梅毒血清学检测合理模式探析

邓俊

（长沙市中心医院检验科，湖南410004）

梅毒血清学检测合理模式探析

邓俊

（长沙市中心医院检验科，湖南410004）

目的通过分析和比较检测梅毒的4种血清学方法，寻找合理的梅毒血清学检测模式。方法应用甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、胶体金试验（SYP）和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）对该院2014年7月的58例临床怀疑梅毒感染患者的血清标本进行分析，并比较TRUST、TPELISA、SYP 3种方法所测结果与TPPA结果是否存在差异。结果TRUST结果与TPPA结果比较，差异有统计学意义（P＜0.05），而ELISA、SYP结果与TPPA结果比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论ELISA和SYP对梅毒抗体检测均有较好的灵敏性和特异性。而TRUST与TPPA差异较大，需合理利用TRUST的检测结果。结合各方法的优缺点建立一种便捷、准确和合理的检测模式，为临床诊断梅毒提供依据是很有必要的。

密螺旋体，苍白；梅毒血清学诊断；敏感性与特异性；实验室技术和方法

梅毒是目前最为常见的性传播疾病之一，其临床表现复杂，可累及多个组织和器官；传染性强，除通过性传播外，还可通过血液和体液传播，母婴垂直传播。为预防医源性感染的发生，梅毒抗体的检测已成为输血前常规的必检项目之一。近年来梅毒发病率有明显上升趋势，防治工作任重道远[1]。

梅毒的致病菌是梅毒螺旋体。由于梅毒螺旋体不能在体外培养，且直接显微镜观察又容易漏检，加之先进的化学发光免疫分析和核酸扩增技术缺乏足够的临床数据支持和金标准[2]，还未能在临床上推广使用，所以目前临床上最常用的检测方法还是血清学检测。

血清学检测分为非特异性和特异性梅毒抗体检测，本文通过比较临床常用的4种血清学检测方法的结果，综合各方法的特点探索一种合适的检测模式，为临床更快更准确的诊断梅毒提供帮助。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清标本随机选取2014年7月在本院行梅毒常规检测的门诊和住院患者的血清标本58例。门诊就诊21例，住院37例，其中男32例，女26例，年龄21～68岁，平均（42.17±1.92）岁，均为临床怀疑梅毒感染患者。

1.1.2 仪器西门子全自动酶免分析系统BEPⅢ。

1.1.3 试剂苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）采用上海荣盛生物技术有限公司生产的试剂盒；梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）采用珠海丽珠试剂股份有限公司生产的梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒；胶体金试验（SYP）使用英科新创（厦门）科技有限公司生产的梅毒螺旋体抗体检测试剂盒；梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）采用日本富士瑞必欧株式会生产的试剂盒。

1.2 方法

1.2.1 TRUST检测梅毒螺旋体抗体严格参照试剂说明书操作。结果判定：出现肉眼可见凝集为阳性。

1.2.2 TP-ELISA检测梅毒螺旋体抗体严格参照试剂说明书操作。结果判定：临界值（CUTOFF）=0.10+Max [0.05+Mw（NC）]。样品A值小于临界值（CUTOFF）为阴性，样品A值大于或等于临界值为阳性。结果判读由西门子全自动酶免分析系统BEPIⅡ自动完成。

1.2.3 SYP检测梅毒螺旋体抗体严格参照试剂说明书操作。结果判定：测试区和对照区都出现一条紫红色条带为阳性，仅对照区出现一条紫色条带为阴性。

1.2.4 TPPA检测梅毒螺旋体抗体严格参照试剂说明书操作。结果判定：未致敏粒子（最终稀释倍数1∶40）的反应图像判定为阴性，致敏粒子（最终稀释倍数1∶80以上）的反应图像判定为阳性。

1.3 统计学处理应用SPSS17.0统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，采用配对四格表资料的χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各方法检测结果58份血清标本中，以TPPA检测结果作为标准[3-5]，TRUST检出阳性8例，占总数的13.79%；TP-ELISA检出阳性23例，占总数的39.66%；SYP检出阳性23例，占总数的39.66%。见表1。

表1 各方法检测结果[n（%）]

2.2 各方法的灵敏性和特异性比较以TPPA检测结果作为标准[3-5]，TP-ELISA和SYP的灵敏性均为100%，特异性为97.14%，而TRUST的灵敏性只有34.78%，特异性97.14%。TRUST与TPPA比较，差异有统计学意义（P＜0.05），而TP-ELISA、SYP与TPPA法比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 各方法的灵敏性和特异性比较[%（n/n）]

3 讨论

梅毒螺旋体血清学检测与患者体内相应抗体的产生有很大关系。通常正常人在感染梅毒螺旋体2周后体内开始产生抗梅毒螺旋体抗体IgM，再2周后IgG产生。IgG会随着患者症状的持续发展而不断增加。对于未经治疗的隐形梅毒，通过检测能得到较强的IgG反应和温和的IgM反应，而治愈后的患者体内，相当长的时间内仍然会存在有较高的IgG抗体。感染过程中，人体除了产生特异性梅毒螺旋体抗体，还会相应地产生一些非特异性抗体，如心磷脂抗体等。所以血清学检测分为非特异性抗体检测和特异性抗体检测。

