多种药物治疗后骨质疏松大鼠血清生化指标与骨组织形态计量学指标检测

多种药物治疗后骨质疏松大鼠血清生化指标与骨组织形态计量学指标检测

王强战祥波1王巍2杨琦3

(吉林大学第二医院妇产科，吉林长春130026)

摘要〔〕目的比较多种药物干预治疗后血清生化指标及骨组织形态计量学指标的改变情况。方法以去卵巢法复制骨质疏松动物模型，以丹杞颗粒、依普拉芬、结合性雌激素、 进行治疗，饲养15 w后以腹主动脉放血法处死大鼠，取大鼠左、右侧骨在扭转试验机验机上进行扭转实验。结果骨质疏松动物模型组胫骨最大扭矩、最大扭转角、最大扭转切应力显著低于正常对照组、丹杞颗粒、依普拉芬、结合性雌激素αD3治疗组(P<0.05)，以丹杞颗粒组大鼠胫骨最大切应力、最大扭转角大于对照组，差异显著(P<0.05)。结论老龄骨质疏松模型组大鼠由于骨质疏松导致股骨扭转力学特性发生改变，丹杞颗粒、依普拉芬、结合型雌激素、 干预治疗后扭转力学特性均有一定提高，丹杞颗粒效果最好。

关键词〔〕骨质疏松；药物干预；血清生化指标；骨组织形态计量学

中图分类号〔〕R714.257〔文献标识码〕A〔

通讯作者：杨琦(1980-)，女，硕士，主治医师，主要从事辅助生殖技术及产前诊断与骨质疏松的研究。

1吉化集团公司总医院妇产科2吉林大学第一医院泌尿外科

3吉林大学中日联谊医院妇产科

第一作者：王强(1970-)，女，博士，副主任医师，主要从事女性生殖系统肿瘤及女性生殖内分泌与骨质疏松的研究。

碱性磷酸酶(ALP)是评价骨形成和骨转换的重要指标。骨质疏松老年人发病率高，女性是本病的最大受害者，尤其是绝经后的女性，由于雌激素分泌水平降低，引起内分泌失调和紊乱，引起骨质疏松〔1〕。以往多以单一药物治疗人或动物骨质疏松模型为研究对象居多。本实验拟对比分析中药丹杞颗粒、西药依普拉芬、结合型雌激素干预治疗去卵巢骨质疏松动物模型的效果。

1材料与方法

1.1动物6月龄Wistar大鼠10只，12月龄Wistar大鼠50只，体重280～320 g，均购于吉林大学实验动物部。

1.2药品西药依普拉芬，武汉滨湖制药厂结合型雌激素片苏州立达制药有限公司，丹杞颗粒邯郸摩罗丹药业有限公司，昆明贝克诺顿制药有限公司αD3。

1.3大鼠分组与骨质疏松模型复制6月龄Wistar大鼠设为正常对照一组12月龄大鼠随机分为骨质疏松动物模型组10只，骨质疏松动物模型以丹杞颗粒治疗组10只，αD3治疗组10只，依普拉芬治疗组10只，结合型雌激素治疗组10只，所有大鼠均在笼中饲养，各组大鼠均自由摄食、饮水。对骨质疏松动物模型组大鼠和各治疗组动物于0 w手术，摘除双侧卵巢；丹杞颗粒治疗组、依普拉芬治疗组、结合型雌激素治疗组大鼠每天相应给服丹杞颗粒0.9 g/kg、依普拉芬100 mg/kg、结合型雌激素2 mg/kg。各组大鼠饲养15 w之后，以腹主动脉放血法处死各组大鼠，分别于各组大鼠心脏取血，分别取8 ml血液，之后将血液置于10 ml离心管中，以低温离心机对血液进行离心处理，4 000 r/min离心7 min，离心温度4℃，血液离心完成后，将血清放置在5 ml冻存管内保存待用。之后分别将各组大鼠麻醉以后，解剖大鼠，将大鼠左、右侧股骨取出后，将各组大鼠股骨分别以生理盐水浸湿纱布进行包裹后，-20℃冰箱内存放。

1.4主要仪器BI-2000医学图像分析仪(成都泰盟公司生产)，Poegcuts型切片机(德国OPTON公司生产)YD-51电鼓风干燥箱(上海实验仪器四厂生产)。P-Max 3500FL型多功能荧光酶标仪(上海闪谱生物科技有限公司生产)。

