饲料中喹乙醇的测定提取方法改进

刘雪红， 侯 颖， 乔 颖， 李 娜， 宋 平， 戚 骥， 李富荣， 陈 玲

（大连市兽药饲料监察所，辽宁大连 116037）

喹乙醇又称喹酰胺醇，具有促进畜禽对饲料的消化利用，提高生长速度等作用。喹乙醇在配合饲料、浓缩饲料中添加量一般为50～400 mg/kg，在添加剂预混合饲料中添加量一般为1000 mg/kg。目前，采用国家标准方法GB/T 8381.7—2009饲料中喹乙醇的测定（高效液相色谱法）进行检测。检测中发现，按照标准规定的取样量和提取液量进行添加回收实验，当添加浓度低于100 mg/kg时，回收率及重复性均能满足要求；当添加浓度高于100 mg/kg时，回收率低且重复性差。因此，在实际样品检测中，很可能将饲料产品错判。本实验考虑取样均匀性及提取液体积，改进了样品处理方法。通过减少取样量，增加提取液体积，提高了检测准确性和重复性。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备 电子天平RD-200，德国Sartorius公司；超声波清洗器 KQ-250B，昆山市超声仪器有限公司；往复振荡摇床KS501，德国IKA公司；低速台式大容量离心机RJ-TDL-40B，无锡瑞江分析仪器厂；数显强力涡旋混合器MS3，德国IKA公司；超高效液相色谱仪，美国Waters公司；色谱柱 ACQUITY BEH C18：2.1 mm×100 mm，1.7 μm，Waters公司；固相萃取柱 Oasis HLB 1 mL 30 mg。

1.2 药品与试剂

1.2.1 标准品 喹乙醇，批号H0061103，含量99.5%，中国兽医药品监察所。

1.2.2 供试品

1.2.2.1 空白样品 乳猪配合饲料、育肥猪浓缩饲料、1%仔猪复合预混料，均为辽宁禾丰牧业股份有限公司产品，经检测均不含喹乙醇。

1.2.2.2 空白添加样品 分别按照 50、100、200、400、1000 mg/kg的比例在空白样品中添加喹乙醇标准品，混匀。

1.2.3 试剂 甲醇，色谱纯；盐酸，分析纯；水为符合GB/T 6682规定的一级水。 提取液：甲醇∶水=5∶95。

1.2.4 标准贮备液的配制 准确称取喹乙醇标准品50 mg，于50 mL棕色容量瓶中，加30 mL水超声溶解，冷却至室温，定容至刻度摇匀，即为1000 μg/mL的标准贮备液。4℃保存，有效期为1个月。

1.2.5 标准工作液的配制 精密量取标准贮备液1 mL置100 mL容量瓶中，以水定容至刻度。混匀，制成浓度为10 μg/mL的标准工作液。

1.3 测定方法

1.3.1 标准方法 称取5 g试样于具塞锥形瓶中，加入50 mL提取液，具塞置入摇床中，室温下恒温振荡器避光振荡45 min（110 r/min）。提取液在3500 r/min下离心10 min，上清液经滤纸过滤，滤液作为SPE小柱净化使用。将滤液2 mL加入活化好的SPE小柱，分别用2 mL淋洗液1、淋洗液2、淋洗液3淋洗小柱，并将小柱吹干。最后用2 mL洗脱液洗脱。洗脱液过0.22 μm有机相滤膜，滤液上机测定。

1.3.2 改进方法 称取适量试样 （按表1提取条件）于具塞锥形瓶中，加入提取液，具塞置入摇床中，其余步骤同标准方法。

表1 提取条件

1.3.3 液相色谱条件 柱温：30℃；进样量：5 μL；检测波长260 nm；梯度洗脱程序见表2。

表2 梯度洗脱程序

2 结果

2.1 回收率及重复性实验 采用标准添加法，在空白样品中分别添加不同浓度（50、100、200、400、1000 mg/kg）喹乙醇进行回收率实验，每个添加浓度进行6次重复测定，求相对标准偏差。分别按1.3.1和1.3.2进行实验，结果见表3和表4。从表3可以看出，当添加量为50 mg/kg时，回收率为90%，重复性好；当添加量大于50 mg/kg时，回收率为15%～75%，重复性差，相对标准偏差大于15%。从表4可以看出，改进方法后回收率为90%～101%，重复性好，相对标准偏差均小于5%。

表3 标准方法添加回收实验结果

表4 改进方法添加回收实验结果

2.2 实际样品检测 由表5可见，喹乙醇含量较低（100 mg/kg）的样品，两种提取方法的测定值虽然不一致，但不影响结果判定（配合料1和配合料2）；喹乙醇含量较高（大于100 mg/kg）的样品，两种提取方法的测定值不一致，影响结果判定（浓缩料1和浓缩料2）。

表5 实际样品测定结果

3 结论

本实验结果表明，检测饲料中喹乙醇含量时，应根据喹乙醇的添加量大小，来决定取样量和提取液体积。采用改进的方法进行检测，提高了样品的回收率和重复性。

[1]国家质量监督检验检疫.GB/T 8381.7-2009[S].饲料中喹乙醇的测定-高效液相色谱法.北京：中国标准出版社，2009-09-01.

[2]中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典（一部）[S].二〇一〇年版.北京：中国农业出版社.