rLj-RGD3对正常大鼠及角叉菜胶致尾混合血栓大鼠血液流变学的影响

吕莉，王继红，张艳，邵钫钰，蒋隽舒，王跃，肖蓉，李庆伟*

(1.辽宁师范大学海洋生物功能基因与蛋白质组学研究所，辽宁大连116029;2.大连医科大学药理教研室，辽宁大连116044)

rLj-RGD3对正常大鼠及角叉菜胶致尾混合血栓大鼠血液流变学的影响

吕莉1，2，王继红1，张艳1，邵钫钰2，蒋隽舒2，王跃2，肖蓉1，李庆伟1*

(1.辽宁师范大学海洋生物功能基因与蛋白质组学研究所，辽宁大连116029;2.大连医科大学药理教研室，辽宁大连116044)

目的研究rLj-RGD3对正常大鼠及角叉菜胶致尾血栓模型大鼠的血液流变学的影响。方法测定给予不同剂量rLj-RGD3后正常大鼠全血和血浆黏度，以评价rLj-RGD3对正常大鼠血液流变学的影响;以角叉菜胶诱导大鼠尾部血栓模型，测定给予不同剂量rLj-RGD3后血栓模型大鼠全血和血浆黏度，以评价rLj-RGD3对血栓大鼠血液流变学的影响。结果与空白组相比，rLj-RGD3对全血黏度及血浆黏度无明显影响;与血栓模型组相比，rLj-RGD3呈剂量依赖性地降低全血比黏度浆和血浆比黏度的升高。结论rLj-RGD3可降低血栓模型大鼠血黏度，而对正常大鼠血液黏度无明显影响。

rLj-RGD3;角叉菜胶;血液流变学;全血黏度;血浆黏度

rLj-RGD3是来源于海洋洄游鱼类日本七鳃鳗口腔腺的重组RGD毒素肽，既往研究表明rLj-RGD3和其他RGD毒素肽一样具有抗血小板聚集活性［1］，提示其可能具有抗血栓作用，有望开发成为抗血栓性疾病的药物。血栓性疾病患者常伴有血液黏滞度升高等血液流变学指标的改变，本研究旨在探讨 rLj-RGD3对正常大鼠及血栓模型大鼠的血液流变学指标的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

rLj-RGD3注射液(由辽宁师范大学海洋生物功能基因与蛋白质组学研究所提供)，己酮可可碱注射液(沈阳第一制药厂)，角叉菜胶(Carrageenan，TypeⅠ，Sigma公司)，肝素钠(北京奥博星生物技术有限责任公司)，氨基甲酸乙酯(北京庆盛达化工技术有限公司)，枸橼酸钠(浙江杭州萧山化学试剂厂)。

LBY-N6血液流变仪(北京普利生仪器公司)。

1.2 实验动物及分组

雄性SD大鼠，体质量(200±20)g，清洁级，大连医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK(辽) 2008-0002，饲养温度(20±1)℃，湿度30% ～50%。随机分为6组(每组8只):NS空白对照组，rLj-RGD3 12.5、25.0、50.0、100.0μg/kg组，以及阳性对照药己酮可可碱100.0μg/kg组。

1.3 Lj-RGD3对正常大鼠血液流变学的影响

大鼠腹腔注射乌拉坦1 g/kg麻醉，腹腔注射各受试药物后10 min，自下腔静脉采血3 mL。其中1 mL以25 U/mL肝素抗凝后于血液流变仪测定全血黏度，余血以3 000 rpm离心10min，取血浆测定血浆黏度［2-3］。以空白对照组为基准，计算各组全血及血浆黏度的抑制率。

1.4 rLj-RGD3对角叉菜胶致尾混合血栓模型大鼠血液流变学的影响

大鼠每日一次腹腔注射连续给药5 d，于给药第3天除空白对照组外均经脚趾皮下注射2%角叉菜胶10 mg/kg复制尾混合血栓模型［4］。第5日(注射角叉菜胶后48 h)测定尾血栓长度，并于给药后10 min按1.3项下取血、测定全血黏度及血浆黏度。并以模型组为基准，计算全血及血浆黏度的抑制率。

1.5 统计方法

2 结果

2.1 rLj-RGD3对正常大鼠血液流变学的影响

由表1可知，与空白对照组相比，腹腔注射不同剂量rLj-RGD3对正常大鼠高、中、低切变率时的全血比黏度及血浆黏度值均无明显变化(P＞0.05)，可见rLj-RGD3对正常大鼠血液流变学指标无影响。

2.2 rLj-RGD3对角叉菜胶致大鼠尾混合血栓形成的影响

由图1可知，大鼠足趾皮下注射角叉菜胶后48 h大鼠尾部血栓形成，均出现不同程度的淤血、黑尾，以模型组黑尾最长，为(16.0±2.5)cm，其与空白组(无黑尾)相比差别显著(P＜0.01)，表明尾混合血栓模型建立成功。rLj-RGD3呈剂量依赖性缩短黑尾长度，可见rLj-RGD3可抑制角叉菜胶导致的大鼠尾部混合血栓的形成，具有强大抗血栓形成作用。

图1 rLj-RGD3对角叉菜胶致大鼠尾混合血栓形成的影响

2.3 rLj-RGD3对角叉菜胶致尾混合血栓模型大鼠血液流变学的影响

如表2所示，与空白对照组相比，模型组大鼠全血比黏度与血浆比黏度均有升高，而与血栓模型大鼠相比，rLj-RGD3可呈剂量依赖性抑制血栓模型大鼠血黏度指标的升高。可见rLj-RGD3具有显著降低血栓状态时血液黏滞度的作用。

