用双波长紫外分光光度法测定尿囊素维E乳膏中维生素E的含量

·论著·

用双波长紫外分光光度法测定尿囊素维E乳膏中维生素E的含量

陆松伟，虞慧华，陈方剑，宋洪杰*(第二军医大学长海医院药学部，上海200433)

[摘要]目的：建立测定尿囊素维E乳膏中维生素E含量的双波长紫外分光光度法。方法：采用紫外-可见分光光度计测定维生素E的含量，测定波长为285 nm，参比波长为293.2 nm。结果：维生素E在31.96～95.88 μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为100.80%，RSD为1.21% (n=9)。结论：该方法准确、灵敏，专属性强，重现性好，对尿囊素维E乳膏质量控制标准的提高具有参考意义。

[关键词]维生素E;尿囊素维E乳膏;含量测定；分光光度法，紫外线

[中图分类号]R917[文献标志码]A

DOI：10.5428/pcar20150510

基金项目军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题-外用特色制剂质量标准提升研究(13ZJZ11-3)

作者简介陆松伟(男),主管药师.E-mail:chinalsw2000@sina.com；虞慧华(男)，药师. E-mail:yuhuihua81@126.com;两人为共同第一作者

[收稿日期]2014-07-31

Determination of vitamin E in allantion vitamin E cream by dual wavelength UV-spectrophotometric method

LU SongWei, YU HuiHua, CHEN FangJian, SONG HongJie*(Department of Pharmacy, Changhai Hospital，Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)

ABSTRACT[]Objective: To establish a dual wavelength UV-spectrophotometric method for the determination of vitamin E in allantion vitamin E cream. Methods: The UV-visible spectrophotometer was used for content determination of vitamin E.The detection wavelength and reference wavelength were 285 nm and 293.2 nm,respectively.Results：The linear range of vitamin E was 31.96-95.88 μg/ml(r=0.999 9).The average recovery was 100.80%,RSD was 1.21%(n=9).Conclusion：The method was more accurate,sensitive,specific and reproducible.It could provide the reference for the improvement of the quality standards of allantion vitamin E cream.

[KEY WORDS]vitamin E;allantion vitamin E cream;content determination; spectrophotometry,ultraviolet

[Pharm Care Res，2015，15(5): 354-356]

*通信作者(Corresponding author)：宋洪杰，E-mail:h_jsong@126.com

尿囊素维E乳膏是第二军医大学长海医院药学部自制制剂，临床主要用于皮肤干燥皲裂、鳞屑病及皮肤损伤的修复，其主要成分为尿囊素和维生素E。原质量标准仅测定尿囊素的含量，对反映药效的维生素E未建立质控方法。本研究建立了双波长紫外分光光度法测定尿囊素维E乳膏中维生素E的含量，并采用HPLC法作为比较考察了结果的可靠性，为提高尿囊素维E乳膏的质量控制标准提供参考。

1仪器和试药

1.1仪器XS205DU十万分之一电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)；2550型紫外-可见分光光度计，LC-10ADVP高效液相色谱仪(包括LC-20AD泵、SPD-M20A二极管阵列检测器、CBM-20A控制器和LC solution工作站，日本岛津公司)；DL-720A 超声波清洗器(上海之信仪器有限公司)。

1.2药品和试剂尿囊素维E乳膏(批号140924、141015、141016,第二军医大学长海医院制剂室自制)；维生素E对照品(含量97%，批号110405、130801，浙江医药股份有限公司)；无水乙醇为分析醇，水为蒸馏水。

2方法和结果

2.1溶液的配制(1)对照品储备液：精密称取维生素E对照品(批号110405)0.319 6 g，置100 ml量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为3.196 mg/ml的维生素E对照品储备液。(2)供试品溶液：精密称取尿囊素维E乳膏3.0 g(约相当于维生素E 30 mg)，置烧杯中，加无水乙醇25 ml，置水浴上加热，充分搅拌，使维生素E溶解，置冰浴中放冷后，滤过，滤液置100 ml量瓶中，同法提取3次，滤液并入量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取滤液5 ml，置25 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。(3)阴性对照溶液：精密称取不含维生素E的尿囊素维E乳膏约3.0 g，置烧杯中，按供试品溶液的制备方法制备成阴性对照溶液。

2.2测定波长的选择分别取维生素E对照品溶液与阴性对照溶液于紫外分光光度计，以无水乙醇作为空白校正，在200～400 nm波长范围扫描，结果见图1。

图1　尿囊素维E乳膏的紫外吸收光谱图 Figure 1　UV absorption photogram of allantion vitamin E cream A：维生素E对照品溶液；B：阴性对照溶液； C：供试品溶液；1：285 nm；2:293.2 nm