参考文献1.5血清生化指标测定按〔3〕的方法对血清中的钙、磷、ALP、抗酒石酸酸性磷酸酶(STR-ACP)进行测试，试剂盒为南京建成生物工程研究所生产，以邻甲酚酞络合酮比色法测定血钙；以孔雀绿直接显色法进行血磷的测定，以酶标法检测血清中ALP 和STR-ACP 。

1.6大鼠骨组织形态计量学指标测量将大鼠右侧股骨放入10%甲醛缓冲液固定3 d。脱钙-将骨组织放入10%乙二胺四乙酸(EDTA)溶液(含0.1 %DEPC水)中脱钙45 d。脱水-组织纵断取材后,经梯度酒精(80%乙醇24 h,95%12 h),以二甲苯反复浸泡2 次，30 min/次，之后进行对组织以树脂进行包埋，之后取出包埋组织浸入石蜡中，更换石蜡反复浸泡3 次，30 min/次，待石蜡凝固后，使蜡块与样品脱离，以切片机进行切片,切片厚度为5 μm，之后将切片置于蒸馏水中,将载玻片捞出后，放置于60℃ 环境箱中过夜。 之后将切片在二甲苯溶液中脱蜡30 min反复2次;然后经100% 乙醇5 min反复2次;95%乙醇5 min,反复2次;80%乙醇5 min，之后对样品进行水洗，之后将样品置于苏木素染色液中染色15 min,之后以自来水进行冲洗,之后以1%盐酸酒精分化样品1 min,之后对样品进行水洗,之后以弱氨水对样品返兰30 s,对样品水洗后,以伊红对样品染色15 min,水稍洗后,以80%乙醇稍洗,以95%乙醇反复2次，5 min/次,以,100%乙醇5 min。以二甲苯反复2次，5 min/次,以中性树脂胶封片,随机对每张切片选取5个视野,以BI-2000医学图像分析仪测量各组大鼠股骨骨小梁面积(Tb.r),骨小梁周长(Tb.Pm),骨小梁相对体积(TBV)，骨小梁面积(骨髓面积+小梁面积)，骨小梁平均厚度(MTT)。

1.7统计学方法应用SPSS17.0软件进行t检验。

2结果

2.1大鼠血钙、血磷、ALP、STR-ACP测量结果模型组、血钙、血磷、STR-ACP、ALP与正常对照组、丹杞颗粒治疗组、依普拉芬治疗组、结合型雌激素治疗组差异显著(P<0.05)。丹杞颗粒治疗组、依普拉芬治疗组、正常对照组血钙、血磷、STR-ACP、ALP差异显著(P<0.05)。见表1。

2.2各组骨组织形态学计量指标比较丹杞颗粒治疗组、依普拉芬治疗组、结合型雌激素治疗组骨小梁平均间距(Tb、SP)、MTT、Tb、Pm、Tb.r、TBV大于模型组(P<0.05)。见表2。

组别血钙(mmol/L)血磷(mmol/L)碱性盐酸酶(U/L)STR-ACP(U/L)ALP(U/L)正常对照组2.36±0.031)3.86±0.51)129.6±8.112.4±1.121)26.8±5.131)模型组2.51±0.034.62±0.6104.3±9.215.1±1.7136.2±6.12丹杞颗粒治疗组2.374±0.021)2)3.88±0.61)2)129.8±8.712.6±1.681)2)27.1±6.211)2)依普拉芬治疗组2.34±0.041)2)3.92±0.81)2)128.9±7.412.8±1.321)2)27.6±5.671)2)结合型雌激素治疗组2.41±0.031)4.120.71)117.9±6.813.6±1.471)30.6±6.351)αD3治疗组2.51±0.034.59±0.8105.3±9.314.3±1.6734.8±7.14

与模型组比较：1)P<0.05；与正常对照组比较：2)P<0.05；下表同

组别Tb.Ar(μm2)Bv/TV(%)MTT(μm)Tb.Pm(μm)Tb.SP(μm)正常对照组3.31±0.1732.87±1.2246.74±1.6336.79±1.76119.21±1.82模型组2.46±0.1125.81±0.9738.46±1.5832.64±1.58102.61±1.73丹杞颗粒治疗组3.25±0.1431.64±1.281)46.18±0.961)35.98±1.711)118.26±1.551)依普拉芬治疗组3.19±0.1229.31±0.981)44.25±1.261)34.96±1.831)109.22±1.611)结合型雌激素治疗组3.08±1.328.26±1.141)42.38±1.161)33.88±1.781)108.11±1.441)αD3治疗2.62±1.326.08±1.539.77±1.2633.43±1.62104.33±1.57

