芒果不同喷药期多菌灵残留量的测定

芒果不同喷药期多菌灵残留量的测定

林 玲1，2，杨春亮1，2*，查玉兵1，2，郭宏斌1，2，曾绍东1，2，曾日中3

(1.中国热带农业科学院农产品加工研究所，广东湛江 524001；2.农业部农产品加工质量安全风险评估实验室(湛江)，广东湛江 524001；3.中国热带农业科学院橡胶研究所，海南儋州 571737)

摘要[目的]建立一种测定芒果果实中多菌灵残留量的高效液相色谱法。[方法]利用高效液相色谱法测定芒果不同喷药时间多菌灵的残留量，外标法定量。[结果]多菌灵农药残留较高，且基本上呈施药后间隔期越短，农药残留越高的趋势。采前7 d多菌灵农药残留达到1.20 mg/kg，间隔期7～30 d多菌灵残留介于0.09～1.20 mg/kg，采前35 d多菌灵残留量为未检出。多菌灵的检出限为0.02 mg/kg，平均回收率在85%～105%，相对标准偏差小于4%。[结论]该方法准确、操作简便、灵敏度高，能满足农药残留分析要求。

关键词高效液相色谱；多菌灵；芒果

中图分类号S481+.8

基金项目中国热带农业科学院橡胶研究所基本科研业务费专项(1630022013007)；国家农产品质量安全风险评估项目(GJFP2015012)。

作者简介林玲(1978- )，女，海南海口人，副研究员，硕士，从事农药残留检测技术研究。*

收稿日期2015-07-30

Determination of Carbendazim Residue of Different Interval in Mango Fruit by HPLC

LIN Ling1,2, YANG Chun-liang1,2*, ZHA Yu-bing1,2et al(1.Agriculture Products Processing Research Institute, CATAS, Zhanjiang, Guangdong 524001; 2.Laboratory of Agricultural Products Processing Quality and Safety Risk Evaluation, Ministry of Agriculture, Zhanjiang, Guangdong 524001)

Abstract[Objective] The aim was to establish a determination of Carbendazim residue in mango fruit by HPLC. [Method] The Carbendazim residue of different interval in mango fruit was determined by HPLC and external standard method. [Result] There was higher Carbendazim residue in mango fruit, furthermore the shorter spraying interval was, the higher Carbendazim residue was. The residue of Carbendazim reached 1.20 mg/kg in 7 days before harvest; the residues of Carbendazim were between 0.09 mg/kg and 1.20 mg/kg during the interval from 7 days to 30 days; carbendazim residue was not detected in 35 days before harvest. Under the selected conditions, the limit of Carbendazim detection was 0.02 mg/kg, and the average recoveries were 85%-105%, and relative standard deviation was less than 4%. [Conclusion] The method was accurate, simple and sensitive, and could satisfy the demand of pesticide residue analysis.

Key wordsHPLC; Carbendazim; Mango fruit

芒果是继香蕉之后的世界第二大热带水果，有“热带果王”的美称。截至2009年底，我国芒果栽培总面积达13.11万hm2，产量达89.41万t，种植面积和产量逐年增长。我国已成为世界芒果主产国之一，主要分布在海南、广东、广西、云南、四川攀枝花、福建等地区，是我国热区农民的重要经济来源之一。芒果在田间生长及采后贮运过程中遭受着多种病虫害。迄今为止，国内外已报道可危害芒果的病害就有50多种[1]。其中，炭疽病是其发生最普遍、危害最严重的一种病害，主要为害芒果叶片、嫩梢、花序和果实。同时，由于其病原菌具有潜伏侵染的特性，会从开花期、幼果期侵入，在侵染果实的过程中以侵染性菌丝体、附着胞和(或)侵入钉等侵染结构在果实表面或表皮内处于潜伏状态，在果实的表面上没有任何病害迹象，至果实贮运期，随着果实的后熟，侵染结构又恢复活动，使果实迅速腐烂，甚至整个果实失去食用价值，造成严重的经济损失。

多菌灵是一种高效、低毒、广谱内吸性苯并咪唑类杀菌剂，兼具防治两重作用，是用于防治炭疽病的理想药剂[2]。除了农药对病虫害的防治效果外，农药的安全使用问题也日益得到人们的关注，目前，国内外已制定多种农产品中多菌灵残留限量标准，欧盟许多国家和我国相继对蔬菜、水果中的多菌灵最高残留限量进行了规定[3]。测定多菌灵残留量的常用检测方法主要有高效液相色谱法和高效液相色谱法-质谱联用法，样品主要集中在蔬菜、水果、茶叶、药材等方面[4-8]。关于多菌灵在芒果上的残留检测方面的研究目前未见报道。为了对多菌灵在芒果上的安全间隔期进行合理评价，笔者利用高效液相色谱法对芒果不同喷药时间多菌灵的残留量进行了测定，以期为生产上合理施用多菌灵农药提供参考。