由图1可见，维生素E对照品在285 nm波长处有紫外吸收峰，但阴性对照品存在一定的干扰，而对供试品溶液的扫描发现在293.2 nm波长外的吸光度值与阴性对照在285 nm波长处的吸光度(A)值相等。所以选定λ1=285 nm，λ2=293.2 nm作为测定波长，即△A=A1-A2。

2.3标准曲线的制备精密量取2.1(1)项下维生素E对照品储备液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml，分别置100 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为31.96、47.94、63.92、79.9、95.88 μg/ml的维生素E对照品溶液。采用紫外-可见分光光度法在285 nm波长处测定A。以A为纵坐标，浓度(c)为横坐标，绘制标准曲线，得到标准曲线方程：A=0.004 3c-0.001 8(r=0.999 9)，线性范围为31.96～95.88 μg/ml。

2.4回收率实验精密称取尿囊素维E乳膏阴性对照品9份，每份3.0 g，分别加入已知浓度的维生素E对照品适量，制备成相当于标示量80%、100%、120%的模拟样品，按2.1(2)项下方法制备，分别在285 nm和293.2 nm波长处测定A值，两者的差值带入线性回归方程计算含量，结果平均回收率为100.80%，RSD为1.2%(n=9)，具体见表1。

2.5精密度实验取63.92 μg/ml维生素E对照品溶液，重复测定5次，日内精密度测定间隔时间为1 h，日间精密度为24 h，记录A值，代入线性回归方程计算含量。结果对照品溶液的日内RSD为0.27%，日间RSD为0.47%(n=5)，表明仪器精密度良好。

2.6稳定性实验取供试品溶液，分别在285 nm和293.2 nm波长处测定A，重复测定5次，每次测定间隔2 h，记录A，两者的差值代入线性回归方程计算含量。结果RSD为0.20%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

表1尿囊素维E乳膏中维生素E的回收率实验结果

Table 1Results of recovery tests of vitamin E

in allantion vitamin E cream

配制浓度(ρB/μg·ml-1)实测浓度(ρB/μg·ml-1)回收率(%)51.1451.89±0.48101.47±0.9463.9264.91±0.71101.55±1.1176.7076.23±0.6299.39±0.81

2.7重复性实验精密称取同一批(批号 141015)尿囊素维E乳膏5份，每份约3.0 g，按2.1(2)项下方法制备供试品溶液，分别在285 nm和293.2 nm波长处测定A，代入线性回归方程计算含量。结果测定RSD为0.26%(n=5)，表明方法的重现性良好。

2.8样品含量测定分别取3个批号的尿囊素维E乳膏约3.0 g，每个批号各取3份，精密称定，按2.1(2)项下方法制备供试品溶液，分别在285 nm和293.2 nm波长处测定A，代入线性回归方程计算含量，并计算相当于标示量的百分比。结果批号为140924、141015、141016的尿囊素维E乳膏中维生素E的含量分别为(10.48±0.16)、(9.83±0.10)、(10.09±0.04) mg/g(n=3)，结果符合含量测定要求。

3用HPLC法验证测定方法的可靠性

3.1色谱条件[1]ACE-121-1546 C18色谱柱(150 mm×4.6mm，5 μm)；流动相：甲醇-水=95∶5，检测波长285 nm，流速1.0 ml/min；柱温：室温；进样量：20 μl。

3.2溶液的配制(1)对照品储备液：按照2.1(1)项下方法制备浓度为3.160 mg/ml的维生素E对照品储备液。(2)供试品溶液：精密称取尿囊素维E乳膏约3.0 g，按照2.1(2)项下方法制备，滤液再用0.45 μm微孔滤膜滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，即得供试品溶液。

3.3标准曲线的制备(1)精密量取3.2(1)项下维生素E对照品储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml，分别置50 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得到系列浓度为31.60、63.20、126.40、189.60、252.80 μg/ml的维生素E对照品溶液。精密吸取对照品系列溶液各20 μl，按照3.1项下色谱条件进样，测定峰面积。以峰面积(A)为纵坐标，浓度(c)为横坐标绘制标准曲线，得到标准曲线方程：A=5 018.1c-24 560，r=0.999 9。结果表明，维生素E在31.60～252.80 μg/ml范围内线性关系良好。(2)精密量取3.2(1)项下维生素E对照品储备液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 ml分别置50 ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得到系列浓度为31.60、63.20、94.80、126.40、189.60 μg/ml的维生素E对照品溶液。采用紫外分光光度法在285 nm波长处测定A。以A为纵坐标，浓度(c)为横坐标，绘制标准曲线，得到标准曲线方程：A=0.004 5c-0.012 1，r=0.999 9。结果表明，维生素E在31.60～189.60 μg/ml范围内线性关系良好。