表1 腹腔注射不同剂量rLj-RGD3对正常大鼠血液黏度的影响(±s，n=8)

表1 腹腔注射不同剂量rLj-RGD3对正常大鼠血液黏度的影响(±s，n=8)

与NS对照组相比:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别全血低切变率(5/s)抑制率(%)全血中切变率(60/s)抑制率(%)全血高切变率(200/s)抑制率(%)血浆比黏度抑制率(%) 0－rLj-RGD3 12.5μg/kg10.39±2.2511.34.88±0.6710.14.34±0.518.81.10±0.113.5 rLj-RGD3 25.0μg/kg10.65±2.859.15.01±1.187.74.24±0.7210.91.20±0.15－5.3 rLj-RGD3 50.0μg/kg11.09±1.665.44.93±0.259.24.36±0.258.41.12±0.131.8 rLj-RGD3 100.0μg/kg 11.53±3.021.65.33±1.091.84.57±0.794.01.19±0.08－4.4己酮可可碱100 mg/kg9.27±0.50＊＊20.94.12±0.23＊＊24.13.52±0.11＊＊26.11.01±0.01*NS对照组11.72±3.09－5.43±0.44－4.76±0.28－1.14±0.1 11.4

表2 rL j-RGD3对角叉菜胶致尾混合血栓大鼠血液流变学的影响(±s，n=8)

表2 rL j-RGD3对角叉菜胶致尾混合血栓大鼠血液流变学的影响(±s，n=8)

与NS对照组相比△P＜0.01;与模型组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

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3 讨论

人体血液黏滞度的升高与血栓性疾病的发生有关，减低血液黏滞度可有效降低心脑血管疾病的发生及发展。本研究结果表明，rLj-RGD3可降低血栓模型大鼠血黏度，而对正常大鼠血液黏度无明显影响，即rLj-RGD3选择性作用于易栓的高黏状态，提示应用rLj-RGD3治疗血栓性疾病针对性更强而且安全。

rLj-RGD3降低血栓状态时低切变率的全血黏度，说明其可降低红细胞聚集性;而其降低高切变率全血黏度，说明其还能增强血栓状态时红细胞的变形能力［5］。血浆黏度的降低，说明rLj-RGD3对血液中非细胞成分也有改善作用。

总之，rLj-RGD3作为RGD毒素蛋白因其分子中含有RGD模体而具有抗血小板活性［1］，加之能选择性地降低血栓状态时的血液黏度、改善血液流变学，提示其必将具有良好的治疗血栓性疾病应用前景。但其选择性降黏作用的分子药理学机制，尚有待进一步研究。

［1］Wang Jihong，Han Xiaoxi，Yang H，et al.A novel RGD-toxin protein，Lj-RGD3，from the buccal gland secretion of Lampetra japonica impacts diverse biological activities［J］.Biochimie，2010，92(10):1387-1396.

［2］韩国柱，李欣燕，吕莉，等.Antithrombotic effects of Veratrum nigrum var.Vssuriense alkaloids［J］.中草药，2003，34 (12):1107-1110.

［3］ 杨静娴，戴淑芳，韩国柱，等.乌苏里藜芦碱对家兔和大鼠血液流变学及小鼠出血时间的影响［J］.中药药理与临床，1998，14(6):22-24.

［4］ 谢德芳，方成，王春维，等.蚓激酶抗角叉菜胶诱导大鼠血栓形成作用［J］.中国医药导刊，2013，15(11):1877-1880.

［5］ 杨晓静，张泓巍，张大伟，等.胶陀螺对血瘀动物血液流变学的影响［J］.中草药，1996，27(6):358-359.

The hemorrheology effect of rLj-RGD3 in normal rats and carrageenan induced tailm ixed thrombosismodel rats

LLi1，2，WANG Jihong1，ZHANG Yan1，SHAO Fangyu2，JIANG Junshu2，WANG Yue2，XIAO Rong1，LIQingwei1*
(1.Department of Biological Sciences，Liaoning Normal University，Dalian，Liaoning Province，116029;2.Department of Pharmacology，Dalian Medical University，Dalian，Liaoning Province，116044，China)

ObjectiveTo study the hemorrheology effects of rLj-RGD3 in normal rats and carrageenan induced tail mixed thrombosis model rats.MethodsThe carrageenan induced rat tail mixed thrombosis model was established.Blood viscosity and plasma viscosity of normal rats and thrombosismodel rats were determined after administered rLj-RGD3 in order to evaluate its hemorrheology effect in normal rats and thrombosismodel rats.Results Compared with blank control group，rLj-RGD3 had no effect on blood viscosity and plasma viscosity in normal rats.In comparison with thrombosismodel group，rats receiving i.p rLj-RGD3 showed a significant and dose-dependent inhibition on the increasing of blood viscosity and plasma viscosity.ConclusionrLj-RGD3 decreases the blood viscosity and plasma viscosity of thrombosismodel rats，but has no effect on that of normal rats.

rLj-RGD3;carrageenan;hemorrheology;blood viscosity;plasma viscosity

R285

A

1673-2995(2015)03-0184-03

2015-01-14)

国家高技术研究发展863计划资助项目(SS2014AA091602);国家自然科学基金(81202455);国家海洋公益项目(201305016-5).

吕莉(1972－)，女(汉族)，副教授，在读博士.

李庆伟(1955－)，男(汉族)，教授，博士.