1材料与方法

1.1材料99.8%多菌灵标准品，乙腈、甲醇均为色谱纯，二氯甲烷、氯化钠等均为分析纯。50%多菌灵可湿性粉剂：按其说明书介绍的大田施用浓度配制药液。

1.2方法

1.2.1溶液的配制。

1.2.1.1甲醇+二氯甲烷溶液(5+95)。量取5.00 ml甲醇和95.00 ml二氯甲烷，混匀后备用。

1.2.1.2多菌灵标准储备液。称取10.0 mg多菌灵标准品于25.00 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为0.400 mg/ml的标准储备液，于4 ℃下避光保存。

1.2.1.3多菌灵标准工作液。量取适量多菌灵标准储备液，用甲醇稀释成适当浓度的多菌灵标准工作液。

1.2.1.4离子对试剂。吸取7.00 ml磷酸于200.00 ml水中，加入1.0 g 葵烷磺酸钠，溶解，再加入10.00 ml三乙胺，稀释至1 000 ml。

1.2.2芒果田间喷雾处理。试验地点设在中国热带农业科学院南亚热带作物研究所，选择一片5年以上树龄长势均匀的地块，田间各项管理采用统一标准控制。试验设5个处理，每个处理5棵树，分别于采前35、30、25、20、15、7 d进行喷雾处理，喷药时间设在09：00～11：00，天气为晴天，气温为25～33 ℃，药剂为50%多菌灵可湿性粉剂1 000倍稀释液，用小型手提式喷雾器将配制好的药剂均匀喷布于供试植株果实上，果实收获时，对每个采前间隔期均随机取5个果实进行残留检测。

1.2.3样品的提取与净化。参考农业行业标准NY/T 1680-2009[9]和NY/T 761-2008[10]并稍做修改。

1.2.3.1提取。称取5.0 g打浆均匀的果肉，加入20.00 ml乙腈，加7.0 g氯化钠，涡旋混合2 min，于10 000 r/min转速下离心8 min，吸取5.00 ml乙腈离心液放入烧杯中，于80 ℃水浴中加热氮吹，将乙腈蒸发近干，加入2.00 ml甲醇+二氯甲烷(5+95)溶解残渣，待净化。

1.2.3.2净化。将氨基柱用4.00 ml甲醇+二氯甲烷(5+95)预洗后立即加入“1.2.3.1”待净化液，收集洗脱液，再加入2.00 ml甲醇+二氯甲烷(5+95)溶解残渣后过柱，并重复1次，将收集的洗脱液置于氮吹仪上，氮吹蒸发至近干，用甲醇定容至2.00 ml，混匀后用0.22 μm滤膜过滤，待测。

1.2.4色谱条件。Symmetry C18250.0 mm×4.6 mm色谱柱，柱温：30 ℃，Waters2996二极管阵列检测器，检测波长为275 nm，流动相比例为甲醇-水(40∶60，V/V)，流速为1.0 ml/min。

1.2.5检测波长的选择。取浓度为0.80 μg/ml的多菌灵标准溶液，用二极管阵列检测器在190～500 nm波长范围内进行扫描，确定最佳检测波长。

1.2.6流动相的选择。比较甲醇-离子对试剂和甲醇-水2种流动相组成对目标物色谱峰峰形和分离度的影响，确定最适宜的流动相。

1.2.7方法的线性关系和相关性。对浓度为0.1、0.4、1.0、2.0、4.0 μg/ml的多菌灵标准溶液进样，以质量浓度(X)和其对应的峰面积(Y)进行线性回归，确定方法的准确度和相关系数。

1.2.8精密度、回收率和最低检出限。取芒果对照空白样品分别添加3个浓度水平的多菌灵标准溶液，使样品添加浓度分别为0.2、0.5和1.0 mg/kg，按“1.2.3”步骤处理，每个浓度做3个平行测定，根据测定结果计算回收率和相对标准偏差(RSD)，以3倍信噪比计算最低检出限。

2结果与分析

2.1检测波长的确定按“1.2.5”的方法对190～500 nm波长范围内进行全扫描，发现多菌灵在275 nm处有最大吸收，且基线噪音相对较小，色谱峰的信噪比更理想。因此，选择275 nm作为检测波长。

2.2流动相的确定结果表明，在甲醇-水体积比为40∶60的色谱条件下，目标峰分离效果最好，基线较平稳，且噪音干扰小，杂质峰与多菌灵的峰能完全分开。而采用甲醇-离子对试剂做流动相，目标峰也能分离，但离子对试剂不稳定，峰有拖尾，基线噪声大，所以选择甲醇-水做流动相。

2.3方法的相关性评价结果表明，多菌灵在0.10～4.00 μg/ml 范围内呈线性相关。线性方程为Y=1 344X-1 125，相关系数(r)等于0.999 2，表明线性关系良好，可满足定量分析的需要。

2.4精密度、回收率和最低检出限标准、样品加标色谱分别见图1、图2。由表1可知，多菌灵回收率为85%～105%，相对标准偏差为1.0%～3.9%。多菌灵的最低检出限为0.02 mg/kg。

表1　样品回收率与精密度测定结果( n=3)

图1　多菌灵标准色谱(0.80 μg/ml)