3.4样品含量测定取3个批号(140924、141015、141016)的尿囊素维E乳膏，按3.2(2)项下方法制备供试品溶液，按3.1项下色谱条件分别进样测定，记录峰面积，计算维生素E的含量分别为(10.54±0.06)、(9.74±0.52)、(9.93±0.26) mg/g(n=3)。按2.8项下方法测定A，计算维生素E的含量分别为(10.48±0.16)、(9.83±0.10)、(10.09±0.04) mg/g(n=3)，结果表明采用双波长紫外分光光度法可以准确地测定尿囊素维E乳膏中维生素E的含量。

4讨论

4.1提取方法的确定维生素E测定的关键在于样品中维生素E的提取，本研究采用无水乙醇热提取，可使维生素E提取完全，再通过冰浴冷却除去乳膏剂中的基质，减少对实验的干扰。

4.2检测方法的确定对于含有维生素E制剂的含量测定方法，经过文献检索[2,3]和《中华人民共和国药典》[4]的收载，主要采用HPLC法和GC法,类似制剂中也有HPLC法同时测定维生素E和尿囊素的报道。尿囊素溶于水，微溶于乙醇，而维生素E是脂溶性维生素，在无水乙醇中易溶，在水中不溶，两种不同极性的药品同时检测，很难做到。本研究采用双波长紫外分光光度法测定维生素E 的含量，最主要的原因是医院制剂尿囊素维E乳膏产量少、批次多，如果采用HPLC法和GC法，时间长，过程也十分繁琐，而采用双波长紫外分光光度法可以做到快速检测。

4.3检测波长的确定根据处方的实际情况，在预实验时参考了本院自制制剂复方锌维乳膏中维生素E的含量测定方法。参考《中华人民共和国药典》2010年版二部附录ⅣA，通过测定一阶导数光谱计算复方锌维乳膏中维生素E的含量，但尿囊素维E乳膏阴性对照按照测定一阶导数的方法存在一定的干扰，影响含量测定，而对维生素E的对照品在200～400 nm波长范围扫描时发现在285 nm波长处有紫外吸收峰，但阴性对照存在一定的干扰，而对供试品溶液的扫描发现在293.2 nm波长的A值与阴性对照在285 nm波长处的A值相等。因此本研究采用简单实用的双波长紫外分光光度法，建立了维生素E 的含量测定方法。经方法学论证，本方法准确、灵敏，专属性强，重现性好，可以快速检测尿囊素维E乳膏中维生素E的含量，对尿囊素维E乳膏质量控制标准的提高具有参考意义。

【参考文献】

[1]陈方剑，陆松伟，宋洪杰，等.用HPLC法测定珍珠维E乳膏中维生素B6和维生素E的含量[J].药学服务与研究，2015，15(3)：201-204.

Chen FangJian,Lu SongWei,Song HongJie,etal.Determination of vitamin B6and vitamin E contents in Pearl vitamin E cream by HPLC method[J].Pharm Care Res,2015,15(3):201-204.In Chinese with English abstract.

[2]王玉，周肖龙，满玉清，等.双波长紫外分光光度法测定复方氢醌乳膏中氢醌的含量[J].药学实践杂志，2007,25(5)：332-333.

Wang Yu,Zhou XiaoLong,Man YuQing,etal.Determination of hydroquinone in compound hydroquinone cream by dual wavelength UV-spectrophotometric method[J].J Pharm Pract,2007,25(5):332-333.In Chinese with English abstract.

[3]何玉川,张亚茹．高效液相色谱法测定维生素E乳中维生素E的含量[J]．中国当代医药，2013,20(21):64-65．

He YuChuan,Zhang YaRu. Determination of vitamin E in vitamin E emulsion by HPLC[J]．China Mod Med,2013,20(21):64-65．In Chinese with English abstract.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典.2010年版 二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：907.

State Pharmacopoeia Committee.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010 ed.Volume 2[S].Beijing：Chinese Medical Science Press,2010：907.In Chinese.

[修回日期]2015-07-05

[本文编辑]阳凌燕