P16、Ki67及HPV联合检测在宫颈鳞状上皮内病变的诊断意义

陈芳芳，李卫东，张艳丽，高亮，孙汝亮

(深圳市宝安区妇幼保健院病理科，广东深圳518133)

P16、Ki67及HPV联合检测在宫颈鳞状上皮内病变的诊断意义

陈芳芳，李卫东，张艳丽，高亮，孙汝亮

(深圳市宝安区妇幼保健院病理科，广东深圳518133)

目的探讨P16、Ki67及HPV联合检测在宫颈鳞状上皮内病变的诊断意义。方法随机选择不同级别的宫颈鳞状上皮内病变患者108例作为研究组，另选取40例健康体检者作为对照组，采用免疫组织化学方法检测两组患者宫颈黏膜组织中P16、Ki67及HPV阳性表达情况，并分析P16、Ki67及HPV检测在宫颈鳞状上皮内病变诊断及鉴别诊断中的意义。结果与正常宫颈相比，宫颈鳞状上皮内病变组织中P16、Ki67及HPV的表达差异有显著性，均具有统计学意义(P＞0.05);P16、Ki67及HPV三者联合诊断与单个诊断相比，具有较高的敏感性、特异性及准确率。结论P16、Ki67及HPV联合检测可有提高宫颈鳞状上皮内病变的诊断准确率，对宫颈鳞状上皮内病变的诊断及鉴别具有重要的意义。

P16;Ki67;HPV;宫颈鳞状上皮内病变

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选择2013年5月－2014年6月期间收治的宫颈鳞状上皮内病变患者108例作为研究组，平均年龄(41.4±6.7)岁，其中CINⅠ54例、CINⅡ41例，CINⅢ13例。另选取40例健康体检者作为对照组，平均年龄(40.9±6.5)岁，取两组所有患者的宫颈黏膜组织制作切片标本。由两名有经验的病理医师采取双盲法取一致意见作为诊断结果。

1.2 试剂与方法

P16、Ki67单克隆抗体及试剂盒(上海强耀生物科技有限公司生产)，HPV多克隆抗体及DAB显色试剂(福州迈新生物开发公司)。

采用免疫组化Envision法，取两组组织标本，常规脱蜡后脱水，进行HE染色，作P16、Ki67及HPV抗体标记，应用自动免疫组化仪进行免疫组化，严格按照仪器说明书进行操作。用已知阳性切片做阳性对照，用PBS代替一抗做阴性对照。

1.3 结果判断

根据阳性细胞分布P16阳性细胞数＜5%为阴性，5%～25%为弱阳性，26%～75%为中阳性，＞75%为强阳性。为了方便统计分析，将P16＞25%均视为阳性。Ki67表达根据阳性细胞在上皮的分布分类，Ki67阳性表达局限于上皮的基底层为阴性，超过基底层25%为阳性。阳性百分率=阳性细胞数/计数细胞总数。HPV检测细胞核出现棕黄色细颗粒为阳性反应。

1.4 统计学方法

本研究所有数据均采用SPSS分析17.0统计学软件进行统计处理，计数资料采用卡方检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

P16、Ki67在正常宫颈黏膜组织阳性率＜5%，呈阴性。HPV在正常宫颈黏膜组织中无阳性表达。但P16、Ki67及HPV在宫颈鳞状上皮内病变组织中均有不同程度的阳性表达，并且表达强度和阳性率随着宫颈病变程度的加重不断升高。与正常宫颈相比，宫颈鳞状上皮内病变组织中P16、Ki67及HPV的表达差异有显著性，均具有统计学意义(P＞0.05)，见表1。此外，分析P16和Ki67单个或联合诊断宫颈鳞状上皮内病变的应用价值结果可知，P16、Ki67及HPV三者联合诊断具有较高的敏感性、特异性，准确率高，见表2。

表1 P16、K i67及HPV在不同宫颈病变中阳性表达(%)