图2　样品添加色谱

2.5多菌灵在芒果果实上的残留量结果表明，多菌灵在芒果上的残留较明显。采前7 d多菌灵农药残留最高，达到1.20 mg/kg，采前35 d多菌灵农药残留量没有检出，采前15～30 d多菌灵残留介于0.09～1.20 mg/kg，果实收获时农药残留量随着间隔期的变化总体上呈现施药后间隔期越短农药残留越高的趋势。

3讨论

随着热带水果产业的快速发展，尤其是热带大宗水果大面积的栽培，其病虫害问题日益严重。而化学防治是病虫害防治的一项重要手段，然而有些杀虫、杀菌剂农药的不合理使用或滥用农药不仅起不到防治病虫害的目的，还会对环境造成污染等问题。因此，人们对某种农药进行药效筛选、毒性测定的同时，还需要对其在某种水果或其他作物上的安全间隔期进行研究，以免造成农产品农药残留超标，危害人类身体健康。

该研究采用Waters高效液相色谱法分析芒果果实中多菌灵的残留量，使用甲醇-水为流动相，添加回收率为85%～105%，最低检出限为0.02 mg/kg。该方法准确、操作简便，灵敏度高，能满足农药残留分析要求。

刘承兰等[11]采用丙酮提取芦笋样品中的多菌灵和吡虫啉农药残留，用石油醚和二氯甲烷萃取3次，合并萃取液，蒸干，甲醇定容。该法步骤较繁琐，耗费时间长，提取溶剂用量大，色谱条件流动相甲醇-水体积比为40∶60，与该研究所建立的色谱流动相相似。李海飞等[12]用高效液相色谱法快速测定水果中的3种苯并咪唑类杀菌剂(多菌灵、噻菌灵和甲基硫菌灵)残留量，用乙腈提取，样品提取、色谱流动相与该试验条件相似，但检测波长为285 nm。NY/T 761-2008[10]蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定的前处理与该方法的前处理基本一致，只是该方法的操作更加简单，且该方法的色谱条件也更加优化，又相对环保。精密度高、稳定性好，回收率较高，说明该研究的数据准确、可靠，可用于分析芒果等水果中多菌灵的残留量。

国家标准GB 2763-2014[13]食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量规定多菌灵农药在芒果中残留最大限量为0.50 mg/kg，CAC对芒果的规定为2.00 mg/kg，而欧盟则规定为0.10 mg/kg。参照上述标准，该研究在采前7 d处理的多菌灵最大残留量为1.20 mg/kg，采前30 d处理的多菌灵残留量为0.09 mg/kg，低于国际上要求较严格的欧盟标准。可见，多菌灵杀菌剂在芒果上的降解速度慢，安全间隔期较长，根据检测结果，考虑到该药剂的毒性，建议多菌灵在芒果上的安全使用时间是采前30 d施用，使该药物残留降到最低。该研究结果为指导芒果生产中合理、安全地施用多菌灵农药提供了参考。

参考文献

[1] 吉家乐.海南芒果主要病虫害及其防治[J].现代农业科技，2007(20)：100-101.

[2] 陈业渊，李绍鹏，高爱平，等.无公害食品芒果生产技术规程：NY/T 5025-2001[S].北京：中国标准出版社，2001.

[3] 邹冬梅，吕岱竹，王明月，等.我国芒果农药最大残留限量制定及农药残留现状分析[J].中国热带农业，2012，45(2)：16-19.

[4] 陈莹，丛佩华，聂继云，等.分散固相萃取-高效液相色谱法测定水果中多菌灵和噻菌灵[J].果树学报，2008，25(5)：769-773．

[5] 吴刚，吴俭俭，赵珊红，等.加速溶剂萃取-固相萃取结合液相色谱分析茶叶中多菌灵残留量[J]．中国食品学报，2008，8(4)：165-168．

[6] 吴永江，朱炜，程翼宇.液-质联用法测定铁皮石斛和西洋参及制剂中多菌灵残留[J]．分析化学，2006，34(2)：235-238．

[7] 金仁耀，桂文君，寿林飞，等.多菌灵在柑橘和土壤中的残留及降解动态研究[J].江苏农业科学，2005(2)：111-113.

[8] 王登飞，陈练洪，游俊，等.固相萃取-HPLC法同时测定果蔬中多菌灵和噻茵灵残留量[J].农药，2008，47(6)：443-447.

[9] 牟仁祥，陈铭学，曹赵云，等.蔬菜水果中多菌灵等4种苯并咪唑类农药残留量的测定：NY/T 1680-2009[S].北京：中国农业出版社，2009.

[10] 刘潇威，买光熙，李凌云，等.蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定：NY/T 761-2008[S].北京：中国农业出版社，2008.

[11] 刘承兰，刘丰茂，李莉，等.高效液相色谱法测定芦笋中多菌灵和吡虫啉残留[J].农药学学报，2004，6(4)：93-96.

[12] 李海飞，李静，徐国锋，等.高效液相色谱快速测定水果中3种苯并咪唑类杀菌剂[J].现代农业科技，2009(1)：114-116.

[13] 国家卫生和计划生育委员会，农业部.食品中农药最大残留限量：GB2763-2014[S].北京：中国标准出版社，2014.