不同剂量生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋的效果观察

王运平 ，杨凯平 ，孟德娇 ，张伟强 ，王晓丽 ，李世超

（中国人民武装警察部队总医院 武警总医院 a.急诊科；b.呼吸科，北京100039）

【学术争鸣】

不同剂量生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋的效果观察

王运平a，杨凯平b，孟德娇a，张伟强a，王晓丽a，李世超a

（中国人民武装警察部队总医院 武警总医院 a.急诊科；b.呼吸科，北京100039）

目的探讨不同剂量生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋的应用效果。方法将脐带间充质干细胞制剂袋40个按随机数字表法分为4组，并按生理盐水冲洗剂量不同，组别命名为剂量 60 mL组、80 mL组、100 mL组、120 mL组，每组各10个。待脐带间充质干细胞输注完后，采用不同剂量的生理盐水冲洗，冲洗后再注入20 mL生理盐水，混匀后从中取0.5 mL注入乙二铵四乙酸二钾抗凝管，从中取20 μL统计细胞数，观察比较4组制剂袋残余细胞数。结果4组制剂袋残留细胞数的比较差异具有统计学意义（F=806.713，P=0.001），60 mL组制剂袋残留细胞数最高，80 mL组次之，100 mL组和120 mL组制剂袋残留细胞数最低，100 mL组和120 mL组制剂袋残留细胞数的比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论静脉输注脐带间充质干细胞后，采用100 mL生理盐水冲洗制剂袋，可减少制剂袋残留细胞数，确保脐带间充质干细胞较充分输入人体内。

生理盐水；冲洗；脐带间充质干细胞；制剂袋

由于间充质干细胞 （mesenchymal stem cell，MSC）具有自我复制、多向分化和免疫调控能力，可应用于修复/替代受伤或病变的多种组织器官，从而为目前一些无法有效治愈的重大疾病如脊髓损伤、多发性硬化、老年性痴呆、帕金森氏症等提出了崭新的治疗方案[1]。人脐带间充质干细胞（human umbilical cord-derived mesenchymalstem cells，hUCMSC） 与其他组织来源的间充质干细胞相比，取材方便，免疫原性低，增殖分化能力旺盛，可塑性极强，因此，人脐带间充质干细胞逐渐做为诱导分化的首选种子细胞，成为临床和科研工作中间充质干细胞的一个更佳来源[2]。间充质干细胞移植途径主要有腰椎穿刺、颅脑定位、球后注射、静脉输注等，其中静脉输注途径操作简单、创伤最小，可反复操作，患者易接受，越来越多的被应用于临床及科研[3]。由于间充质干细胞呈贴壁生长，具有较强的黏附性[4]，所以，当输注完毕会有相当一部分细胞附着在制剂袋内壁，有可能影响移植疗效，为了尽可能的将细胞输入人体，临床常采用生理盐水冲洗细胞制剂袋，但是需要多少剂量的生理盐水能够充分将细胞冲洗干净，目前国内外没有相关报道。故本研究旨是探讨不同剂量生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋的应用效果，寻找较合适生理盐水冲洗剂量。

1 材料与方法

1.1 实验材料 已输注完毕的脐带间充质干细胞制剂袋40袋，奥林巴斯公司生产的CX41型光学显微镜1台，浙江求精医用仪器厂生产的血细胞计数板。

1.2 方法

1.2.1 实验方法 将脐带间充质干细胞制剂袋按照输注完毕先后顺序采用计算机生成的随机数字随机分为4组，并按生理盐水冲洗剂量不同组别命名为剂量 60 mL组、80 mL组、100 mL组、120 mL组，每组各10个。由1名高年资护士按静脉输液常规操作给患者输注脐带间充质干细胞，为确保干细胞的活性，静脉输入开始速度宜慢，5 min后患者无不适，可加快静脉输入速度[5]，静脉输入过程中轻弹细胞悬液袋及输血器过滤网，120次/min，20 min内静脉输入完毕[6]。每个脐带间充质干细胞制剂袋静脉输入完毕，分别采用不同剂量生理盐水冲洗，尽量将悬液袋内壁残留细胞冲洗干净，然后每个制剂袋再注入20 mL生理盐水，混匀后从中取0.5 mL注入乙二铵四乙酸二钾抗凝管，从中取20 μL注入血细胞计数板内，利用光学显微镜计数干细胞数目[7]。

