蔓荆子醇提物抗衰老与抗花生油氧化作用研究

尹爱武 黄赛金 罗紫英 龚 灯

蔓荆子醇提物抗衰老与抗花生油氧化作用研究

尹爱武1黄赛金1罗紫英2龚 灯2

（湖南工程学院化学化工学院1，湘潭 411104）
（湖南科技学院化学与生物工程学院2，永州 425199）

研究蔓荆子醇提物的抗衰老与抗花生油氧化作用。昆明种小白鼠经颈背皮下注射D-半乳糖建立亚急性衰老模型。蔓荆子醇提物以高、中、低剂量（300、150、75 mg／kg）灌胃衰老小鼠。结果表明，7周后蔓荆子醇提物中、高剂量均能显著降低小鼠血清、肝和脑组织中的MDA含量（P＜0.01，P＜0.05），显著增加小鼠血清、肝和脑组织中SOD的活力、小鼠脾脏和胸腺指数以及脑神经元数（P＜0.01，P＜0.05）。在35 d贮藏期内添加蔓荆子醇提物（添加量0.04%、0.06%、0.08%）花生油的酸值（AV）和过氧化值（POV）均显著降低。蔓荆子醇提物有较好的抗衰老与抗氧化作用。

蔓荆子 抗衰老 抗氧化

蔓荆子为马鞭科植物蔓荆（Vitex trifolia L.）或单叶蔓荆（Vitex trifolia L.Var.simplicifolia Cham.）的干燥成熟果实［1］。研究报道蔓荆子有抗自由基［2］、抗氧化［3-4］、抗炎［5］、抗肿瘤［6］及降压［7］等多种药理作用。

随着经济的发展和人们对食物安全意识的提高，食品中传统的人工合成抗氧化剂如二丁基羟基甲苯（BHT）、丁基羟基茴香醚（BHA）及没食子酸丙酯（PG）等因其给人体带来毒副作用，现逐渐退出或停止使用。天然植物资源含有丰富的黄酮类、多酚类等物质，已成为发现与提取抗衰老和抗氧化活性成分的宝库。

蔓荆子中含有黄酮与多酚类物质［8］。现代研究表明黄酮、多酚类物质有抗衰老与抗氧化作用［9-10］。本研究以D-半乳糖建立小鼠亚急性衰老模型，观察蔓荆子醇提取物对小鼠血清、肝、脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）的活力及丙二醛（MDA）含量以及胸腺、脾脏指数，脑神经元数的影响，以期探讨蔓荆子醇提取物的抗衰老作用及可能机制并探讨蔓荆子醇提取物的抗花生油氧化作用。

1 材料和方法

1.1 试验材料

蔓荆子：市售；花生油：实验室自行压榨；D-半乳糖：Sigma公司（用生理盐水配成10%的溶液）；芦丁对照品：中国医药（集团）上海化学试剂公司；没食子酸对照品：中国药品生物制品检定所。

1.2 动物与仪器

昆明种小白鼠90只，雌雄各半，体重18～22 g［湖南省动物实验中心提供（SPF级动物）］，饲养在恒湿（55±5）%，温度（22±2）℃的环境中，标准饲料与自来水随机取食。

KD-2508-Ⅲ恒温冷冻切片机：厦门伯力电子科技有限公司；N-1000S-WA旋转蒸发仪：日本EYELA；agiLent 19091S-433型气相色谱-质谱联用仪。

1.3 蔓荆子醇提物的制备

称取一定量蔓荆子粗粉，加7倍量75%的乙醇加热回流提取60 min，过滤，滤渣加7倍量75%的乙醇再提取1次，合并2次滤液，减压浓缩至无醇味，经喷雾干燥得蔓荆子醇提物。

1.4 动物分组与给药

昆明种小白鼠适应性喂养1周后随机分为模型组、空白组及蔓荆子高、中、低剂量组。空白组每日经颈背皮下注射0.5 mL生理盐水，其余各组每日注射0.5 mL 5%D-半乳糖，连续给药6周［11］。蔓荆子醇提物用生理盐水配成15 mg／mL的溶液。给药10 d后，蔓荆子高、中、低剂量组每日灌胃给予蔓荆子醇提物溶液，给量药分别为300、150、75 mg／kg，空白组和模型组每天灌胃等量生理盐水，连续灌胃7周。

