牛奶中链霉素&双氢链霉素及卡那霉素快速检测

姜芳，李梅，王丹慧，宋娜娜，侯令芹，刘江梅，王丹

（内蒙古蒙牛乳业（北京）有限责任公司，北京101107）

0 引言

链霉素&双氢链霉素及卡那霉素残留通过食物链进入人体后累积可以导致细菌耐药性，因此，各国都对其作出限量要求，中华人民共和国农业部公告第235号-2002动物性食品中兽药最高残留限量链霉素200 ng/mL、双氢链霉素200 ng/mL、卡那霉素100 ng/mL。链霉素、双氢链霉素、卡那霉素残留量的常规检测方法主要有微生物法[1]、高效液相色谱技术[2-6]、液相色谱-质谱联用技术（LC－MS／MS）[7]、酶联免疫吸附测定[8-11]等，由于复杂的仪器设备和繁琐的过程以及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控大量样本的筛查。本文的目的就是介绍快速灵敏地检测牛奶中链霉素&双氢链霉素及卡那霉素残留的方法--反竞争抑制免疫层析检测法，该方法为定性检测，其特点是简单快速、特异敏感，并且同时出具多个结果。

1 实验

1.1 材料和设备

鲜奶样,12%复原乳,生乳脂肪层的奶样。

试剂：双氧水,碳酸氢钠,青霉素，糊精，三聚氰胺，氯化铵，深圳易瑞公司链霉素&双氢链霉素及卡那霉素二联定性检测试纸条。

仪器涡旋混合仪，加热孵育器，单移液器（20-200 μL），多通道移液器（30～300 μL），读数仪。

2 方法

2.1 干扰物质的配制备

分别取不含目标检测物质与含目标检测物质的生乳做本底，分别制备出质量浓度为20 mg/L双氧水掺假样品、质量分数为0.1%碳酸氢钠掺假样品、100 μg/kg青霉素抗生素掺假样品、0.2%糊精掺假样品、0.1%三聚氰胺掺假样品、0.1%铵盐掺假样品。

2.2 具体检测步骤

（1）调节温育器温度至40℃，并稳定在（40±1）℃；

（2）实验前将试剂和样品恢复至室温；

（3）取出所需要数量的试剂微孔，吸取200 μL待测样品于试剂微孔中，5～10次抽吸，混合均匀；

（4）迅速将试剂微孔置于温育器中进行第一步温育，温育温度为（40±1）℃，时间为 3 min；

（5）第一步温育结束后，取出所需数量试纸条,海绵端朝下,插入到微孔中开始第二步温育，温育温度为（40±1）℃，时间为 6 min；

（6）第二步温育结束后，从微孔中取出试纸条，轻轻刮去测试条下端的吸水海绵,利用读数仪判读结果（结果判读必须在5 min内完成）。

2.3 结果判定

读数仪判读结果：阴性为R＞1.1；阳性为R≤1.1。

3 结果与分析

3.1 检出限实验

对生乳样品本底、检出限点及检出限附近点进行检测，每个点进行平行样检测，检测结果如表1所示。

表1 链霉素&双氢链霉素及卡那霉素快速检测试纸条检出限实验对比结果

3.2 重复性实验

使用二联法、链霉素金标快速检测条法、卡那霉素素金标快速检测条法对原奶样本进行检测，检测点质量浓度为生乳（空白实验）、120 ng/mL，2400 ng/mL每个点做10平行，符合率为100%。

3.3 干扰实验

3.3.1 阴性干扰

取不含目标检测物质的生乳做本底，加入如下干扰物质检测，检测情况如表2所示。

3.3.2 阳性干扰

取含目标检测物质的样品（生乳）做本底，二联法、链霉素金标快速检测条法、卡那霉素素金标快速检测条法均对加标质量浓度为200 ng/mL的链霉素、双氢链霉素、卡那霉素的样品进行检测,在制备的阳性样本中加入干扰物质，检测结果如表3所示。

表2 链霉素&双氢链霉素及卡那霉素快速检测试纸条阴性抗干扰性能对比结果

表3 试纸条阳性抗干扰性能对比结果

3.4 批量检验结果

连续15日使用链霉素&双氢链霉素及卡那霉素快速检测试纸条对生乳样品进行检测，每天检测20个生乳样品，检测过程中所用链霉素&双氢链霉素及卡那霉素快速检测试纸条未出现失效、不走线等不良情况。

4 结论

由上述可以看出，链霉素&双氢链霉素及卡那霉素快速检测反竞争抑制免疫层析检测法具有以下优点：

（1）在检测过程中无需前处理，直接检测，操作简便；

（2）整个检测过程用时9～10 min，用时短；

（3）对阴性生乳、阳性加标样品分别做了10次重复性检测，检测结果相同，重复性好。

（4）分别对阴性生乳、阳性加标样品做了8类物质的抗干扰实验，检测结果一致，抗干扰能力强。

综上所述，采用反竞争抑制免疫层析检测法，微孔内含链霉素&双氢链霉素及卡那霉素特异性抗体，试纸条检测区T1包被卡那霉素抗原，T2包被链霉素&双氢链霉素抗原，控制区（C）包被二抗，样品中的链霉素&双氢链霉素及卡那霉素和试纸条上预包被的抗体，抑制抗原和链霉素&双氢链霉素及卡那霉素抗体的结合。对牛奶样品中链霉素&双氢链霉素及卡那霉

素做快速定性筛选。运用此方法对生乳中链霉素&双氢链霉素及卡那霉素残留量进行筛选，与高效液相色谱技术、高效液相色谱串联质谱、液相色谱-质谱联用技术（LC－MS／MS）、氮磷气相色谱检测法、薄层色谱、气相色谱的检测技术相比上述方法由于复杂的仪器设备和繁琐的过程以及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控大量样本的筛查，而此法样本前处理简单、仪器设备投资少，检测成本低，可作为链霉素&双氢链霉素及卡那霉素药物残留快速筛选的首选方法。对于乳品企业，此法能够保障到厂原奶及时出具检测结果，且能够满足对到厂生乳及定容奶仓的定性筛选排查，可将仪器法作为此法的确认法。

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