RP-HPLC法测定保健食品中阿魏酸、异阿魏酸含量

张荣涛

（天津市天狮生命科学与技术研究院，天津301700）

RP-HPLC法测定保健食品中阿魏酸、异阿魏酸含量

张荣涛

（天津市天狮生命科学与技术研究院，天津301700）

建立RP-HPLC色谱测定女士保健食品中阿魏酸、异阿魏酸含量的方法。采用70%甲醇加热回流提取方法处理样品，用YMC-C18色谱柱分离，梯度洗脱，以阿魏酸、异阿魏酸为标准物质，用PDA检测器分别在320 nm波长处检测。结果表明，标准物质阿魏酸、异阿魏酸的保留时间分别为9.2 min和9.8 min，不存在干扰，分离度大于1；分别在4.5 μg/mL～45.8 μg/mL、7.2 μg/mL～36.0 μg/mL浓度范围比值呈良好的线性关系（r＞0.999 2），样品日内精密度的RSD小于2.2%，样品平均加样回收率：阿魏酸为99.5%、异阿魏酸97.2%。

阿魏酸；异阿魏酸；PDA

目前中国市场上主流的女性保健食品是以美容养颜、补气养血、安神助眠为主要功能的。而以改善女性性功能为导向改善女性免疫力、缓解女性体力疲劳方向的功效产品，在中国保健品市场尚处于真空状态。该方法对女士保健食品中功效成分阿魏酸、异阿魏酸含量同时进行综合测定。

1 仪器、试剂及原料

WATERS2695型高效液相色谱仪：美国WATERS公司；高效液相色谱柱：ODS-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μL，日本）；XS-205型电子天平：Mettler-Toldo公司；对照品阿魏酸、纯度99.6%异阿魏酸：中国药品生物制品检定所；乙腈：色谱纯，美国FISHER公司；超纯水：由Milli-Q超纯水系统制备，其它试剂均为分析纯；原料：改善女性亚健康女士保健食品，天津市天狮生命科学与技术研究院。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱为ODS-C18柱（4.6mm×250mm，5μm，12m），柱温：25℃，洗脱方式：梯度洗脱。洗脱条件见表1。

流量：1.0 mL/min；检测波长：320 nm；进样体积：20 μL。

表1 色谱洗脱条件Table 1 Chromatographic elution conditions

2.2 标准溶液配制

用十万分之一电子天平精确称量阿魏酸、异阿魏酸标样，以70%甲醇配制成45.8、36.1 μg/mL标准溶液，备用。

2.3 样品处理

精密称量女士中药保健品配方原料0.500 0 g，用70%甲醇70℃水浴回流提取30 min，定容100 mL，用0.45 μm针孔滤膜过滤，过滤液为待测液。

3 结果

3.1 方法专属性

按2.1所述色谱条件，标准物质阿魏酸、异阿魏酸的保留时间分别为9.2 min和9.8 min，不存在干扰，分离度大于1.2，峰形良好，如图1所示。

图1 标准物质阿魏酸与异阿魏酸图谱Fig.1 Chromatogram of standard ferulic acid and isoferulic

图2～图3为RP-HPLC法测定女士中药保健品水溶性提取物中阿魏酸、异阿魏酸的色谱图与光谱图。在图2中，女士中药保健品内源性物质320 nm不存在干扰物质，专属性强。图3，阿魏酸与异阿魏酸200 nm～400 nm光谱图相似。

图2 样品中阿魏酸与异阿魏酸图谱Fig.2 Chromatogram of sample ferulic acid and isoferulic

图3 样品中阿魏酸（上）与异阿魏酸（下）光谱图Fig.3 Spectrum of sample ferulic acid（up）and isoferulic（down）

3.2 线性

标准品阿魏酸溶液稀释配制成36.64、27.48、18.32、9.16、4.58 μg/mL标准溶液，分别进针测试其对应峰面积如图所示：4 465 917.371、3 549 910.16、2 685 182.62、1 793 455.08、888 727.54、445 863.77（MV*S）；标准品异阿魏酸溶液浓度及对应出峰面积：

