松茸浓缩口服液的品质评价*

么宏伟，佟立君，付婷婷**，谢晨阳，吴洪军，赵凤臣，冯 磊，张学义

（1.黑龙江省林副特产研究所黑龙江省非木质林产品研发重点实验室，黑龙江 牡丹江 157011；2.黑龙江省林业科学院，黑龙江 哈尔滨 150081）

〈贮运加工〉

松茸浓缩口服液的品质评价*

么宏伟1，佟立君2，付婷婷1**，谢晨阳1，吴洪军1，赵凤臣1，冯 磊2，张学义1

（1.黑龙江省林副特产研究所黑龙江省非木质林产品研发重点实验室，黑龙江 牡丹江 157011；2.黑龙江省林业科学院，黑龙江 哈尔滨 150081）

对松茸浓缩口服液的品质做了初步的评价，对其感观、相对密度、pH值、卫生学指标和营养成分含量进行检测。结果表明，松茸浓缩口服液呈澄明的黄褐色液体，无浑浊和沉淀，味甘，相对密度（1.10±0.05）g·mL－1，pH值为7.50±0.05，每支装量为10 mL，棕色瓶包装，卫生学检测符合标准，含有多糖（86.7±0.2）mg/100mL、维生素C（0.50±0.04）mg/100mL、黄酮（1.18±0.04）mg/100mL、蛋白质（193.3±0.3）mg/100mL、多酚（0.19± 0.02）mg/100mL、三萜（38.3±0.1）mg/100mL，检出了17种氨基酸，其品质良好。本研究为松茸口服液的推广及进一步研究提供了数据基础。

松茸；浓缩口服液；品质评价

松茸Tricholoma matsutake(S.Ito et Imai)Sing.，又名松口蘑，与温带和寒温带的松林与栎林共生生长，为共生菌[1]。野生松茸的生长环境极为苛刻，需要依赖柏树、橡树等阔叶林为其生长发育提供营养支持，只有这样才能形成健康的子实体[2－3]。松茸含有丰富的氨基酸、维生素、脂肪、丰富的膳食纤维和多种活性酶，另含有3种珍贵的活性物质，分别是双链松茸多糖、松茸多肽和松茸醇[4－5]。松茸具有很多保健功能，如提高免疫力、抗肿瘤、治疗糖尿病及心血管疾病、抗衰老养颜和促肠胃保肝脏等[6-8]。

口服液的质量是其发挥功效的重要保证，而口服液的品质评价则为判断口服液质量是否合格提供一定的依据。为了保证松茸浓缩口服液的质量，对松茸浓缩口服液的外观性质、pH值、相对密度、澄明度、装量差异、卫生学等进行了检查，对松茸浓缩口服液的品质进行了初步评价。

1 材料与方法

1.1试验材料

试验所需松茸来自黑龙江省牡丹江市东宁县。

1.2试验试剂

柠檬酸、正丁醇、肉豆蔻酯、EDTA、柠檬酸钠、纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、碳酸钠、氯化钠、95%乙醇、葡萄糖、浓硫酸、苯酚、草酸、维生素C、偏磷酸、醋酸、氯酸铵、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G-250、磷酸、没食子酸、福林酚、熊果酸、香草醛、冰醋酸、高氯酸等试剂均为国产分析纯。

松茸浓缩口服液，试验前期制备，10 mL·支-1，棕色瓶灌装。

1.3试验仪器与设备

主要试验仪器见表1。

表1 主要试验仪器Tab.1 Main laboratory apparatus

1.4试验方法

1.4.1 松茸浓缩口服液的制法

原料预处理。

超声波辅助水提取：将经预处理后的松茸在超声波细胞破碎仪中进行超声提取，调节超声功率125 W、超声时间10 min、工作时间4 s、间隔时间1 s，用4 000 r·min-1的离心机离心10 min，得到提取液1和残渣1。

