CIP2A及c-Myc在老年胶质瘤中的表达及相关性

CIP2A及c-Myc在老年胶质瘤中的表达及相关性

李培栋王新军单峤吴跃辉王振

(郑州大学第五附属医院神经外科，河南郑州450052)

摘要〔〕目的探讨癌性抑制因子(CIP)2A和(c-Myc)在老年胶质瘤组织中的表达并分析两者表达的相关性。方法运用免疫组化技术检测CIP2A和c-Myc在52例老年胶质瘤和12例正常脑组织中的表达情况，分析CIP2A和c-Myc与胶质瘤组织学分级的相关性以及两者表达的相关性。结果CIP2A和c-Myc蛋白在老年胶质瘤组织中的阳性率分别为65.4%(34/52)和59.6%(31/52)，而两者在正常脑组织中的阳性率差异显著〔16.7%(2/12)和25.0%(3/12)，χ2=9.403,P=0.002；χ2=4.691,P=0.030〕。CIP2A和c-Myc蛋白表达与肿瘤组织病理分化显著相关(χ2=4.544，P=0.033；χ2=5.369，P=0.020)。Pearson相关分析结果显示老年胶质瘤组织中CIP2A与c-Myc蛋白表达呈显著正相关(r=0.613，P=0.005)。结论老年胶质瘤组织中CIP2A高表达与肿瘤组织病理分化密切相关，并与c-Myc蛋白表达呈显著正相关，提示CIP2A可能通过稳定癌蛋白c-Myc促进老年胶质瘤发生发展。

关键词〔〕CIP2A；c-Myc；胶质瘤

中图分类号〔〕R73〔

基金项目：河南省科学研究(No.092102310090)

通讯作者：王新军(1965-),男，博士，教授，主任医师，主要从事脑胶质瘤个体化治疗研究。

第一作者：李培栋(1971-)，男，副主任医师，主要从事脑血管病、脑肿瘤研究。

蛋白磷酸酶2A(PP2A)的癌性抑制因子(CIP2A)通过抑制PP2A对c-Myc S62的脱磷酸化作用，从而遏制PP2A介导的c-Myc降解，稳定肿瘤细胞中c-Myc蛋白水平〔1〕。之前报道称CIP2A在胃癌组织中表达升高，干扰其表达导致肿瘤细胞集落生成受损、细胞衰老和肿瘤分化〔2〕。另外在人头颈部肿瘤、结肠癌、乳腺癌和口腔鳞状细胞癌中均发现CIP2A高表达〔3，4〕，但CIP2A在老年胶质瘤组织中的表达及其与c-Myc的相关性少有报道。本课题分析CIP2A和c-Myc与老年胶质瘤临床病理特征的相关性及两者表达的相关性，初步探讨CIP2A在老年胶质瘤发生发展中的作用。

1资料与方法

1.1一般资料52例胶质瘤组织标本来源于2008～2012年本院病理科保存的石蜡标本，男31例，女21例，年龄61～78岁。按2000年WHO神经系统肿瘤分类标准：Ⅰ+Ⅱ级27例，Ⅲ+Ⅳ级25例，所有组织标本经术后病理学证实。正常脑组织来源于12例脑外伤或脑出血患者在手术非功能区入路过程中必须切除的脑组织标本，获得患者知情同意，男8例，女4例，年龄60～76岁。两组患者性别比及年龄无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2实验方法

1.2.1CIP2A和c-Myc蛋白的免疫组化染色采用标准生物素-链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法对4 μm石蜡切片进行染色。切片在60℃烤箱中烘烤60 min，然后经二甲苯脱蜡和再水化，0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)抗原热修复，室温冷却20 min，0.3% Trixon-X100处理30 min，3%双氧水-甲醇封闭内源性过氧化物酶活性，正常血清封闭非特异性结合，切片经CIP2A(1∶250，Novus Biologicals)和c-Myc(1∶400，Cell Signaling Technology)抗体4℃孵育过夜。冲洗后滴加生物素标记的二抗(SP试剂盒，北京中杉金桥生物技术有限公司)，室温孵育30 min。滴加辣根酶标记的链霉卵白素工作液，室温孵育30 min。滴加二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木苏轻度复染。酒精梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。

1.2.2免疫组化染色评估所有切片由两位研究人员进行评估，染色强度评分：0分；阴性；1分；弱阳性；2分；中度；3分；强阳性。阳性细胞百分比评分：无阳性细胞，0分，≤25%，1分，26%～50%，2分；51～75%，3分；>75%，4分。染色强度和阳性细胞百分比评分相乘≥1分则认为CIP2A或c-Myc蛋白阳性表达〔5〕。

1.3统计学方法应用SPSS13.0软件进行分析，分类资料运用χ2检验，相关性采用Pearson相关分析。

2结果

2.1老年胶质瘤及正常脑组织中CIP2A和c-Myc的表达CIP2A和c-Myc蛋白阳性反应为棕黄色或棕褐色，CIP2A蛋白主要定位在细胞质和细胞膜，而c-Myc蛋白主要定位于细胞质和细胞核。CIP2A和c-Myc蛋白在老年胶质瘤组织中的阳性率分别为65.4%(34/52)和59.6%(31/52)，而两者在正常脑组织中的阳性率分别为16.7%(2/12)和25.0%(3/12)，差异显著(χ2=9.403,P=0.002；χ2=4.691,P=0.030)。见图1。