非特异性抗体检测，如性病研究实验室试验（VDRL）、血清不加热的反应素玻片试验（USR）、快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）和TRUST。上述方法的原理主要是利用含卵磷脂、心磷脂和胆固醇的抗体在IgM和IgG表面絮凝，出现肉眼可见的的凝集作为阳性判断。其优势在于检测试剂便宜，易于操作。但是针对的是梅毒非特异性抗体，其他炎症导致的抗体同样能检测到，试验的灵敏性也有赖于方法本身和感染阶段[6]。

特异性抗体检测，如TP-ELISA、SYP、梅毒密螺旋体血凝试验（TPHA）、梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTAABS）和TPPA。上述方法以梅毒特异性IgM和IgG抗体为检测对象，提高了检测的真阳性率，具有快速、灵敏、特异性强等优点。

本研究选择临床运用较多的4种血清学方法进行研究，结果发现，非特异性抗体检测试验TRUST与特异性抗体检测试验TPPA的结果存在显著差异。这与TRUST试验本身的局限性有关。TRUST检测的是人体内的心磷脂抗体。由于梅毒螺旋体感染后心磷脂抗体的出现晚于特异性抗螺旋体抗体，而且梅毒晚期又可能转阴，因此，TRUST不适于一期梅毒早期和三期梅毒的诊断[7]，对潜伏期和神经梅毒也不敏感。此外，该方法容易受到结核、红斑狼疮、类风湿性关节炎、猩红热等疾病干扰，产生假阳性结果。所以单独的TRUST结果意义不大。但TRUST滴度变化与梅毒治疗情况呈正相关，适用于疗效观察、随访和复发的辅助诊断[8]。

本研究结果显示，特异性血清学检测TP-ELISA、SYP和TPPA结果比较，差异无统计学意义（P＞0.05），在梅毒螺旋体检测方面都有较高的灵敏性和较好的特异性。而且SYP操作简单，价格便宜，适用于梅毒螺旋体的血清学快速检测；ELISA适用于大批量标本的检测，加上全自动酶联免疫试验仪的出现，自动化程度不断提高，大大减少了传统手工操作造成的人为误差。但是血清学特异性抗体检测的是梅毒IgM和IgG混合抗体[9]，不能区分患者属于感染病程中还是曾经感染。单独特异性血清学检测的阳性结果容易造成临床的过度检查和过度治疗。

虽然卡方检验所得结论认为3种血清学特异性抗体检测之间无统计学差异，但在个别样本中还是存在结果的不同。SYP和TP-ELISA都各有1例假阳性结果。ELISA检测标本的假阳性通过做3个平行孔复查后，发现结果为阴性，与SYP、TPPA的阴性结果一致，考虑为ELISA检测中的偶然误差，如仪器洗板不完全造成的OD值偏高。SYP出现的1例阳性，用金标试纸复查结果仍为阳性，但TRUST、ELISA和TPPA结果都为阴性。考虑为金标试纸条的假阳性。所以在实际工作中，不能用1种血清学特异性抗体检测方法来判断梅毒检测的阳性结果。建立合适的检测模式很有必要。

2011年，美国疾病预防与控制中心推荐ELISA作初筛。在此基础上作者可以建立自己的检测模式：特异性血清学检测，先用ELISA法做批量标本的初筛检测，阳性结果用金标试纸快速复查，排除ELISA的假阳性结果。对于2种方法结果不符的标本，再用TPPA做确认。同时，结合非特异性抗体血清学检测中滴度的变化和患者临床症状进行综合分析。相信临床医生能很好地掌握患者的实际情况，做出正确的判断。

[1]陈彬，徐克，林小敏，等.81946例住院患者梅毒抗体检测结果分析[J].中华传染病杂志，2013，31（8）：479-482.

[2]Susanne Norris Zanto（CLS（NCA）SM（NRCM），Deputy Laboratory Director，Montana DPHHS LaboratoryServices Bureau，et al.Changing Algorithms in Syphilis Laboratory Diagnosis[J].Clinical Microbiology Newsletter，2010，32（8）：59-64.

[3]徐海英.ELISA筛查联合TPPA应用于400份血清梅毒检测的结果分析[J].吉林医学，2012，33（36）：7960.

[4]陈俊，楼跃民，朱笑频，等.RPR与TP-ELISA联检对产妇梅毒检测结果分析[J].中国卫生检验杂志，2013，23（2）：397-398.

[5]宋贤响，田礼军，邹华新.4种实验室检测方法对儿童梅毒的临床诊断价值分析[J].中国医药导报，2014，11（5）：89-92.

[6]黄文喜，章平，郑和平，等.梅毒螺旋体血清学检验研究进展[J].中国医学工程，2014，22（2）：193.

[7]Binnicker MJ.Which algorithm should be used to screen for syphilis?[J].Curr Opin Infect Dis，2012，25（1）：79.

[8]李丹，崔巍，高伟.血清中梅毒抗体检测的研究进展[J].内蒙古医学杂志，2010，57（3）：321-324.

[9]陈霖，毛远丽.梅毒的实验室检测与筛查流程[N].中国医学论坛报，2012-10-25.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.05.036

:B

:1009-5519（2015）05-0730-02

2014-10-17）

邓俊（1982-），男，湖南长沙人，硕士研究生，主管检验师，主要从事临床免疫工作；E-mail：andyy1y1@163.com。