弱碱盐溶液提取：将残渣1浸渍在松茸质量20倍体积含有0.3%碳酸氢钠、0.5%氯化钠溶液中，80℃恒温提取120 min。然后4 000 r·min-1离心10 min，得到提取液2和残渣2。

乙醇溶液提取：将残渣2浸渍在松茸质量20倍体积含有80%乙醇溶液中，70℃恒温水浴锅中提取30 min，得到提取液3。

浓缩蒸馏：将3次提取液混合，然后进行过滤，用100筛眼的尼龙66滤层过滤。利用旋转蒸发装置以50℃、60 r·min-1对上述混合溶液进行蒸馏浓缩，蒸馏浓缩至总体积的1/10，灭菌灌装。得到黄褐色澄清透明口服液。

1.4.2 品质评价指标

（1）感观评价

取3批松茸浓缩口服液，由10位专业人士对其色泽、香味及组织状态进行评分，取平均值进行评价。

（2）相对密度检查

分别取3批松茸浓缩口服液样品，用比重计测定其相对密度，每批样品重复测定3次，取平均值。

（3）pH值检查

分别取3批松茸浓缩口服液样品，参照2010版国家药典附录ⅦG pH值测定法，用酸度计进行测定，测定前用硼砂标准缓冲溶液校正，每批样品重复测定3次，取平均值[63]。

（4）卫生学检查

参照《中国药典》 （2010版一部）附录IG合剂的微生物限度有关规定，依据附ⅫC微生物限度检测法所述步骤，分别对松茸浓缩口服液中细菌数、霉菌和大肠埃希菌数进行了检测[63]。

（5）营养成分含量测定

多糖：采用苯酚硫酸法测定。准确称取葡糖标准品100 mg，蒸馏水定容至100 mL，得到浓度为1.0 mg·mL-1的标准溶液。精密吸取葡萄糖标准液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL，补水至2.0 mL。加入50 g·L-1的苯酚溶液1.0 mL，浓硫酸5.0 mL，混匀，沸水浴2 min。冷却后在495 nm处测吸光值，以多糖浓度（mg·mL-1）为横坐标，以吸光值（OD495）为纵坐标，如图1所示。

维生素C：精确称取草酸6.30 g，EDTA 0.0584 g，充分溶解后定容至100 mL，准确称取干燥的维生素C 5 mg，用草酸-EDTA溶液定容至500 mL，分别吸取0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL、2.8 mL、3.2 mL的标准抗坏血酸溶液于50 mL的容量瓶中，然后加入草酸-EDTA溶液，使总体积达到10 mL。再加入1.0 mL的偏磷酸—醋酸溶液和5%的硫酸2.0 mL，摇匀加入4.0 mL铝酸铵，在 705nm下测定吸光值，以维生素C浓度（μg·mL-1）为横坐标，以吸光值（OD705）为纵坐标，如图2所示。

图1 葡萄糖标准曲线Fig.1 Glucose standard curve

图2 维生素C标准曲线Fig.2 Vitamin C standard curve

黄酮：精确称取20 mg芦丁标准品，用50%乙醇溶液定容至100 mL，得0.2 mg·mL-1芦丁标准溶液，量取标准溶液1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、7.0 mL、13.0 mL、17.0 mL、23.0 mL。分别置于100 mL容量瓶中，每个容量瓶中加入5%亚硝酸钠溶液1.0 mL，放置6 min后，再分别加入10%硝酸铝溶液1.0 mL，静置6 min后分别加入4%氢氧化钠溶液10 mL，使用50%乙醇溶液定容，静置10 min后，于508 nm处测吸光值，以芦丁浓度（μg·mL-1）为横坐标，以吸光值（OD508）为纵坐标，如图3所示。