图1　CIP2A和c-Myc蛋白在各组织中的表达与 正常脑组织中的免疫组化染色(SP，×400)

2.2CIP2A和c-Myc蛋白表达与老年胶质瘤组织学分级的相关性CIP2A和c-Myc蛋白在高组织学分级(Ⅲ+Ⅳ)的胶质瘤组织中的阳性表达率分别为80.0%(20/25)和76.0%(18/25)，而在低组织学分级(Ⅰ+Ⅱ)的胶质瘤组织中阳性表达率为51.9%(14/27)和44.4%(13/27)，二者差异显著(χ2=4.544，P=0.033；χ2=5.369，P=0.020)。

2.3老年胶质瘤组织中CIP2A与c-Myc蛋白表达相关性应用Pearson相关分析结果显示老年胶质瘤组织中CIP2A与c-Myc蛋白表达呈显著正相关(r=0.613，P=0.005)。

3讨论

恶性神经胶质瘤如多形性胶质母细胞瘤(GBM)是最常见和高侵袭性的脑原发恶性肿瘤，尽管在过去的20年里手术、放疗和化疗取得了一定的进展，但GBM患者的预后仍没有明显的改善〔6〕。CIP2A由于具有转化人永生化细胞的能力而被证实为一种癌蛋白，最近CIP2A过表达在多种人类肿瘤中被报道，更重要的是许多研究发现CIP2A可以充当不同实体肿瘤和血液系统肿瘤的预后分子标志物，如非小细胞肺癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肾癌、舌癌、食管腺癌、膀胱癌和慢性髓样白血病〔7〕。既往有学者也证实了CIP2A在大多数星形细胞瘤中表达水平异常升高〔8〕，与本研究结果一致。进一步研究发现CIP2A蛋白表达与老年胶质瘤分化程度呈显著相关，Yi等〔8〕也发现CIP2A过表达与星形细胞瘤高肿瘤分级显著正相关，提示CIP2A在可能作为胶质瘤潜在的预后指示标志物。

c-Myc作为一个经典的促癌蛋白参与许多生物学功能如细胞增殖、分化、衰老、凋亡和转化，而在老年胶质瘤组织中已经证实存在c-Myc蛋白过表达〔9～11〕。CIP2A是一个细胞PP2A抑制因子，通过抑制PP2A介导的c-Myc丝氨酸62号位脱磷酸化作用从而限制c-Myc蛋白水解。本文既往研究证实在胶质瘤细胞系A172和U87中干扰CIP2A表达可以导致c-Myc蛋白表达水平降低和半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3分裂体表达升高，另外干扰CIP2A导致肿瘤细胞增殖减少和凋亡增加〔11〕，提示CIP2A可能通过稳定c-Myc蛋白促进胶质瘤恶性生物学行为。

综上所述，CIP2A和c-Myc在老年胶质瘤组织中表达升高，其高表达与老年胶质瘤分化不良相关，而且CIP2A可能是一个潜在的老年胶质瘤治疗靶点。

4参考文献

1Junttila MR,Puustinen P,Niemel M,etal. CIP2A inhibits PP2A in human malignancies〔J〕. Cell,2007;130(1):51-62.

2Li W,Ge Z,Liu C,etal. CIP2A is overexpressed in gastric cancer and its depletion leads to impaired clonogenicity,senescence,or differentiation of tumor cells〔J〕. Clin Cancer Res,2008;14(12):3722-8.

3Lin YC,Chen KC,Chen CC,etal. CIP2A-mediated Akt activation plays a role in bortezomib-induced apoptosis in head and neck squamous cell carcinoma cells〔J〕. Oral Oncol,2012;48(7):585-93.

4Wiegering A,Pfann C,Uthe FW,etal.CIP2A influences survival in colon cancer and is critical for maintaining Myc expression〔J〕. PLoS One,2013;8(10):e75292.

5廖珩,魏君,宋鑫,等. 老年脑胶质瘤患者术后心理状况及其影响因素〔J〕. 中国老年学杂志,2013;33(23):5971-2.

6Liu N,He QM,Chen JW,etal. Overexpression of CIP2A is an independent prognostic indicator in nasopharyngeal carcinoma and its depletion suppresses cell proliferation and tumor growth〔J〕. Mol Cancer,2014,13(1):111.

7涂康生,杨雪,宋涛,等.原发性肝细胞癌组织中CIP2A和c-myc蛋白的表达及其意义〔J〕. 中国普通外科杂志,2011;20(1):95-8.

8Yi F,Ni W,Liu W,etal. Expression and biological role of CIP2A in human astrocytoma〔J〕. Mol Med Rep,2013;7(5):1376-80.

9Ohama T,Wang L,Griner EM,etal. Protein Ser/Thr phosphatase-6 is required for maintenance of E-cadherin at adherens junctions〔J〕. BMC Cell Biol,2013;14(1):42.

10Odia Y,Orr BA,Bell WR,etal. cMYC expression in infiltrating gliomas: associations with IDH1 mutations,clinicopathologic features and outcome〔J〕. J Neurooncol,2013;115(2):249-59.

11Cenci T,Martini M,Montano N,etal. Prognostic relevance of c-Myc and BMI1 expression in patients with glioblastoma〔J〕. Am J Clin Pathol,2012;138(3):390-6.

〔2013-09-15修回〕

(编辑袁左鸣)