肺腺癌中肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶29、组织蛋白酶D和血管内皮生长因子表达的关系

肺腺癌中肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶29、组织蛋白酶D和血管内皮生长因子表达的关系

王丽红

(河北医科大学第一医院呼吸内科，河北石家庄050030)

摘要〔〕目的检测肺腺癌术后组织中肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶(TRIM)29蛋白(TRIM29)、组织蛋白酶(Cath)-D和血管内皮生长因子(VEGF)的表达特征。方法132例肺腺癌术后留取的蜡块及临床资料作为观察组，以距肿物边缘>5 cm，并经病理医师证实为正常的肺组织78例作为对照组。采用免疫组织化学方法检测两组中TRIM29、Cath-D和VEGF的表达。结果观察组TRIM29、Cath-D和VEGF的阳性率明显高于对照组，观察组TRIM29、Cath-D和VEGF的阳性率与肿瘤的最大径、淋巴结转移、脉管浸润和KI67的表达密切相关。观察组TRIM29、Cath-D和VEGF的表达均正相关。观察组TRIM29、Cath-D和VEGF高表达患者生存时间短。结论肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF高表达且具有协同作用，共同促进肿瘤的发生和进展。术后检测TRIM29、Cath-D和VEGF高表达提示肺腺癌患者预后不良。

关键词〔〕肺腺癌；TRIM29；组织蛋白酶(Cath)-D；血管内皮生长因子(VEGF)；免疫组化

中图分类号〔〕R73〔

第一作者：王丽红(1979-)，女，主治医师，硕士，主要从事肺循环研究。

肺腺癌常为周围型肺癌。病变发展中多种基因和蛋白出现变化，近年来学者关注肺腺癌的血管生成作用，并发现血管内皮生长因子(VEGF)高表达可以促进肺腺癌间质血管的新生〔1〕，此时肿瘤细胞中VEGF的表达升高，间质中CD31、CD34和CD105阳性的血管明显增多〔2〕。学者们也发现，VEGF的作用不是单独的，其他相关影响因素多，使其表达过程更复杂〔3〕。组织蛋白酶(Cath)-D是癌细胞合成的水解酶之一，是分子量为34 kD的糖蛋白，具有肽链内切酶的活性，其不仅可以对血管生成有一定影响，还具有调节细胞外基质降解等多种生物学功能〔4〕。肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶(TRIM)29蛋白是TRIM家族的重要成员，含有多个锌指基序，其可能对转录调控和脉管的重建有一定作用〔5〕。本文关注肺腺癌术后组织中TRIM29、Cath-D和VEGF的表达。

1材料和方法

1.1临床资料2009年1月至2011年4月我院行肺腺癌切除的术后组织及临床资料作为观察组，共132例，男70例，女62例；年龄53～85岁，平均69.6岁；纳入均经病理医师再次确诊，并符合WHO中关于肺腺癌的诊断标准。同时选取距肿物边缘>5 cm的正常肺组织78例作为对照组，男40例，女38例；年龄54～81岁，平均69.0岁。两组一般临床资料无明显差别，具有可比性。

1.2免疫组化检测TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白的表达TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白的检测均应用免疫组化EnVision二步法染色。浓缩抗体均由北京中杉金桥公司代购。正式应用前均进行预实验确定最理想的配比浓度。正式实验操作均由同一主管技师完成，严格按实验步骤进行，严格质量控制，努力减少误差。

1.3TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白检测结果的判定方法TRIM29、Cath-D和VEGF均以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性细胞，每张切片选择5个400倍的高倍视野(观察组为肿瘤细胞密集区，对照组为上皮细胞分布区)，分别计数阳性细胞和总细胞数，计算阳性率，取平均值。以阳性细胞≥5%定为阳性，以阳性细胞<5%定为阴性。

1.4统计学方法采用SAS6.12软件进行χ2检验、线性相关分析、生存分析。

2结果

2.1两组TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白表达阳性率的比较观察组TRIM29、Cath-D和VEGF表达的阳性率明显高于对照组(P<0.000 1)。见表1。