蛋白质：首先将牛血清白蛋白用0.15 mol·mL-1的氯化钠溶液配成1.0 mg·mL-1的标准蛋白质溶液。再准确称取100 mg考马斯亮蓝G-250，溶于50 mL95%的乙醇后，加入120 mL 85%的磷酸，用蒸馏水稀释至1 L。取6支试管分别加入1.0 mg·mL-1的标准蛋白质溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL，然后用0.15 mol·mL-1氯化钠溶液补充到1mL，最后试管分别加入5.0 mL考马斯亮蓝G-250试剂。每加完一管，立即在旋涡混合器上混匀。加完试剂2 min～5 min后，于595 nm处测吸光值。以牛血清白蛋白浓度（mg·mL-1）为横坐标，以吸光值（OD595）为纵坐标，如图4所示。

图3 黄酮标准曲线Fig.3 Flavonoids standard curve

图4 蛋白质标准曲线Fig.4 Proteinstandard curve

多酚：精确称取没食子酸标准品25 mg，用水溶解并定容至250 mL，得到0.1 mg·mL-1L的标准溶液。精密吸取标准溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL于100 mL容量瓶中，加入1 mL福林酚显色剂，摇匀后再加入2 mL15%碳酸钠溶液，定容至100 mL，室温下反应2 h后于760 nm处测吸光值，以没食子酸浓度（μg·mL-1） 为横坐标，以吸光值（OD760）为纵坐标，如图5所示。

图5 多酚标准曲线Fig.5 Polyphenols standard curve

三萜：精确称取熊果酸标准品1.150 mg，溶于10 mL无水乙醇中，得0.115 mg·mL-1标准溶液。精确吸取0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL标准溶液于10 mL试管中，水浴蒸干溶剂。分别向每支试管中加入5%香草醛-冰醋酸0.5 mL、高氯酸1 mL，密封。60℃水浴加热15 min，取出置于冰水中冷却。再向每支试管中加入5 mL冰醋酸溶液，摇匀。于548 nm处测吸光值，以熊果酸质量（μg）为横坐标，以吸光值（OD548）为纵坐标，如图6所示。

图6 三萜标准曲线Fig.6 Triterpenoids standard curve

氨基酸：利用氨基酸分析仪测定。

2 结果与分析

2.1感观评价

口服液的感观是消费者对于口服液的第一认识与评价，所以口服液的感观直接影响了其品质的好坏，本试验由10位经专业训练人士对松茸浓缩口服液的感观进行评价，结果如表2所示。

表2 松茸浓缩口服液性状感官评价Tab.2 The sensory evaluation traits of Tricholoma matsutake condensed oral liquid

由表2可知，每批松茸浓缩口服液的性状良好，感观评价得分均在90分以上，制得的松茸浓缩口服液呈黄褐色，香气浓郁，澄清。

2.2相对密度的检测

松茸浓缩口服液3批样品的相对密度为（1.10± 0.05） g·mL-1。

2.3pH值的检测

分别检测了松茸浓缩口服液3批样品的pH值，制备松茸浓缩口服液的pH值为7.50±0.05。

2.4卫生学检测

经检测松茸浓缩口服液中细菌、霉菌和大肠埃希菌数符合国家标准，未检测出致病菌。

2.5营养成分含量的检测

营养成分的含量决定了口服液的品质，本试验对制得的松茸浓缩口服液中各营养成分含量进行检测，结果见表3和表4。

表3 松茸浓缩口服液各成分含量Tab.3 All ingredients content of Tricholoma matsutake condensed oral liquid

表4 松茸浓缩口服液氨基酸含量Tab.4 The amino acid content of Tricholoma matsutake condensed oral liquid

由表3可以看出，3批次口服液每支中各营养成分含量差异不大，其中多糖的含量为（86.7±0.2）mg/100mL、维生素C含量为（0.50±0.04）mg/100mL、黄酮为 （1.18±0.04） mg/100mL、蛋白质含量为（193.3±0.3） mg/100mL、多酚含量为（0.19±0.02）mg/100mL、三萜含量为（38.3±0.1） mg/100mL。与松茸子实体相比，松茸浓缩口服液较全面地保留了其营养物质与功能成分。