3讨论

骨质疏松动物模型大鼠通过以中药丹杞颗粒、西药依普拉芬、结合型雌激素干预治疗后起到了降低大鼠血清血钙和STR-ACP 的作用。这有利于促进去卵巢大鼠骨钙化，有利于骨细胞对钙的吸收，有利于促进骨钙化，提高骨密度(BMD)，起到提高骨的内在质量和性能的作用〔4〕。

本研究结果证明，骨质疏松动物模型通过以中药丹杞颗粒、西药依普拉芬、结合型雌激素干预治疗后，对骨质疏松模型大鼠都有一定的疗效，尤其是丹杞颗粒效果最好。学者们对雌激素治疗骨质疏松也进行了一定的研究，章晓霜〔5〕对不同强度运动和雌激素联合作用对去卵巢大鼠骨骼影响进行了研究；曹珍山等〔6〕证明尼尔雌醇对防治骨质疏松具有一定的作用。金勋杰等〔7〕以补骨胶囊和炔雌醇联用药对大鼠骨质疏松的预防及对子宫刺激作用进行了研究，得出补骨胶囊和炔雌醇联用可有效抑制炔雌醇对大鼠子宫刺激作用，得出了补骨胶囊与炔雌醇合用可有效防治骨质疏松的结论。本实验结果与以往的研究均证明，雌激素对预防和治疗骨质疏松具有一定的作用，但雌激素的副作用不容忽视，长期服用雌激素易患深静脉血栓和股骨头坏死等。

依普拉芬是治疗骨质疏松的西药，已用于临床治疗骨质疏松。张欣等〔8〕对女性围绝经骨质疏松以依普拉芬进行干预后的治疗效果进行了观察。得出了依普拉芬有抑制骨吸收、促进骨形成的作用,能有效预防和治疗妇女围绝经期症状和骨质疏松,可以作为激素替代疗法的补充的结论。韦永中等〔9〕研究表明依普拉芬对防止骨质疏松动物模型大鼠骨丢失具有一定作用。但其作为化学合成的西药都具有一定副作用，长期服用时脏器等会造成伤害，其价格昂贵，也不易被患者接受。

沈铁城〔10〕对维生素D治疗原发性骨质疏松的疗效进行了分析，得出服用维生素+钙剂可迅速改善骨质疏松病人的症状，并增加BMD，降低骨折发生率的结论。

4参考文献

1李全义，刘时璋，罗振群,等.骨髓损伤后骨代谢形态改变的髂骨形态计量学研究〔J〕，第四军医大学学报，2007;28(15)：1421-4.

2张光，李祎，吕俊峰,等.正常人的骨密度定量CT测量分析〔J〕.吉林大学学报(医学版),2003;29(1)：112-4.

3李世昌，季浏，刘体伟,等.不同方式运动对去卵巢大鼠骨密度、骨生物力学及代谢指标的影响〔J〕.体育学刊,2012;19(2):132-7.

4钟显春，罗民，李新颖，等.几种药物治疗骨质疏松模型大鼠股骨蠕变特性的对比分析〔J〕.生物医学工程研究，2012;31(3):180- 3.

5章晓霜.不同强度运动和雌性激素联合作用对去卵巢大鼠股骨影响的实验研究〔D〕.上海：华东师范大学博士论文,2004.

6曹珍山，叶长清，袁丽珍,等.尼尔雌醇防治骨质疏松症的形态计量学研究〔J〕.中国老年学杂志,1992;12(2)：99-101.

7金勋杰，吴铁，李清南,等.补骨胶囊与17-OC炔雌醇联合用药对大鼠骨质疏松的预防及对子宫刺激作用的研究〔J〕.中国骨伤,2003;16(5):272-4.

8张欣,李少闻,董春利,等.依普拉封治疗妇女围绝经期症状及骨质疏松的效果〔J〕.中国妇幼保健，2009;24(2)：215-6.

9韦永中，陶松年，包丽华,等.依普拉芬对去势大鼠骨丢失防治作用的实验研究〔J〕.南京医科大学学报：自然科学版，1999；19(2)：215-6.

10沈铁城.维生素D3治疗原发性骨质疏松症的疗效观察〔J〕.江苏大学学报(医学版),2004;14(3)：212-3.

〔2015-02-18修回〕

(编辑袁左鸣)