表1　两组TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白

2.2TRIM29、Cath-D和VEGF在观察组不同临床特征中表达观察组TRIM29、Cath-D和VEGF表达与肿瘤最大径、淋巴结转移、脉管浸润和Ki67的表达密切相关。见表2。

2.3观察组TRIM29、Cath-D和VEGF表达相关性观察组TRIM29和VEGF(r=0.46，P=0.021 4)、TRIM29和Cath-D(r=0.45，P=0.027 4)、Cath-D和VEGF(r=0.53，P=0.011 2)的表达均具有正相关性。

表2　TRIM29、Cath-D和VEGF阳性表达在观察组不同

2.4观察组TRIM29、Cath-D和VEGF表达的生存分析随访2～36(平均13.9)个月。肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF的表达均与患者预后相关(P<0.05)，即TRIM29、Cath-D和VEGF高表达患者的生存时间短，预后差。

3讨论

研究显示当肿瘤增长的速度超过其脉管系统的蔓延能力时，由缺氧诱导因子调控的VEGF高表达，加速肿瘤间质中血管新生和成熟能力〔6〕。此时肿瘤细胞为了存活而更易于获得侵袭转移的潜能。Cath-D具有肽链内切酶活性，可以调节VEGF的高表达，加速血管的生成。也有观点认为Cath-D活化后，可以活化尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)前体，从而引发链式反应，使肿瘤的浸润和侵袭能力增强〔7，8〕。TRIM29定位在11q23，TRIM29包含保守结构、环结构、B1和B2箱型结构，同时具有多种锌指序列〔9，10〕。应用酵母双杂交分析技术观察TRIM29的功能时发现其能与TIP60结合，此时TRIM29可以引起TIP60的下调，使p53中存在的K120位点乙酰化的数量明显减少，引发由p53介导的细胞增殖〔11〕。Kanno等〔12〕观察TRIM29在前列腺癌中的表达，认为TRIM29还可以标记基底细胞，并认为其与34BE12有一致的表达，因此认为其有助于判断肿瘤的生物学性质。TRIM29的作用可能是多元性的，其在不同肿瘤中表达的作用可能不尽相同〔13，14〕。

本研究中应用的是较为成熟的免疫组化技术，其标记部位准确，客观性强，判读一致性高，说服力强。本实验结果提示肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF在肿瘤形成过程中起促进作用，三者具有协同正向作用，共同促进肿瘤的进展。由于肿瘤的生长、淋巴结转移及脉管浸润均为判断肿瘤生物学行为和预后的重要指标，因此三者高表达可能提示临床中有不良的预后。TRIM29、Cath-D和VEGF高表达，类似癌基因的作用，其实质是三种蛋白调节细胞间的物质代谢，进而使细胞间、基质间的信息传递时出现失控性增生和分化成熟障碍，引起肿瘤的形成和进展〔15～17〕。TRIM29可以促进VEGF为代表的血管生成，促进肿瘤血管的新生，Cath-D对VEGF也有明显的调节作用，因此TRIM29/Cath-D对肿瘤发生发展的促进作用也可能是以VEGF作为中介因子，调节三者的关系及协同作用。肿瘤细胞外(间质成分中)也有少量TRIM29和Cath-D的表达，认为此时TRIM29、Cath-D的作用为促进肿瘤细胞与其邻近的成纤维细胞和上皮细胞耦合，使细胞间质的环境发生变化，加速肿瘤进展〔18，19〕，此时肿瘤细胞的侵袭及迁移能力均增强，浸润及转移潜能高〔20〕。

总之，肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF高表达且具有协同作用，共同促进肿瘤的发生和进展。术后检测TRIM29、Cath-D和VEGF高表达提示肺腺癌患者预后不良。

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〔2013-07-14修回〕

(编辑苑云杰)