1.5 生化指标及脾脏、胸腺指数测定

给药7周后，称取小鼠体重，小鼠断头取血、分离血清。迅速摘取小鼠肝脏和脑并用冰冷生理盐水清洗2次，滤纸吸干后称重。将小鼠肝脏、脑剪碎后分别倒入匀浆瓶中，加入9倍质量的生理盐水，匀浆，制成10%的肝脏、脑组织匀浆。按测试盒所附方法测定MDA和SOD含量。摘取小鼠胸腺和脾脏，生理盐水洗净，滤纸吸干后称重。计算胸腺指数和脾脏指数。

1.6 小鼠脑神经元数的测定

取小鼠脑组织，经干冰快速冷冻，然后切片，用10%甲醛溶液固定，用石蜡包埋后切片，经HE染色，在常规透射电镜下观察。每张切片随机选取10个视野观察神经元数。

1.7 蔓荆子醇提物抗花生油氧化试验

精确称取4.0 g蔓荆子醇提物，溶于200 mL无水乙醇中，制备质量浓度为20 g／L的蔓荆子醇提物的乙醇溶液。取5只锥形瓶，分别加入一定质量的花生油，在1、2、3号锥形瓶中分别加入一定量的蔓荆子醇提物的乙醇溶液（花生油中蔓荆子醇提物的含量分别为0.04%、0.06%、0.08%）；4号锥形瓶中加入一定量的BHT乙醇溶液作为对照，BHT添加量为0.02%；5号锥形瓶为空白。将花生油与添加物搅拌混合均匀，然后置于（45±1）℃恒温培养箱中放置35 d。试验第1天测定花生油的酸值（AV）和过氧化值（POV），以后每7 d测定酸值（AV）和过氧化值（POV），每个样品测定6次，取平均值。酸值的测定参照GB／T 5530—1998，过氧化值的测定参照GB／T 5538—2005（碘量法）。

1.8 数据处理

数据均以¯x±s表示，用SPSS 14.0统计分析，采用成组资料均数的t检验，P＜0.05为有显著性差异。

2 结果与分析

2.1 蔓荆子醇提物化学成分测定

化学成分测定表明蔓荆子醇提物中主要含有萜类、黄酮、酚类。其含量分别为101.4 mg／g（包含单萜、倍半萜、二萜，气相色谱-质谱仪测定）、53.8 mg／g（芦丁为对照，紫外可见分光光度法测定）、40.6 mg／g（没食子酸为对照，Folin-Ciocalteu 测定法）。

2.2 蔓荆子醇提物对血清、肝和脑组织MDA含量的影响

小鼠血清、肝和脑组织MDA含量见表1。与空白组比较，模型组血清、肝组织、脑组织中MDA含量显著增加（P＜0.01），表明衰老昆明种小白鼠模型建立。蔓荆子低剂量组小鼠血清、肝和脑组织中MDA含量与模型组比较没有统计学差异。与模型组比较蔓荆子高、中剂量组小鼠血清、肝和脑组织中MDA含量显著降低（P＜0.01，P＜0.05），且MDA含量随给药剂量的增加而减少。结果表明蔓荆子醇提物能显著降低小鼠血清、肝和脑组织中MDA含量。

表1 血清、肝组织和脑组织MDA含量（n＝18，¯x±s）

2.3 蔓荆子醇提物对血清、肝和脑组织SOD活力的影响

小鼠血清、肝和脑组织SOD的活力见表2。由表2可知，与空白组比较，模型组小鼠血清、肝和脑组织中SOD活性显著降低（P＜0.01）。蔓荆子低剂量组小鼠血清、肝和脑组织中SOD的活力与模型组比较无统计学差异。与模型组比较蔓荆子高、中剂量组小鼠血清、肝和脑组织中SOD的活力显著增加（P＜0.01，P＜0.05），且SOD 的活力随给药剂量的增加而增强。结果表明蔓荆子醇提物能显著增加小鼠血清、肝和脑组织中SOD的活力。

表2 血清、肝组织和脑组织SOD活力（n＝18，¯x±s）

2.4 蔓荆子醇提物对衰老小鼠脾脏和胸腺指数的影响

蔓荆子醇提物抑制小鼠脾脏和胸腺萎缩结果见表3。与空白组比较，模型组小鼠脾脏和胸腺指数显著降低（P＜0.01），表明模型组小鼠脾脏、腺胸萎缩。蔓荆子低剂量组小鼠脾脏及胸腺指数与模型组比较无统计学差异。与模型组比较，蔓荆子高、中剂量组小鼠脾脏及胸腺指数显著增加（P ＜0.01，P ＜0.05），且小鼠脾脏及胸腺指数随给药剂量的增加而增加。结果表明蔓荆子醇提物有显著的抗小鼠脾脏及胸腺萎缩作用。