1.2.2 统计学方法 采用SPSS 17.0进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差表示，多组间计量资料的比较采用方差分析，两两比较采用两独立样本t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

用光学显微镜观察每个制剂袋残留细胞情况，使用 60 mL、80 mL、100 mL、120 mL 4 种不同剂量的生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋后，制剂袋内脐带间充质干细胞的密集度随着生理盐水冲洗剂量的增加而逐渐减少。经方差分析4组制剂袋残留细胞数的比较差异具有统计学意义（F=806.713，P=0.001），60 mL组制剂袋残留细胞数最高，80 mL组次之，100 mL组和120 mL组制剂袋残留细胞数最低，100 mL组和120 mL组制剂袋残留细胞数的比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 4组脐带间充质干细胞制剂袋的残余细胞数比较（±S，个）

表1 4组脐带间充质干细胞制剂袋的残余细胞数比较（±S，个）

注：*表示P<0.05，与60 mL组比较；#表示P<0.05，与80 mL组比较

组别 n 残余细胞数60 mL 组 10 74 400.00±3 806.43 80 mL 组 10 26 060.00±5 436.34*100 mL 组 10 9 780.00±1 265.61*#120 mL 组 10 9 500.00±947.51*#F 806.713 P 0.001

3 讨论

近年来，干细胞移植被广泛应用于心血管、肝脏、神经系统等疾病的基础研究及临床探索，干细胞移植的途径有很多,如冠状动脉、心肌内注射[8]、肝动脉门静脉、腹腔[9]、腰椎穿刺、颅脑定位、球后注射[10]、静脉输注等途径。采用静脉输注的方式，可以反复、多次、无创进行，是最便于应用的移植方法[11]。Chu等[12]研究表明，静脉注射移植人类神经干细胞可以迁移和分化到老鼠大脑缺血灶，促进功能恢复。步星耀等[13]取自体髂骨骨髓间充质干细胞，采用直接移植、经侧脑室注入移植、经脑脊液和静脉注入移植对25例缺血性脑血管病患者进行治疗，治疗后脑功能缺损均有改善，且未见不良反应。另有研究显示静脉移植可避免损伤正常脑组织，且可以通过反复多次移植来弥补干细胞的缺乏[14]。

由于生理盐水的渗透压值和正常人的血浆、组织液相同，可以防止细胞破裂、脱水，故临床上常用来冲洗输液管路防止药物间的相互作用。因为脐带间充质干细胞具有较强的黏附性，静脉输注后容易残留在制剂袋内壁，所以在输注干细胞后给予生理盐水冲洗。采用合适剂量的生理盐水冲洗，既能充分减少细胞残留，提高干细胞移植疗效，又可减少患者入体内的液体负担，降低医疗资源的浪费。本研究使用 60 mL、80 mL、100 mL、120 mL 4 种不同剂量的生理盐水冲洗脐带间充质干细胞制剂袋后，光学显微镜观察，发现制剂袋内脐带间充质干细胞的密集度随着生理盐水冲洗剂量的增加而逐渐减少。观察每组制剂袋内残余细胞数，结果显示60 mL组制剂袋残留细胞数最高，80 mL组次之，100 mL组和120 mL组制剂袋残留细胞数最低，100 mL组和120 mL组制剂袋残留细胞数的比较差异无统计学意义。理论上讲，冲洗生理盐水剂量越大，制剂袋内残留的细胞越少，但是会延长静脉输注时间，增加患者液体负担，浪费医疗资源，因此静脉输注脐带间充质干细胞后可用100 mL生理盐水进行冲洗。

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R472.9

B

10.16460/j.issn1008-9969.2015.11.068

2014-06-16

武警总医院院级课题（WZ20130306）

王运平（1973-），女，河南许昌人，本科学历，主管护师。

杨凯平（1964-），女，河北沧州人，本科学历，副主任护师。

方玉桂 谢文鸿]