当归芍药散对肝硬化腹水大鼠血管紧张素Ⅱ、内皮素－1的影响

岳晓莉，王成业，姚 瑶，蔡 衡，潘永福，王运来，许 钒

（安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012）

肝硬化腹水是肝硬化失代偿期的重要临床标志，以肝功能损害及门静脉高压为主要临床表现，并常出现严重并发症，属于中医学“臌胀”范畴。其主要病机特点是由多种原因使肝脾肾受损，三脏功能失调，导致气滞、血瘀、水饮互结为病，属本虚标实之证。当归芍药散出自《金匮要略》，最初用于治疗妇科疾病。全方由当归、芍药、川芎、泽泻、茯苓、白术6味药组成。现代研究［1］表明，当归芍药散方中诸药均有保肝或利尿的药理作用：当归有保护肝细胞和促进肝功能恢复的作用；白芍具有显著抗肝损伤作用；川芎具有改善门静脉循环障碍，促进肝脏纤维组织溶解的作用；白术有保肝作用，且利尿作用显著；泽泻有保肝、抗脂肪肝、利尿作用；茯苓具有增强免疫、保肝的作用。因此，当归芍药散抗肝硬化腹水具有良好的实验基础。近年来研究发现，多种血管活性物质与门静脉高压症的形成有关，如血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）、内皮素－1（endothelin－1，ET－1），这些活性物质以不同的方式和途径影响肝脏和门静脉的血流动力学［2－4］。本研究通过观察当归芍药散对肝硬化腹水大鼠血浆AngⅡ、ET－1水平的影响，探讨AngⅡ、ET－1与肝硬化腹水形成的关系。

1 材料

1．1 药物及试剂 当归、芍药、川芎、白术、茯苓、泽泻的饮片，均购自安徽协和成药业饮片有限公司，并经安徽中医药大学药学院金传山教授鉴定，均符合《中华人民共和国药典》（2010年版）项下标准。按原方比例（当归3g，芍药16g，川芎、泽泻各8g、白术、茯苓各4g）称量药材，加10倍量50%乙醇浸泡60min，水浴回流1．5h，冷却后收集滤液；再加8倍量50%乙醇水浴回流1．5h，冷却后收集滤液。合并两次滤液，过滤，水浴浓缩至所需浓度药液。分别制备生药浓度为0．43、0．86、1．72g／mL的当归芍药散低、中、高剂量全方药液［5］。甘利欣：江苏正大天晴药业股份有限公司，批号100702；CCl4：分析纯，江苏强盛化工有限公司，批号2008121；福临门一级菜子油：中粮东海粮油工业有限公司，批号20111010；甲醛：分析纯，上海中试化工总公司，批号20101010；苯巴比妥片：上海信谊药厂有限公司，国药准字H31022038；无水乙醚：分析纯，上海中试化工总公司，批号20101010。

1．2 仪器 MP6001电子天平：上海恒平科学仪器有限公司；TGL－16B高速台式离心机：上海安亭科学仪器厂；岛津全自动生化分析仪；Eppendorf移液器；Labsystem Multiskan－MK2酶标仪；CA－7000全自动血液凝固分析仪：希森美康医用电子上海有限公司。

1．3 动物 SD大鼠，60只，雄性，SPF级，体质量（220±20）g，由江苏南京青龙山动物繁殖场提供，生产许可证号为SCXK（苏）2009－0001。

2 方法

2．1 模型复制、分组及给药 将雄性SD大鼠随机分为正常组，模型组，甘利欣组，当归芍药散低、中、高剂量组，每组10只。适应性饲养1周后，除正常组外，其余动物给予35%苯巴比妥溶液作为饮用水［6］，1周后恢复正常饮水。参考文献［7］的方法，给予以下浓度CCl4腹腔注射复制模型：第2～3周为12%CCl4油溶液，第4～5周为14%CCl4油溶液，第6～14周为16%CCl4油溶液，每周2次，给药剂量为1mL／kg。正常组给予等容积生理盐水。当归芍药散低、中、高剂量组在复制模型同时分别灌胃给予当归芍药散低剂量（4．3g／kg）、中剂量（8．6 g／kg）、高剂量（17．2g／kg）药液，给药容积均为10 mL／kg。甘利欣组给予甘利欣药液（相当于甘草酸二铵0．005 25g／kg），每日1次。连续给药13周，末次给药12h后，所有大鼠禁食不禁水，于次日乙醚麻醉，取材。

2．2 检测指标

2．2．1 凝血酶原时间检测 于第14周末，大鼠乙醚麻醉后，腹主动脉取血，加入枸橼酸钠抗凝管，室温放置30min，3 500r／min，离心10min，分离血浆，全自动血液凝固分析仪检测血浆凝血酶原时间。

