地黄健忆丸治疗老年痴呆症的药效学研究

张德志

（哈尔滨凯程制药有限公司·150025）

目前我国已经进入老龄化高峰期，老年痴呆的患病率也越来越高。老年痴呆给患者本人、家庭和社会造成沉重的负担，是老龄化社会必须要面对的一个重要卫生问题[1]，开发治疗老年痴呆的中药新药是目前业内关注的重点。地黄健忆丸是在地黄饮子的基础上加减而成，本实验在前期药学研究的基础上根据功能主治，通过该药对模型动物空间记忆能力、被动回避条件反射记忆的影响观察其改善痴呆后记忆作用，及对模型动物脑组织SOD、MDA影响的药效研究验证其防治痴呆的作用。

1 实验材料

1.1 实验动物

小鼠，清洁级，体重18～22g，雌雄各半，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京 )2012-0001。

1.2 实验药物

地黄健忆丸，自制具有补肾益精、健脑益智的功效，用于肾虚型痴呆病的健忘失认等。口服，一日3次，一次4～6g。饭后服用，或遵医嘱。批号131105

复方活脑舒胶囊：吉林省辉南长龙生化药业股份有限公司。功能主治：补气养血，健脑益智，用于健忘气血亏虚证，记忆减退，倦怠乏力，头晕心悸，以及老年性痴呆以上症状的改善。用法用量：口服，一次3粒（重症5粒），一日2次，饭后服；12～15天为一疗程。规格：每粒装0.25g。批号130706。

1.3 实验试剂

Aβ25-35由美国Singma公司提供，货号：A4559、生理盐水、多聚甲醛、水合氯醛等常规试剂均为市售。

1.4 实验仪器

脑立体定位仪，型号：ST51600美国；程控水迷宫，型号：SMG-2中国医学科学院药物研究所制；程控避暗箱，型号：SBA-2中国医学科学院药物研究所制；半自动生化仪，型号：70VB0370法国。

2 实验方法

2.1地黄健忆丸对AD模型小鼠水迷宫潜伏期的影响

2.1.1 AD小鼠模型制备[2]小鼠均用戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后固定在脑立体定位仪上，剪开头顶部皮肤，酒精棉擦拭，暴露出前囟，采用右侧脑室定位，自前囟向后1.8mm，矢状缝旁开1.5 mm，颅骨表面向下2.5mm处注射3μLAβ25-35 (2μg/μL，无菌生理盐水配制)，假手术组用同样方法注射等体积的无菌生理盐水。留针2min后拔针，缝合头皮。上述操作均在无菌条件下进行。

2.1.2 动物分组和给药方法 取模型制备成功的小鼠50只，适应性饲养1w后随机均分为5组：AD模型组、地黄健忆丸低、中、高剂量组(1.17g/kg、2.34g/kg、4.68g/kg)、复方活脑舒胶囊阳性对照组（0.195g/kg）。另取10只同样方法操作但注射生理盐水的小鼠作为假手术组。假手术组及模型组均给予等体积生理盐水。各组均给药20天。

2.1.3 小鼠水迷宫潜伏期测定 给药第10天，开始手术造模。术后第3天进行小鼠学习训练（训练方法：小鼠由固定位置入水后，观察其在300s内找到出口到达平台的时间即潜伏期，若小鼠不能在300s内到达平台，则由实验人员引领其到达。实验学习及测试过程保持室内安静，周围实验人员及物体位置固定不变），每天1次，每次300s，连续2天。术后第6天测定小鼠学习情况，记录每只鼠的潜伏期，作为小鼠记忆学习成绩。

2.2 地黄健忆丸对AD模型小鼠避暗箱潜伏期的影响

模型制备、动物分组及给药方法同上。给药第10天，开始手术造模。术后第7天进行小鼠避暗箱测试训练。每日1次，连续2天，每次180s。训练及测试过程保持室内安静，周围实验人员及物体位置固定不变。术后第9天测定小鼠学习情况，记录每只鼠第一次进入暗箱时间即潜伏期及180s内的错误次数，作为学习记忆成绩。

2.3 地黄健忆丸对AD模型小鼠脑组织SOD、MDA含量的影响

脑组织SOD含量测定：做完暗箱实验和水迷宫各实验组小鼠断头，冰盘上取脑，弃去嗅球和小脑，称量左侧皮质脑组织100 mg左右，用预冷的生理盐水制成1%匀浆，3 000 r/min，离心10 min，取上清液，测定方法按照试剂盒说明书。

