江陵凤凰山168号墓西汉古尸组织血型物质的验证

张杨，吴顺清，魏彦飞 （荆州文物保护中心技术研究部，湖北 荆州434020）

吴晶晶，吴刚珂，袁万博 ，李俊立 长江大学荆州临床医学院

荆州市中心医院检验医学部，湖北 荆州434020

我国文物考古工作者1975年在湖北省江陵县（今荆州市）纪南城凤凰山一六八号墓中发现的西汉古男尸出土近40年，是当时我国发现的时代最早的一具古尸。古尸出土后长期浸泡在由福尔马林配制的保存液中，为了解西汉古尸的血型物质保存情况，采集其左上臂肌肉，运用抑制凝集试验的方法，对古尸血型进行了验证。

1 材料与方法

1.1 实验材料

抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体），效价≥1∶128，上海血液生物有限公司，批号：20130612，4℃冰箱保存；百分之一红细胞悬液，取健康人的A型、B型红细胞各3份，用生理盐水洗涤3次，制成压积红细胞，按1∶100的比例制成红细胞悬液；所验证组织取自于西汉古尸左上臂肌肉组织，对照组织为已知血型为O型的人肝脏组织。一次性使用培养板，浙江拱东医用塑料厂，批号：100607。

1.2 方法

取古尸左上臂肌肉组织及已知O型血人肝脏组织少量，分离成细丝状，用生理盐水洗涤两次后，分成二等分放入一次性使用培养板的五个凹孔中。

取5支洁净玻璃试管，分别标记1～5号，每管加入500μL生理盐水，再取500μL抗A血型定型试剂加入1号小试管中混匀后，从1号试管中吸出500μL加入2号试管中混匀，依次类推直至5号试管，最后从5号试管吸出500μL弃去。抗B血型定型试剂倍比稀释同上步骤。

向已分成二等分的古尸左上臂肌肉组织及已知O型血人肝脏组织的凹孔中分别滴加不同稀释倍数的抗A、抗B血型定型试剂100μL，置室温中2h，然后放置4℃冰箱72h，接着取出至室温下平衡。从凹孔中吸出已被吸收的抗A、抗B血型定型试剂各50μL放置另一洁净凹孔中，用生理盐水倍比稀释，再滴加相应的已配制好的1∶100红细胞悬液50μL，摇匀后室温放置10min，显微镜下观察是否发生凝集现象。若发生凝集现象则说明组织中不含相应的A、B血型物质，若不发生凝集现象则说明组织中含有相应的A、B血型物质。

2 结果

将所用抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）稀释成1／2、1／4、1／8、1／16、1／32的倍数分别进行试验，红细胞悬液与左上臂肌肉组织浸泡过的抗A、抗B血型定型试剂均未发生凝集，与肝脏组织浸泡过的抗A、抗B血型定型试剂均发生了凝集，结果表1，凝集情况分别见图1、图2、图3、图4。

表1 两种组织的抑制凝集试验结果

图1 古尸组织＋抗A血型定型试剂，红细胞不凝集

图2 古尸组织＋抗B血型定型试剂，红细胞不凝集

图3 肝脏组织＋抗A血型定型试剂，红细胞凝集

图4 肝脏组织＋抗B血型定型试剂，红细胞凝集

3 讨论

江陵凤凰山西汉古尸的发现是我国考古工作的重大发现，对其血型的验证是对古尸研究的重要课题之一。某些血型抗原以可溶解的形式存在于血清、血浆、唾液、尿液［1～5］等体液中，也可以非溶解性物质的形式存在于发、骨、皮肤等组织中，这些血型物质可以中和相应的抗体。古尸出土前长期浸泡在棺液中，而出土后又浸泡在保存液中已经长达近40年，无法采取其体液等进行试验，故本研究采取了其左上臂肌肉组织进行检测。

组织中可溶性抗原与特异性抗体一定时间的接触而被中和，这些中和抗体的过程抑制了该抗体对红细胞的凝集反应，按照这种原理，笔者对古尸组织进行了不同滴度特异性抗体的抑制凝集试验，古尸血型物质被成功检出，而且结果相对稳定。国内外均有关于古尸的毛发、骨组织、肌组织等血型检测的报道［6～8］，也表明保存相对较好的古尸在千年后仍可检测出ABO血型，可能是因为A及B血型物质是多糖－氨基酸复合物，由半乳糖和氨基酸（即N－乙酰氨基葡萄糖）聚合而成［3，4，9］，结构比较稳定，不与含甲醛等化学物质的保存液产生化学反应。

就实验而言，本研究采用的抑制凝集试验方法中，同时进行了已知血型组织作为对照，且检出结果正确，这就保证了对古尸所检出血型结果为AB型的准确性，且与40年前所鉴定的结果一致［6］。此方法虽然用材量较多，反应时间较长，但操作易于掌握，结果可靠。

由此可见，本例西汉古尸的血型检出，表明其出土近四十年仍保存较好，血型物质未被破坏，亦表明ABO血型是人类基因遗传重要特征之一［10～11］，两千一百多年前的人类与现在的人类均有ABO血型系统，为人类早已形成的特征。检出血型结果与40年前所鉴定结果一致，也表明了所使用的保存液对血型物质起到了很好的保护作用。

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