通塞脉片对慢性低灌注大鼠脑损伤的保护作用探索

张 聪 尤奋强

（南京中医药大学·210000）

慢性低灌注是指各种原因引发的长期脑血流灌注不足，在血管性痴呆（VD）、Bins wanger病、Alzheimer's disease（AD）等多种神经系统疾病的发生发展过程起着重要的作用，慢性低灌注引发的各种脑损伤近年来发病率呈上升趋势。探索一种既可以最大限度地减少医源性风险又能有效地保护大脑的药物是当今医疗界所面临的重要课题。中成药通塞脉片具有活血祛瘀通络、益气养阳的功效，由金银花、黄芪、当归、玄参、和石斛六味药组成，是临床治疗缺血性脑中风的特效药，并且对闭塞性动脉硬化症，静脉血栓形成都有满意的疗效。研究发现，通塞脉片对大脑中动脉栓塞模型有保护作用，能促进血流恢复，增加缺血区的血流灌注量，改善脑组织缺血缺氧状态。因此，我们推测，通塞脉片很可能参与血管性痴呆的保护作用，这有待于进一步的研究，这些问题的解决，将为临床治疗血管性痴呆提供新的策略。

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级wistar大鼠,60只,雄性,体重200～240g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。

1.2 大鼠慢性低灌注模型制备

慢性低灌注模型采用大鼠双侧颈总动脉结扎（2VO）。按实验设计随机分组，手术前先将实验大鼠断食12小时，断水6小时。称量体重，用10%水合氯醛腹腔注射（0.3ml/100g）进行麻醉。手术台为恒温操作台，仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离出左右颈总动脉进行永久性结扎。实验结束后，大鼠常温分笼饲养。

1.3 药物来源及给药方案

通塞脉片由江苏南星药业有限责任公司提供。本方案大鼠共分为3组，分别为假手术组、模型组和治疗组。模型组与治疗组构建大鼠慢性低灌注2VO 模型，治疗组给予通塞脉灌胃治疗(12.44g/kg.d)。

1.4 Morris水迷宫的原理

Morris水迷宫是英国心理学家Morris设计并应用于脑学习记忆机制研究的一种实验手段。测试程序主要包括定位航行试验和空间探索试验两个部分。其中定位航行试验(place navigation)将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中若干次,记录其寻找到隐藏在水面下平台的时间(逃避潜伏时间,escape latency)。空间探索试验(spatial probe)是在定位航行试验后去除平台,然后任选一个入水点将大鼠放入水池中,记录其在一定时间内的游泳轨迹,考察大鼠对原平台的记忆。

1.5 Morris水迷宫的试验方法

将实验大鼠头朝池壁放入水中，放入位置随机取东、西、南、北四个起始位置之一。记录动物找到水下平台的时间（s）。在前几次训练中，如果这个时间超过60s，则引导动物到平台。让动物在平台上停留10s.将大鼠移开、擦干。每只大鼠每天训练4次，两次训练之间间隔15~20min,连续训练5d。最后一次获得性训练结束后的第二天，将平台撤除，开始60s的探查训练。将动物由原先平台象限的对侧放入水中。记录动物在目标象限（原先放置平台的象限）所花的时间和进入该象限的次数，以此作为空间记忆的检测指标.测定动物的工作记忆（working memory）。探查训练结束后的第二天，开始维持4天的对位训练。将平台放在原先平台所在象限的对侧象限，方法与获得性训练相同。每天训练4次。每次记录找到平台的时间和游泳距离以及游泳速度。

2 结果

2.1 治疗两周组Morris水迷宫结果对比

分别对两个对照组别的三个小组假手术组，模型组以及治疗两周组的实验对象进行Morris水迷宫测试，对实验对象的空间认知能力和记忆力做出判断，测定结果参见图2.1,、图2.2和图2.3。

图2.1 2周组大鼠学习Morris水迷宫潜伏时间成绩

图2.2 2周组大鼠学习Morris水迷宫游泳里程成绩

图2.3 2周组大鼠学习Morris水迷宫平台象限时间成绩

2.2 治疗四周组Morris水迷宫结果对比

分别对两个对照组别的三个小组假手术组，模型组以及治疗四周组的实验对象进行Morris水迷宫测试，对实验对象的空间认知能力和记忆力做出判断，测定结果参见图2.4,、图2.5和图2.6。

图2.4 4周组大鼠学习Morris水迷宫潜伏时间成绩

图2.5 4周组大鼠学习Morris水迷宫游泳里程成绩

图2.6 4周组大鼠学习Morris水迷宫平台象限时间成绩

3 结论与讨论

本研究考察了不同治疗时间的通塞脉对大鼠慢性低灌注脑损伤的保护作用两个对照组别的实验对象分别进行Morris水迷宫实验，发现慢性低灌注大鼠模型潜伏时间较长，游泳路程较长，平台象限时间较短，通过通塞脉片治疗的实验组随着治疗时间的延长，水迷宫实验结果有所改善，说明通塞脉片在对大鼠脑损伤治疗起到了一定作用。有研究发现，当归作为通塞脉片中的君药，其有效成分当归内酯能减少局灶性的脑缺血损伤。有效成分藁本内酯具有良好的改善微循环作用,可用于防治与微循环障碍有关的疾病。以上机制只是结合已有研究所做猜测，其确切的保护作用机制有待进一步研究。

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