表3 蔓荆子醇提物对小鼠脾脏和胸腺指数的影响（n＝18，¯x±s）

2.5 蔓荆子醇提物对小鼠脑神经元数的影响

蔓荆子醇提物对小鼠脑神经元数的影响见表4。由表4可知，与空白对照组比较，模型组小鼠脑神经元数显著降低（P＜0.01）。蔓荆子低剂量组小鼠脑神经元数与模型组比较无统计学差异。与模型组比较，蔓荆子高、中剂量组小鼠脑神经元数显著增加（P＜0.01，P＜0.05），且小鼠脑神经元数随给药剂量的增加而增加。结果表明蔓荆子醇提物能显著地抑制小鼠脑神经元的死亡。

表4 蔓荆子醇提物对小鼠脑神经元数的影响（n＝16，¯x±s）

2.6 花生油酸值的测定结果

贮藏期间花生油样酸值的变化见表5，在整个贮藏期内，蔓荆子高、中、低剂量组及BHT组的花生油酸值极显著低于空白组（P＜0.01），随蔓荆子醇提物添加量的逐渐增加，同期内花生油的酸值逐渐减小，在贮藏期内添加0.08%蔓荆子醇提物的高剂量组花生油酸值极显著低于BHT组（P＜0.01）。结果表明蔓荆子醇提物有显著的抑制油脂酸败作用。在一定的添加剂量下其抑制油脂酸败作用要优于人工合成抗氧化剂二丁基羟基甲苯（BHT）。

表5 不同贮藏期花生油酸值（n＝6，¯x±s）

2.7 花生油过氧化值的测定结果

在35 d的贮藏期间内花生油过氧化值（POV）的变化见表6。在整个贮藏期内，蔓荆子高、中、低剂量组及BHT组的POV值极显著低于空白组（P＜0.01），随蔓荆子醇提物添加量的逐渐增加，同期内花生油的POV值逐渐减小。在贮藏期内添加0.08%蔓荆子醇提物的高剂量组花生油POV值显著低于BHT组（P＜0.01），表明蔓荆子醇提物有显著地抗油脂氧化作用，在一定的添加剂量下其抗氧化效果要优于人工合成抗氧化剂二丁基羟基甲苯（BHT）。

表6 不同贮藏期花生油过氧化值（n＝6，¯x±s）

3 结论

试验结果表明，蔓荆子醇提物能显著降低小鼠血清、肝和脑组织中的MDA含量，增加小鼠血清、肝和脑组织中SOD的活力、小鼠脾脏和胸腺指数、脑神经元数，降低花生在贮藏期内的酸值和过氧化值。蔓荆子醇提物有抗机体衰老和抑制油脂的酸败和氧化作用。蔓荆子醇提物经化学成分定性试验，表明其中含有黄酮类和酚类物质，其抗衰老与抗花生油氧化作用可能与含有的黄酮类和酚类物质有关。

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The Anti-aging and Antioxidant Effects of Alcohol Abstracts from Vitex Trifolia L.on Peanut Oils

Yin Aiwu1Huang Saijin1Luo Ziying2Gong Deng2
（Department of Chemistry Engineering，Hunan Institute of Engineering1，Xiangtan 411104）
（Department of Life Science and Chemistry，Hunan University of Science and Engineering2，Yongzhou 425199）

The anti-aging and antioxidant effects of alcohol abstracts from Vitex trifolia L.were studied in this paper.The subacute aging model was established by neck hypodermic injection D-galactose in Kunming mouse.The aging model mice were administered intragastrically with alcohol abstracts from Vitex trifolia L.for 7 weeks at the doses of 350 （high），150 （middle）and 75 （low）mg／kg each day.The results showed the content of malondialdehyde（MDA）in serum，liver and brain tissue was significantly decreased（P ＜0.01，P ＜0.05），while the activity of superoxide dismutase（SOD）in serum，liver and brain tissue，the spleen index and thymus index，and number of brain neurons was significantly increased in high and medium dosage group（P ＜0.01，P ＜0.05）.Within 35d storage time，alcohol abstracts（0.04%，0.06%，0.08%）from Vitex trifolia L.were added，and then the acid value（AV）of peanut oil and peroxide value（POV）were significantly decreased.The results showed that alcohol abstracts from Vitex trifolia L.had good anti-aging and antioxidant effects.

Vitex trifolia L.，anti-aging，antioxidation

R965

A

1003-0174（2016）09-0091-04

湖南省重点学科建设项目（2011-76），湖南省高校科技创新团队支持计划（2012-318）

2014-11-09

尹爱武，男，1981年出生，副教授，天然资源的开发与利用