脑组织MDA含量测定：取材同上，制成10%匀浆，3 000 r/min，离心10 min，取上清液，测定方法按照试剂盒说明书。

2.4统计分析

3 实验结果

3.1 地黄健忆丸对AD模型小鼠水迷宫潜伏期、避暗箱潜伏期的影响

结果见表1。

表1 地黄健忆丸对AD模型小鼠水迷宫潜伏期、避暗箱潜伏期及错误次数的影响（）

表1 地黄健忆丸对AD模型小鼠水迷宫潜伏期、避暗箱潜伏期及错误次数的影响（）

与模型组比较，*p＜0.05,**p＜0.01 与假手术组比较，▲p＜0.05, ▲▲p＜0.01

水迷宫潜伏期（s） 避暗箱错误次数 潜伏期（s）假手术组 10 等体积 86±43.13 2.0±2.79 184.8±99.42模型组 10 等体积 146.3±39.4▲▲ 6.0±2.85▲ 85.3±31.13▲▲高剂量组 10 4.68 85.3±39.51** 3.5±2.38* 133.0±64.06*中剂量组 10 2.34 90±47.99** 4.3±4.52 138.6±65.72*低剂量组 10 1.17 104.3±48.7 4.0±3.21 125.1±55.08阳对组 10 0.195 81.1±37.94** 2.8±2.99* 142.1±73.89*组别 只数(n)剂量(g/kg)

由上表可见，与假手术组比较，模型组避暗箱错误次数及潜伏期及水迷宫潜伏期均明显增高，差异具有显著性意义（P＜0.05），说明AD模型制备成功；与模型组比较，各给药组避暗箱错误次数均有所降低，高剂量组、阳对组与模型组比较差异有显著性意义（P＜0.05）。与模型组比较，各给药组避暗箱潜伏期均有所增加，高、中剂量组、阳对组与模型组比较差异有显著性意义（P＜0.05）。与模型组比较，各给药组水迷宫潜伏期均有所降低，高、中剂量组、阳对组与模型组比较差异具有极显著性意义（P＜0.01）。说明地黄健忆丸对AD模型小鼠被动回避条件反射记忆功能及空间记忆功能具有一定改善作用。

3.2 地黄健忆丸对AD模型小鼠脑组织SOD活性的影响

结果见表2

表2地黄健忆丸对AD模型小鼠脑组织MDA 、SOD活性的影响（ ±S）

由上表可见，与假手术组比较，模型组SOD显著降低、MDA显著增高，差异具有显著性意义（P＜0.05），说明AD模型制备成功；与模型组比较，各给药组SOD含量均有所升高、MDA含量均有所降低，但高剂量组、阳对组SOD含量与模型组比较差异有极显著性意义（P＜0.01），中、低剂量组与模型组比较差异有显著性意义（P＜0.05）。MDA含量高、中、低剂量组、阳对组与模型组比较差异有极显著性意义（P＜0.01）。

4 讨论

老年痴呆是一种以高级认知功能障碍为特征的神经退行性病变，主要病理基础为广泛的神经元丢失、脑内神经元纤维缠结(NFT) 和老年斑(SP) 的出现。[3]以淀粉样蛋白(Aβ) 为核心聚集和沉积而形成 SP 是其重要的发病机制，已有的证据充分表明Aβ在老年痴呆的发病过程中起到至关重要的起始及枢纽作用[4],因此本实验采用小鼠脑内注射Aβ25-35方法制备制备老年痴呆模型。

老年痴呆主要表现为记忆障碍或失语、失用、失认、执行功能障碍等其中，记忆功能障碍严重影响患者的日常生活、职业活动和社交功能。[5]对老年痴呆记忆功能的改善将有利于改善此类患者的生活质量。老年痴呆属于中医“痴呆”范畴。痴呆作为一种疾病，早在先秦时期就有类似记载。老年痴呆的发生虽然与五脏相关，但与肾的关系最为密切，肾精亏虚是老年痴呆发病的根本。[6]地黄健忆丸是在地黄饮子的基础上加减而成具有补肾益精、健脑益智的功效,地黄健忆丸具有缩短水迷宫潜伏期、延长避暗箱潜伏期及减少错误次数的作用；给予该药后模型动物脑组织SOD活力增高、MDA含量降低，本研究证明了地黄健忆丸具有改善痴呆模型脑组织损伤改善其记忆功能的疗效。

综上，在老年痴呆的发病机制中Aβ毒性在其发病中占有重要作用，为此本研究以此发病机制的老年痴呆模型为基础，经过研究确证了地黄健忆丸改善模型动物的学习记忆能力，且该作用与药物自身抗氧化作用有相关性。然而地黄健忆丸为中药制剂成分复杂性，其防治老年痴呆的机制有待进一步研究。

[1] 雷婷.马亚娜.探讨老年痴呆疾病经济负担的评价方法,现代预防医学 [J].2010（38）18：3491-3493.

[2] 王红梅，宋彩梅，刘新民等.六味地黄丸对肾虚型老年痴呆动物模型的改善作用,中国实验方剂学杂志[J].2012（18）5：112-116.

[3] 吴建明，马娜，张鸿程等.舒肝解郁胶囊对老年痴呆小鼠学习记忆能力的改善作用.中国实验方剂学杂志[J].2015（21）1：126-129.

[4] 肖增平,吉爱国. 老年痴呆的发病机制及治疗的研究进展,中国老年学杂志[J], 2008（28）1：95-97.

[5] 盛树力.老年性痴呆的治疗和护理[M].北京：科学技术文献出版社，2000：17.

[6] 胡永年,周岚.老年痴呆基本病机的理论探讨.中国中医基础医学杂志 [J], 2005（11）11：805-807.