细菌感染兔发热时相白细胞计数、中性粒细胞及其直径的变化

细菌感染兔发热时相白细胞计数、中性粒细胞及其直径的变化

李妤蓉张文菊程瑞彩张洁莉刘明

(邢台医学高等专科学校第二附属医院，河北邢台054000)

摘要〔〕目的探讨白细胞(WBC)计数、中性粒细胞(NE)体积(V)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-8等参数在急性细菌感染兔发热时相中的变化。方法建立金黄色葡萄球菌感染兔模型，利用Beckman CouIter LH750全自动血液分析仪VCS技术和显微镜计数WBC检测急性细菌感染兔(n=5)及对照组(n=5)的耳缘静脉EDTA-K2全血，统计分析WBC总数、NEV及NE的直径。结果与对照组比较，感染组在发热寒战期、高峰期WBC、NE直径、CRP、IL-8差异有统计学意义(分别是P<0.01，P<0.05，P<0.01，P<0.01)。结论细菌感染早期(发热寒战期)兔耳缘静脉血WBC低、NE直径减小，因此WBC、NE大小、CRP三者综合分析对急性细菌感染性疾病早期诊断及疗效观察有重要临床价值。

关键词〔〕细菌感染模型；中性粒细胞；VCS技术

中图分类号〔〕R34〔文献标识码〕A〔

第一作者：李妤蓉(1964-)，女，教授，主任检验师，主要从事临床检验研究。

参与机体炎症反应的众多炎症细胞中，中性粒细胞(NE)是数量最大、功能最强的免疫细胞，具有很强的趋化、变形、黏附、吞噬和杀菌作用〔1，2〕。在炎症介质诱导下，骨髓释放白细胞(WBC)增加，NE由储存池向循环池游走增多，有些不成熟WBC也被释放，出现外周血WBC总数和NE比率增高〔3〕。但是在部分病例中，WBC总数反而降低，甚至出现危急值，此时仅用WBC总数与NE比率来诊断急性细菌感染较困难〔4〕。本文通过细菌感染动物模型研究发热时相WBC、NE体积(NEV)、NE直径的变化，寻找一种快速、准确、客观的诊断指标。

1材料与方法

1.1实验分组10只幼龄新西兰兔购于河北医科大动物实验中心，分为感染组和对照组2组，每组5只。

1.2兔感染发热模型制作依据家兔肺炎双球菌感染发热模型〔5〕方法。用凝固酶阳性金黄色葡萄球菌菌量6×107个皮内注射免疫幼龄新西兰兔造模。

1.3体温测量每间隔2 h测一次体温。所用测温计为人用肛表，插入直肠7.0 cm以上，持续时间为表上读数稳定1 min。测量前常温饲养在笼内，随意摄食、饮水和活动。测量时固定于暴露头尾盒内，尽量避免动物挣扎、躁动，以免体温变化。所用细菌为本院微生物实验室提供的凝固酶阳性葡萄球菌。感染前、经增菌、鉴定、再增菌等程序，最后获得血清肉汤菌液，经硫酸钡比浊法定量。对照组注射液除葡萄球菌外一切与感染组条件一致。

1.4标本采集14：00注射，两组注射前、注射后检测体温后采集耳缘静脉血1.5 ml于EDTA抗凝管中，做血细胞分析、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-8测定，同时制血涂片、瑞氏染色、油镜下血细胞形态分析，重点检查NE形态结构特点。

1.5仪器及试剂Beckman-Coulter LH750全自动血细胞分析仪，Omlipo全自动特定蛋白分析仪及配套试剂和质控品，奥林巴斯显微镜。

2结果

和对照组比较，感染组在寒战期、高峰期WBC总数及NE百分率差别非常显著(P<0.01)；高热期CRP、IL-8差别非常显著(P<0.01)；退热期WBC总数、NE百分率、CRP、IL-8差别不明显(P>0.05)。见表1。

表1　两组24 h体温、WBC总数、NE直径、CRP、IL-8对比 ( n=5)

3讨论

机体在细菌感染后，常引起反应性的WBC总数和NE增多，同时伴随的NE核左移和中毒性改变也与疾病的疗效和预后有关〔6〕。长期以来，血常规中的WBC和NE作为临床判断血液细菌感染的主要指标，但有些细菌感染患者WBC和NE并不高，以此为依据诊断可能会贻误治疗时机〔7，8〕。

感染发热4 h(寒战期)，感染组精神怠倦、颤抖，身体蜷缩，有的兔子出现腹泻；WBC总数降低；NE率在23%～51%，可见小NE，直径在9～11 μm，核左移，嗜中性颗粒粗大，CRP达10 mg/L；之后，随着体温的升高进入高峰期，WBC总数渐渐上升，NE数增多可达90%以上，核左移明显，嗜中性颗粒粗大，体积增大，形态呈多形性，直径在10～17 μm，可见晚幼粒和晚幼红细胞；CRP、IL-8明显升分别可高达30 mg/L、0.9 mmol/L以上。寒战期WBC总数减低，原因可能是由于细胞因子和交感神经的作用，引起血管收缩和血流减少，粒细胞由轴流移到边集，边缘池粒细胞增多，循环池粒细胞数减低〔9〕；细菌内毒素、病毒可一过性抑制骨髓释放粒细胞等，致循环池粒细胞减少；某些重度细菌感染时外周性粒细胞活性增强且趋化黏附于组织血管壁〔10〕；活化粒细胞膜变形能力减低，大多被滞留在肺毛细血管；外周血WBC聚集等，均可导致外周血WBC电子细胞计数时假性减少，也就是外周血中WBC总数和NE比率不升高反而降低〔11〕。寒战期血容量不足可能是致NEV缩小的主要原因〔12〕。

高峰期由于动脉、毛细血管扩张，血管通透性倍增，继之血流减慢，严重者发性血流停滞，有利于WBC黏附于血管内皮并渗出到炎症部位〔13〕。同时，细菌感染时骨髓在炎症因子刺激下不成熟粒细胞释放增加，如中性杆状核粒细胞和晚幼粒细胞〔14〕。同时外周边缘池中NE在炎症介质作用下活化，活化的NE主要表现在伪足形成，更好发挥黏附、吞噬功能。外周血中出现体积、形态不同的不成熟粒细胞、活化粒细胞以及成熟粒细胞，导致平均NEV增大、体积大小不一、细胞异质性增大〔15〕。

综上，在急性发热时WBC、NE大小、CRP三者综合分析对急性细菌感染的早期诊断有非常大的价值。细胞因子在细菌感染中对NE迁移、形态变化的影响还需进一步试验证明。

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〔2014-03-11修回〕

(编辑苑云杰)