36.0 、28.8、21.6、14.4、7.2 μg/mL标准溶液，峰面积为2 720 568.4、2 186 454.7、1 692 341.08、1 078 227.39、554 113.6（mV·s）。

图4 阿魏酸标准曲线Fig.4 Standard curve of ferulic acid

图4标准曲线数据显示，阿魏酸在4.5 μg/mL～36.6 μg/mL之间表现出良好的线性关系，R2值大于0.999 9。

图5 异阿魏酸标准曲线Fig.5 Standard curve of isoferulic acid

图5标准曲线数据显示，阿魏酸在7.2 μg/mL～36.0 μg/mL之间也表现出良好的线性关系，R2值大于0.999。

3.3 精密度

3.3.1 阿魏酸日间精密度

取阿魏酸标准线性内高、中、低36.64、18.32、4.58 μg/mL 3点进行测试，每次平行进样2次，日内间隔4 h连续测试6次，见表2。

3.3.2 异阿魏酸日间精密度［1］

取异阿魏酸标准线性内高、中、低三点测试，结果见表3。

表2 阿魏酸测定日精密度6次进样Table 2 The result of ferulic acid's precision

表3 异阿魏酸测定日精密度6次进样Table 3 The result of isoferulic acid's precision

结果显示，阿魏酸低、中、高3个浓度样品的日内精密度的RSD分别为：1.9%、1.2%、2.2%；异阿魏酸低、中、高3个浓度样品的日内精密度的RSD分别为：0.5%、1.1%、0.8%。

3.4 回收率

采用加标回收法测试方法准确度［2］，加入样品溶液80%、100%、120%浓度水平［3］标准物质进行测试，计算回收率见表4。

表4 阿魏酸加样回收［4］Table 4 Collection of adding standard ferulic

阿魏酸回收率：高、中、低三浓度标准加样回收率分别是101%、100.1%、98.6%

异阿魏酸回收率：高、中、低三浓度标准加样回收率分别是97.9%、98.3%、98.9%。

实验数据显示对阿魏酸与异阿魏酸的含量测定方法适应性是满足要求的。

表5 异阿魏酸加样回收Table 5 Collection of adding standard isoferulic

3.5 检出限

以10倍的信噪比［5］考察方法检出限，其异阿魏酸注入浓度为1.2 μg/mL、阿魏酸注入浓度值0.3 μg/mL。

4 结论与讨论

本试验是针对一款改善女性亚健康状态的中药复方保健产品开发，旨在同时对其产品功效成分阿魏酸、异阿魏酸进行一次性准确测试的方法。中药保健食品多属于中药复方产品，含有多种提取药材，功效因子相互干扰，功效成分不易分离、定量测定。本实验通过建立并优化梯度洗脱方法对混合异构体（阿魏酸、异阿魏酸）进行了准确分离，摸索创建了一种较传统方法更为实用的测试方法。阿魏酸、异阿魏酸线性R2＞0.999、平均回收率＞98%、日间中间精密度＜2.2%、检测限度不低于1.2 μg/mL。结果表明其线性、专属性、准确度、精密度、检测限度均在合理变化范围之内。

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Determination the Content of Ferulic Acid and Isoferulic Acid in One Health Care Product by RP-HPLC

ZHANG Rong-tao
（Tianjin tiens academy of life science and technology，Tianjin 301700，China）

To found the method of determination the content of Ferulic acid，Isoferulic acid in one female herbal health-care product.Using 70%methanol heating reflux extraction，using HPLC with YMC-C18，equal elution，and having Ferulic acid，Isoferulic as standard material l，separated and determined it with PDA detector at 320 nm.Experiment result proved that Ferulic acid，Isoferulic acid was able to have good retained time at 9.2 min and 9.8 min，and no interference，separation degree＞1，Respectively in 4.5 μg/mL-45.8 μg/mL，7.2 μg/mL-36.0 μg/mL those are good linear relationship between the ratio （r＞0.999 0）.The recovery rate：Ferulic acid was 99.5%，Isoferulic acid 97.2%。

ferulic acid；isoferulic acid；Photo-Diode Array

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.04.033

2013-12-09

张荣涛（1978—），男（汉），副研究员，硕士，研究方向：保健食品功效成分分析及验证。