sen pill(±s)

表1 十八味党参丸对小鼠耳廓肿胀的影响(±s)

组别n剂量(g/kg)耳廓肿胀度(mg)模型组10---10.9±2.5吲哚美辛组100.0035.1±1.6*十八味党参丸低剂量组100.58.4±2.6*#十八味党参丸中剂量组101.06.5±1.4*▲十八味党参丸高剂量组101.56.1±1.6*▲F13.09P<0.001

注：*与模型组比较P<0.05；#与吲哚美辛组比较P<0.05；▲与低剂量组比较P<0.05.

表1显示，与模型组比较，吲哚美辛及十八味党参丸中、高剂量组对小鼠耳廓炎症性肿胀有明显的抑制作用 (P<0.05)。

2.2　十八味党参丸对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响(表2)

表2 十八味党参丸对对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响(±s)

Table 2 The effect on capillary permeability increase induced by acetic acid in mice treated

with Eighteen Flavor Dang Sen pill(±s)

表2 十八味党参丸对对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响(±s)

组别n剂量(g/kg)吸光度模型组10----0.64±0.12吲哚美辛组100.0030.30±0.18*十八味党参丸低剂量组100.50.45±0.24*十八味党参丸中剂量组101.00.39±0.13*十八味党参丸高剂量组101.50.36±0.19*F5.39P<0.001

注：*与模型组比较P<0.05.

表2显示，与模型组比较，十八味党参丸中、高剂量组和吲哚美辛组能明显降低醋酸导致的小鼠腹腔渗出液中Evans Blue渗出的增加(P<0.05)。

2.3　十八味党参丸对蛋清致大鼠足趾肿胀的影响(表3)

表3 十八味党参丸对蛋清致大鼠足趾肿胀的影响(±s，n=10)

Table 3 The effect on ankle swelling induced by egg white injection in rats treated

with Eighteen Flavor Dang Sen pill(±s，n=10)

表3 十八味党参丸对蛋清致大鼠足趾肿胀的影响(±s，n=10)

组别剂量(g/kg)致炎前足趾容积(mL)致炎后不同时间足跖肿胀度(mL)0.5h1h2h3h4h模型对照组---1.38±0.181.0±0.290.95±0.210.92±0.200.84±0.180.88±0.18吲哚美辛组0.0031.41±0.180.60±0.21*0.61±0.17*0.58±0.14*0.57±0.12*0.42±0.16*十八味党参丸低剂量组0.51.35±0.150.85±0.280.83±0.230.78±0.20#0.75±0.22#0.70±0.22*#十八味党参丸中剂量组1.01.40±0.120.67±0.17*0.63±0.14*▲0.61±0.16*▲0.61±0.12*0.46±0.170*▲十八味党参丸高剂量组1.51.38±0.180.62±0.21*0.62±0.17*▲0.58±0.13*0.57±0.11*0.42±0.19*▲

注：*与模型组比较P<0.05；#与吲哚美辛组比较P<0.05；▲与低剂量组比较P<0.05.

表3显示，蛋清作为异体蛋白，注入大鼠足趾内，引起急性炎症反应导致大鼠足趾出现红、肿变化，与致炎前足趾容积相比较，肿胀度约在0.5~2 h间达高峰。十八味党参丸中、高剂量组和吲哚美辛组在致炎后0.5、1、2、3、4 h均对大鼠足肿胀有抑制作用(P<0.05)。

2.4　十八味党参丸对热板试验小鼠痛阈值的影响(表4)

表4 十八味党参丸对小鼠痛阈值的影响(±s，n=10)

Table 4 The pain threshold of hot plate in mice treated with Eighteen Flavor Dang Sen pill(±s，n=10)

表4 十八味党参丸对小鼠痛阈值的影响(±s，n=10)

组别剂量(g/kg)给药前热痛域值/s给药后不同时间热痛域值/s0.5h1h2h3h4h模型组---8.9±2.48.5±2.68.4±2.78.1±2.68.0±2.98.2±2.0吲哚美辛组0.0038.6±2.514.9±3.1*15.3±3.3*16.4±2.8*14.8±2.7*14.4±3.0*十八味党参丸低剂量组0.58.3±1.98.5±2.3#8.0±2.3#8.6±2.9#8.43±2.6#8.8±2.3#十八味党参丸中剂量组1.09.0±2.18.2±2.7#8.8±2.3#9.0±2.1#8.7±2.6#8.3±2.4#十八味党参丸高剂量组1.58.4±2.911.2±2.7*#12.4±2.1*#▲★13.3±2.8*#▲★11.6±2.4*#▲★11.8±2.3*#▲★F0.16411.33115.13718.64311.89512.662P0.956<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

注：*与模型组比较P<0.05； #与吲哚美辛组比较P<0.05；▲与低剂量组比较P<0.05；★与中剂量组比较P<0.05.

表4显示，与模型对照组比较十八味党参丸高剂量组末次给药后0.5、1、2、3、4 h小鼠热痛反应潜伏期可不同程度被延长，热痛阈值显著提高(P<0.05)。但低、中剂量组各时间点与模型组比较无明显差异(P>0.05)。

2.5　十八味党参丸对小鼠醋酸扭体的影响(表5)

表5 十八味党参丸对醋酸致小鼠扭体反应的影响(±s，n=10)

Table 5 The effect on the inhibition of writhing induced by acetic acid in mice treated

with Eighteen Flavor Dang Sen pill(±s，n=10)

表5 十八味党参丸对醋酸致小鼠扭体反应的影响(±s，n=10)

组别剂量/g/kg扭体反应次数(15min)镇痛抑制率(%)模型组---32.1±5.3---吲哚美辛组0.0037.5±3.4*76.6十八味党参丸低剂量组0.520.8±5.5*#35.2十八味党参丸中剂量组1.014.8±4.1*#▲53.9十八味党参丸高剂量组1.59.9±6.1*▲★69.2F39.13P<0.001

注：*与模型组比较P<0.05；#与吲哚美辛组比较P<0.05；▲与低剂量组比较P<0.05；★与中剂量组比较P<0.05.

表5显示，吲哚美辛组和十八味党参丸各剂量组均能减少醋酸致小鼠扭体反应次数，具有镇痛作用，与模型组比较有明显差异(P<0.05)，且中、高剂量组剂量组镇痛率高于50%。表明十八味党参丸对化学性刺激引起的疼痛有明显的抑制作用。

3讨论

十八味党参丸是否具有消炎止痛作用，各家观点不一。为明确其消炎止痛作用，本研究选择炎症早期经典模型小鼠毛细血管通透性实验模型、耳肿胀及大鼠足肿胀模型，以及小鼠热板试验和醋酸扭体实验两种镇痛实验模型，来评定十八味党参丸的抗炎和镇痛的药理效应。结果显示十八味党参丸可以抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀及蛋清致大鼠足爪的肿胀、降低醋酸致小鼠毛细血管通透性的增高。同时研究还发现它还可以延长小鼠热板痛阈，减少小鼠扭体反应的次数，说明十八味党参丸同时具有抗炎和镇痛的作用。本研究结果为十八味党参丸具有抗炎、镇痛作用提供了实验依据，但其作用的物质基础及抗炎镇痛的相关机制，还有待进一步研究。

参考文献

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