2．2．2 血浆AngⅡ、ET－1检测 大鼠乙醚麻醉，腹主动脉取血，肝素钠抗凝，室温放置30min，3 500 r／min，离心10min，分离血浆。酶联免疫吸附试验法检测血浆AngⅡ、ET－1水平。

2．3 统计学方法 采用SPSS 11．0软件进行统计学分析。连续型变量采用“均数±标准差（±s）”进行统计学描述。多组间均数比较，采用单因素方差分析；组间均数多重比较，采用LSD法。P＜0．05为差异具有统计学意义。

3 结果

与正常组比较，模型组大鼠凝血酶原时间显著延长（P＜0．05），血浆 AngⅡ、ET－1水平显著升高（P＜0．05）。与模型组比较，甘利欣组、当归芍药散各剂量组凝血酶原时间均显著缩短（P＜0．05），血浆AngⅡ、ET－1水平显著降低（P＜0．05）。当归芍药散各剂量组及甘利欣组之间凝血酶原时间和血浆AngⅡ、ET－1水平相比较，差异均无统计学意义（P＞0．05）。见表1。

4 讨论

肝硬化腹水因肝、脾、肾三脏功能失调，气滞血瘀，血行不利，水液积于腹中而成，水停为标，血虚为本。当归芍药散重用白芍以柔肝血，缓急止痛，佐以川芎疏肝理气，与当归配合又可以行血活血；白术、茯苓崇土健脾，运化水湿，泽泻淡渗利水。课题组前期研究［7］发现，当归芍药散可以明显减少肝硬化腹水模型大鼠腹水生成以及延缓肝脏病理改变过程，改善肝硬化腹水大鼠肝功能，具有保肝护肝之效。

表1 各组凝血酶原时间、血浆AngⅡ和ET－1水平比较（±s，n＝10）

表1 各组凝血酶原时间、血浆AngⅡ和ET－1水平比较（±s，n＝10）

注：同列含有相同右上标符号的组别相比较，P＞0．05；同列不含相同右上标符号的组别相比较，P＜0．05。

组 别 凝血酶原时间／s AngⅡ／（ng／L）ET－1／（ng／L）正 常 10．95±0．78＊ 31．49±2．84＊ 19．60±2．16＊模 型 12．44±1．29＃ 37．58±6．16＃ 24．49±4．26＃甘利欣 10．96±0．99＊ 34．44±4．77＊＃ 21．43±2．88＊当归芍药散低剂量 11．02±0．89＊ 32．54±5．66＊ 19．16±3．17＊当归芍药散中剂量 10．93±1．20＊ 31．72±5．83＊ 19．07±2．78＊当归芍药散高剂量 10．81±0．62＊ 30．67±3．56＊ 18．76±3．55＊

凝血酶原时间主要由肝脏合成的凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平决定，与肝细胞受损程度呈正相关。肝硬化代偿期凝血酶原时间正常，失代偿期则有不同程度延长。实验结果表明，当归芍药散高、中、低剂量组凝血酶原时间明显缩短，表明当归芍药散可以改善肝功能受损程度。

AngⅡ广泛分布于下丘脑、正中隆起、脑干等中枢神经系统，是肾素－血管紧张素－醛固酮系统中最有生物活性的物质，是一种强收缩血管活性因子，其生理作用主要是促进肾上腺皮质球状带释放醛固酮，促进肾小管对钠和水的重吸收，造成机体钠水潴留。本实验中，当归芍药散各药物组AngⅡ均显著性降低，表明当归芍药散可能通过影响肾素－血管紧张素－醛固酮系统而使血浆AngⅡ降低。AngⅡ的减少，可以减少肾脏对水的重吸收，减轻水钠潴留，从而达到消除腹水的目的。

ET是由21个氨基酸组成的多肽，是目前已知的体内最强的缩血管物质。ET有3种异构体：ET－1、ET－2和 ET－3，其中 ET－1缩血管作用最强。ET－1的主要合成部位是已激活的肝脏星形细胞，与肝脏疾病及其并发症有重要关系，且与肝脏门静脉系统有重要的生物学效应［8－9］。ET－1在门脉高压血管病变过程中起关键作用［10－12］：其参与门脉高压血流动力学的形成，参与腹水的形成，肝硬化患者出现腹水时，血浆ET－1明显升高，但其机制尚不明确。本实验中，模型组大鼠血浆ET－1较正常组大鼠明显升高，可能是因为肝硬化腹水模型大鼠的肝脏受损，肝功能减退，降低了ET－1的清除能力；当归芍药散各剂量组ET－1水平明显降低，且呈现剂量依赖性，表明当归芍药散可能通过改善肝硬化腹水大鼠肝功能水平，增强ET－1的清除能力，从而调节门脉高压系统，减少腹水生成。

本实验中当归芍药散各给药组均可以降低肝硬化腹水模型大鼠血浆AngⅡ、ET－1水平，表明当归芍药散对肝硬化腹水的治疗作用可能是通过降低AngⅡ、ET－1而实现的。

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