表2 P16、K i67及HPV诊断的应用价值(n=108，%)

3 讨论

抑癌基因p16所编码的P16蛋白通过抑制spl与启动子hTERT的结合，诱导染色体端粒缩短，参与启动细胞衰老过程，是宫颈癌及其癌前病变早期诊断的主要标记物。国外已有研究报道［1］，P16蛋白与宫颈鳞状上皮内病变关系密切，P16蛋白会在宫颈鳞状上皮内病变过程中过表达，且表达强度和阳性表达率会随着宫颈鳞状上皮内病变程度的加重而升高，本研究结果显示，P16在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中的阳性表达率呈逐渐上升趋势，这一结果与文献结论一致。Ki67作为反应宫颈上皮细胞异型性的标志物，具有较高的灵敏性。在既往研究中发现［2］，Ki67在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌组织中的表达水平逐步升高。本研究发现在正常宫颈及CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中Ki67的阳性表达也存在着一定差异。此外，HPV感染是宫颈鳞状细胞癌和上皮内瘤发生的必要因素，有学者认为HPV是导致发生宫颈鳞状上皮内病变的分子学基础［3］。

目前我国国内，已有采用P16和Ki67联合检测诊断宫颈鳞状细胞癌和上皮内瘤的研究［4］，且结果较为理想，可有效提高诊断及分型的正确率。本研究在此基础上，采用P16、Ki67及HPV三者联合检测，与单独检测结果相比，三者联合敏感性及特异性高，诊断准确率可达96.9%。表明P16、Ki67及HPV联合检测可有提高宫颈鳞状上皮内病变的诊断准确率，对宫颈鳞状上皮内病变的诊断及鉴别具有重要的意义。

［1］Mathur SP，Mathur RS，Rust PF，et al.Human papilloma virus(HPV)-E6/E7 and epidermal growth factor receptor (EGFR)protein levels in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia(CIN)［J］.Am J Reprod Immunol，2001，46(4):280-287.

［2］ 谭伟坚，张晓薇，林仲秋，等.宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中cyclin D1、Ki-67的表达及其意义［J］.中国病理生理杂志，2010，26(2):390-392.

［3］梅松原，韩秋丽，崔艳梅，等.Skp2、P27、Ki67在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的表达及临床意义［J］.航空航天医学杂志，2011，22(7):805-807.

［4］丛玲华，戴珍珍，方来福，等.EGFR、P16、Ki67和P53在宫颈鳞状上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌中表达的临床意义［J］.中国现代医生，2013，51(2):87-90.

The diagnostic significance of P16，Ki67 and HPV exam ination in the cervical squamous intraepithelial lesions

CHEN Fangfang，LIWeidong，ZHANG Yanli，GAO Liang，SUN Ruliang
(Department of Pathology，Shenzhen Baoan District Maternity and Child Care，Shenzhen，Guangdong Province，China，518133)

ObjectiveTo investigate the diagnostic significance of P16，Ki67 and HPV positivity in the cervical squamous intraepithelial lesions.Methods108 cases of different cervical squamous intraepithelial lesions were selected randomly as a research group，another 40 cases of healthy physical examination were selected as control group.The p16，Ki67 and HPV positivity in the cervicalmucosa tissueswere detected by immunohistochemicalmethod，while their positivity in the diagnosis and differential diagnosis of cervical squamous intraepithelial lesions were analyzed.ResultsCompared with the control group，the expression of P16，Ki67 and HPV in the research group had significant difference(P＞0.05).Combination of P16，Ki67 and HPV had higher sensitivity，specificity and accuracy.ConclusionThe combining positivity of P16，Ki67 and HPV could improve the diagnosis accuracy of cervical squamous intraepithelial lesions.

P16;Ki67;HPV;Cervical squamous intraepithelial lesions

R737.33

A

1673-2995(2015)03-0178-02

2014-09-20)

陈芳芳(1977－)，女(汉族)，主治医师，硕士.