由表4可得，松茸浓缩口服液中除胱氨酸、蛋氨酸砜、半胱氨酸未检测出，检测出17种氨基酸。与文献相比，检测出的氨基酸种类与文献报道基本一致，谷氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸和赖氨酸的含量略小于文献，其他13种氨基酸含量均高于文献报首平均值。

3 小结

松茸中的醇溶性成分（多酚和三萜）最佳提取工艺为乙醇浓度80%，提取时间30 min，提取温度70℃，此时多酚和三萜的得率分别为1.16 mg/100g和0.23 g/100g。

[1]Byeon SE,Lee J,Lee E,et al.Functional activation of macrophages,monocytes and splenic lymphocytes by polysaccharide fraction from Tricholoma matsutake[J].Archives of pharmacal research,2009,32(11):1565-1572.

[2]Ding X,Tang J,Cao M,et al.Structure elucidation and antioxidant activity of a novel polysaccharide isolated from Tricholoma matsutake[J].International Journal of Biological Macromolecules,2010,47(2):271-275.

[3]Kim SS,Lee JS.Process development formycelial growth and polysaccharide production in Tricholoma matsutake liquid culture[J].Journalof Bioscienceand Bioengineering,2010(3): 351-355.

[4]YinXL,YouQH.Immunomodulatory activities of different solvent extracts from Tricholoma matsutake(S.Ito et S.Imai) Singer(Higherbasidiomycetes)on normal mice[J].International Journal of Medicinal Mushrooms,2012,14:547-554.

[5]YouQH,YinXL.Pulsed counter-current ultrasound-assistedextraction and characterization of polysaccharides from Boletus edulis[J].Carbohydrate Polymers,2014(101):379-385.

[6]YouQH,YinXL.Extraction purification and antioxidant activities of polysaccharides from Tricholoma mongolicum Imai[J]. Carbohydrate Polymers,2014,99:1-10.

[7]YouQH,YinXL.Enzyme assisted extraction of polysaccharides from the fruit of Cornus officinalis[J].Carbohydrate Polymers, 2013(98):607-610.

[8]刘培贵，袁明生，王向华.松茸群生物资源及其合理利用与保护[J].自然资源学报，1999（3）：245-252.

The Quality Evaluation of Tricholoma matsutake Condensed Oral Liquid

YAO Hong-wei1,TONG Li-jun2,FU Ting-ting1,XIE Chen-yang1, WU Hong-jun1,ZHAO Feng-chen1,FENG Lei1,ZHANG Xue-yi1
(1.Heilongjiang Forest By－Product and Speciality Research Institute,Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Non－wood Forest Product Development,Mudanjiang 157011,China;2.Heilongjiang Academy of Forestry,Harbin 150081,China)

A preliminary assessment of Tricholoma matsutake condensed oral liquid was made,and their senses,relative density, pH,hygiene indicators and nutrient content were detected.The results showed that the clarity of the mushroom was brown liquid,no turbidity and precipitation,sweet,and the relative density was (1.10±0.05)g·mL－1,pH value was 7.50±0.05,the amount of each device was 10 mL,hygiene testing was up to standard.It contained polysaccharide (86.7±0.2)mg/100mL,vitamin C (0.50±0.04)mg,flavonoids (1.18±0.04)mg/100mL,protein (193.3±0.3)mg/100mL,polyphenol(0.19±0.02) mg/100mL,triterpenoids(38.3±0.1)mg/100mL,and 17 kinds of amino acids were detected with good quality.The study provided a data base for promotion of oral matsutake and further research.

Tricholoma matsutake;condensed oral liquid;quality evaluation

S646.9

A

1003-8310（2015）03-0061-05

10.13629/j.cnki.53－1054.2015.03.015

黑龙江省森林工业总局科技攻关项目（sgzjY2012022）。

么宏伟（1981－），男，在读硕士研究生，助理研究员，研究方向：从事林产化学加工学。E－mail:meme917@163.com

**通信作者：付婷婷（1985－），女，硕士，研究实习员，主要从事林产化学加工学方面研究。E－mail:futingting115@126.com

2015－03－02